Salt og mannitolagar Begrundelse, forberedelse og anvendelser

4104
Anthony Golden

Det salt og mannitolagar eller salt mannitol er et fast, selektivt og differentieret kulturmedium. Det blev oprettet af Chapman til isolering af patogene Gram-positive kokker, især Staphylococcus aureus.

Det er dog også nyttigt til isolering Staphylococus epidermidis, som undertiden kan være til stede som et opportunistisk patogen, og Staphylococcus saprophyticus, anerkendt urinpatogen blandt andre arter.

A. Fiola med tilberedt salt mannitol-agarmedium. B. Saltede mannitol-agarplader podet med gærende og ikke-gærende mannitol-bakteriestammer. Kilde: A og B: Billeder taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Nogle Enterococcus er i stand til at vokse på dette medium såvel som visse Gram-positive sporedannende stænger..

Dette medium er meget nyttigt i analysen af ​​kliniske prøver, men det bruges også i den mikrobiologiske undersøgelse af fødevarer og i kvalitetskontrol af industriprodukter, såsom kosmetik, medicin, blandt andre..

Salt mannitolagar består af ekstrakter og peptoner fra oksekød, triptein, mannitol, natriumchlorid, phenolrød og agar.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Afsluttende overvejelser
  • 6 Referencer

Basis

Mannitol agar er selektiv takket være sin høje saltkoncentration. Saltholdighed fungerer som et hæmmende stof og forhindrer væksten af ​​gramnegative bakterier.

Det er også forskelligt på grund af tilstedeværelsen af ​​carbohydratmannitol og den fenolrøde pH-indikator. Ud fra dette producerer bakterier, der er i stand til at fermentere mannitol, syrer, forsyrer mediet, gør kolonierne og mediet gule..

På den anden side vokser kolonier, der ikke fermenterer mannitol, i mediet og tager næringsstofferne fra kødekstrakter og peptoner og triptein. Derfra ekstraherer bakterierne kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for deres vækst..

Kolonierne kan i dette tilfælde være svage eller stærke lyserøde, og mediet forbliver den samme farve eller skifter til fuchsia.

Agar er det stof, der giver mediet konsistens.

Forberedelse

Til fremstilling af en liter salt mannitolagar afvejes 111 g af det dehydratiserede medium fra det foretrukne kommercielle firma og opløses i 1000 ml destilleret vand under anvendelse af en kolbe..

Varme påføres under hyppig omrøring af mediet for at forbedre opløsningsprocessen. Kog et minut.

Anbring kolben i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Ved slutningen af ​​tiden fjernes kolben fra autoklaven, den hviler og serveres mellem 15 og 20 ml på sterile petriskåle, når temperaturen er ca. 50 til 55 ° C..

Det er tilladt at størkne, bestilles på en omvendt måde i plaqueros og opbevares i køleskabet indtil brug. Før du så en prøve, skal du vente på, at pladen når stuetemperatur.

Pladerne frøes ved striber eller ved overfladesejning med en drigalski-spatel. Det færdige medies endelige pH skal være 7,4 ± 0,2

Farven på det dehydratiserede medium er lys beige, og farven på det fremstillede medium er orange rød.

Ansøgninger

På grund af sin høje selektivitet er dette medium ideelt til såning af prøver med blandet flora, hvor du vil se efter tilstedeværelsen af Staphylococus aureus, som det vigtigste patogen i denne slægt.

I denne forstand er en af ​​dens hyppigste anvendelser i mikrobiologisk analyse af svælgudsugninger og næseudladningsprøver, især for at detektere asymptomatiske bærere af S. aureus.

Nogle lande har implementeret denne analyse som et obligatorisk krav for folk, der ønsker at arbejde som fødevareleverandører..

Denne kontrol forhindrer ansættelse af transportører af S. aureus, og dermed undgå massiv madforgiftning, på grund af forbrug af fødevarer forurenet med stafylokok enterotoksin.

Det kan også inkluderes i såning af sårinfektioner, blodkulturer, CSF, bronchoalveolær skylning, blandt andre.

Saltet mannitolagar er nyttig til re-isolering af kolonier fra urinkulturer fra CLED-agar eller blodagar, hvis gram har afsløret grampositive kokker i klynger..

Det er også gyldigt i den mikrobiologiske analyse af mad, drikkevand, jord, blandt andre anvendelser..

QA

Når et parti plader med salt mannitolagar er forberedt, tilrådes det at udføre en kvalitetskontrol. Kontrolstammer sås for at vise, om der er vækst af det samme eller ej.

Som positiv kontrol kendte stammer af Staphylococcus aureus. Det skal vokse tilfredsstillende under udvikling af gule kolonier, og mediet får også den samme farve.

Ligeledes er det praktisk at inkludere en kendt stamme af Staphylococcus epidermidis. Skal vokse tilfredsstillende under udvikling af lyserøde kolonier, og mediet forbliver den samme farve eller mørkere til en stærkere lyserød.

Som en negativ kontrol anvendes stammer, der ikke skal vokse på dette medium. For eksempel en kendt stamme af Escherichia coli eller Klebsiella pneumoniae. Det forventede resultat er fuldstændig inhibering, dvs. ingen vækst..

Derudover skal en uinokuleret plade inkuberes. I den skal der ikke være nogen vækst eller farveændring.

Det er vigtigt, at pladen ikke bruges, hvis der er tegn på forringelse, såsom forurening, dehydrering, misfarvning, blandt andre.

Afsluttende tanker

Når du bruger salt mannitol-agarmedium, er der nogle vigtige aspekter, der skal overvejes:

-At opnå en vækst af gule kolonier indikerer ikke, at det er det Staphylococcus aureus. Det skal huskes, at nogle stammer af Enterococcus er i stand til at vokse i dette medium og fermentere mannitol såvel som visse Gram-positive sporedannende stænger..

Derfor er det vigtigt at udføre en gram på kolonien og en katalasetest..

-På den anden side skal det betragtes som andre andre arter af Staphylococcus end aureus de er også i stand til at fermentere mannitol. Derfor er det vigtigt at subkulturere kolonien til en næringsvæske, der skal tages derfra og udføre koagulasetesten..

Blandt Staphylococcus-arter af klinisk betydning for mennesket, som gærer mannitol, er: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, blandt andre.

Andre kan give en variabel reaktion, dvs. undertiden positiv og undertiden negativ. Nogle er S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. warneri, S. intermedius, blandt andet.

-Det anbefales ikke at tage kolonier direkte fra mannitolagar for at udføre koagulasetesten, da den høje saltkoncentration af mediet kan forstyrre resultatet..

-Endelig anbefales det at inkubere pladerne podet med salt mannitol i op til 48 timer, fordi nogle stammer af S. aureus kan langsomt fermentere mannitol, selvom dette er sjældent.

Referencer

  1. Britannia Laboratories. Salt mannitol agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  2. "Salt mannitol agar". Wikipedia, The Free Encyclopedia. 31. okt 2018, 19:08 UTC. 17. januar 2019, 20:55, tilgængelig på: en.wikipedia.org.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, redaktionelt Panamericana S.A.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Argentina. Redaktionel Panamericana S.A
  5. BD Laboratories. BD Mannitol Salt Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.

Endnu ingen kommentarer