TCBS Agar-begrundelse, forberedelse og brug

2217
Alexander Pearson

Det TCBS agar er et meget selektivt og differentieret fast dyrkningsmedium, der anvendes til isolering og dyrkning af bakterier af slægten Vibrio, især Vibrio cholerae, V. vulnificus Y V. parahaemolyticus som de vigtigste patogener i denne slægt.

Forkortelsen TCBS står for thiosulfatcitratgaldesucrose. Denne agar er også kendt som et selektivt medium til Vibrios. Den originale formel blev oprettet af Nakanishi og senere modificeret af Kobayashi.

Kommercielt TCBS medium og TCBS agarplade podet med Vibrio cholerae. Kilde: foto 1: taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, Indien [Public domain]

Det består af gærekstrakt, kødpepton, triptein, natriumcitrat, natriumthiosulfat, oksegald, saccharose, natriumchlorid, jerncitrat, bromothymolblåt, thymolblåt og agar..

Denne sammensætning tillader en tilstrækkelig udvikling af Vibrio-arter fra prøver fra vand, mad og afføring; undtagen Vibrio hollisae, der ikke vokser i dette miljø. Desuden er TCBS-medium i stand til at hæmme væksten af ​​andre ledsagende bakterier, især coliforme..

På grund af de alvorlige gastrointestinale og ekstra-tarmproblemer, som nogle arter af Vibrio-slægten producerer, er dens diagnose meget vigtig. Mennesker smittes hovedsageligt ved at indtage rå eller underkogte fødevarer fra havet eller forurenet vand, men også gennem sårinfektion.

På grund af dette bør kliniske laboratorier inkludere TCBS-agar i afføringskulturstudiet af flydende afføringsprøver, især med udseendet af risvand. Især hvis patienten rapporterer at have været i kontakt med havvand eller har indtaget skaldyr eller fisk.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 Brug
  • 4 Sået
  • 5 Begrænsning
  • 6 Kvalitetskontrol
  • 7 Referencer

Basis

Gærekstrakt, kødpeptoner og triptein er næringskilden til dette medium. TCBS-agar er imidlertid et ugæstfrit medium for de fleste bakterier..

Dens høje selektivitet gives ved tilsætning af natriumcitrat og oxagald; begge er hæmmende midler, der også tilvejebringer en alkalisk pH til mediet, hvilket begrænser væksten af ​​den ledsagende flora og favoriserer væksten af V. cholerae, blandt andre arter. Især Vibrio cholerae er meget følsom over for surhed.

På sin side afbalancerer natriumchlorid mediet osmotisk. Derudover, da dets koncentration er høj, fungerer den også som et hæmmende middel, der favoriserer væksten af ​​halofile bakterier..

Sucrose er det fermenterbare sukker, der sammen med de blå bromothymol- og thymolblå pH-indikatorer giver mediet dets differentielle karakter. Af denne grund er det med dette medium muligt at differentiere saccharosefermenterende stammer fra ikke-fermenterende..

Kolonier af fermenteringsstammer fra saccharose udvikler gule i farve og vil omdanne mediet fra grønt til gult ved syreproduktion. Ikke-gæringsmidler bliver gennemsigtige, og mediet forbliver den originale farve (grøn).

Ligeledes indeholder dette medium natriumthiosulfat som en kilde til svovl og jerncitrat som et udviklingsmiddel. Begge viser bakterier, der er i stand til at producere hydrogensulfid (farveløs gas). HtoS dannes af thiosulfat, og efter omsætning med jerncitrat dannes der et synligt sort bundfald..

Endelig er agaren den, der giver mediet solid konsistens.

Forberedelse

Vej 89 g af det dehydrerede medium og opløses i en liter destilleret vand. Hjælp med opløsning ved opvarmning og hyppig omrøring. Blandingen kan koges i op til 2 minutter..

Dette medium autoklaveres ikke. Efter opløsning serveres den direkte på sterile plader. Når de størkner, arrangeres de omvendt i plaketter og opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil brug..

Mediet efter tilberedning skal forblive på pH 8,6 ± 0,2.

Farven på det dehydrerede medium er lys beige eller grøn-beige, og farven på mediet er skovgrøn eller blågrøn.

Det er vigtigt at lade pladerne varme op, inden prøverne sås ud..

Brug

Den mest almindelige prøve til isolering af Vibrios er afføring med diarré..

Afføringsprøver, hvis de ikke straks kan podes på det selektive medium, skal de transporteres på Cary Blair-mediet..

For at øge kulturens følsomhed kan afføringen ledes gennem peptonvand ved pH 8,4 som et berigelsesmedium i maksimalt 8 timer, derfra subkultiveres det til TCBS-mediet..

Det skal også tages i betragtning, at nogle stammer af Vibrios kan forårsage septikæmi hos immunsupprimerede patienter, derfor kan de isoleres fra blodkulturer. Ligeledes kan prøver af vand og mad fra havet analyseres, når der er epidemiske udbrud af kolerasygdom..

Sået

Inokulatet af den undersøgte prøve skal være fremtrædende, såningen udføres ved hjælp af strieringsmetoden ved udmattelse. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

De formodede kolonier i Vibrio cholerae de er mellemstore, glatte, uigennemsigtige, tyndkantede og gule i farve på grund af fermenterende saccharose.

Tilsvarende er arten af V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii og nogle V. vulnificus. Andre klinisk vigtige Vibrios arter såsom V. parahaemolyticus gær ikke saccharose og udvikl dig som olivengrønne kolonier.

TCBS agarplade podet med Vibrio parahaemolyticus. Kilde: isis325 Flickr

På den anden side skal man huske på, at nogle stammer af Aeromonas og Plesiomonas, der er oxidase (+), kan vokse i dette medium og udvikle gule kolonier, der kan forvirre klinikeren. Mens nogle stammer af Pseudomonas også oxidase (+) vokser som grønne kolonier ligesom V. parahaemolyticus.

Begrænsning

Oxidasetesten, der er positiv for Vibrio-slægten, bør aldrig udføres fra kolonier opnået fra TCBS-agar, da det opnåede resultat vil være en falsk negativ. Forbindelser i midten forstyrrer denne test stærkt. Derfor skal det udføres fra subkulturer på blodagar..

QA

For at bevise, at mediet er i god stand, anbefales det at så kendte eller certificerede kontrolstammer og observere, om væksten opfylder de forventede egenskaber..

Til dette kan du bruge stammer af:

-Vibrio cholerae - tilfredsstillende vækst (gule kolonier, gennemskinnelig kant).

-Vibrio parahaemolyticus - tilfredsstillende vækst (koloni med grønt centrum og gennemskinnelig kant).

-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - tilfredsstillende vækst (gule kolonier med haloer af samme farve omkring kolonien).

-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - total eller delvis hæmning (små gule eller gennemskinnelige kolonier).

-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853- delvis eller total hæmning (blå kolonier).

-Escherichia coli ATCC 25922 - Hæmmet fuldstændigt.

-Proteus mirabilis ATCC 43071 - Helt eller delvis hæmning. (Små kolonier grønt centrum gennemsigtig kant).

Inkubation af uinokuleret medium bør være uændret.

Referencer

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. TCBS agar. 2009. Tilgængelig på: f-soria.es
  2. BD-laboratorium. BD. TCBS Agar 2003. Tilgængelig på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. TCBS Medium. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Acumedia Laboratories. TCBS Agar. 2016. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer