Lactose bouillon foundation, forberedelse og anvendelser

1595
Charles McCarthy

Det lactose bouillon er et flydende, ikke-selektivt dyrkningsmedium, der hovedsagelig anvendes som et præberigelsesmedium til isolering af Salmonella-stammer fra den mikrobiologiske analyse udført på forarbejdede fødevarer, mejeriprodukter eller vand. Dette anbefales af Den Internationale Kommission for Mikrobiologiske Specifikationer for Fødevarer (ICMPF).

Mediet indeholder enzymatisk fordøjelse af gelatine, kødekstrakt og lactose, stoffer, der er nødvendige for bakterievækst. Derudover er lactose et fermenterbart kulhydrat, derfor er nogle coliforme i stand til at nedbryde det med produktion af gas..

Ammede bouillon med turbiditet. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil

Af denne grund anbefales lactose bouillon af American Public Health Association (APHA) til den formodede undersøgelse af totale og fækale coliforme bakterier, hvilket kvalificerer det som et glimrende alternativ til at erstatte tryptose laurylsulfat bouillon i standardteknikken for det mest sandsynlige antal ( MPN).), Der anvendes til mikrobiologisk analyse af mad, mælk og overfladeprøver, underjordiske, rekreative, husholdnings- og industrielle spildevandsprøver.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Forberigelse
    • 3.2 Analyse af totale og fækale coliforme stoffer
  • 4 Kvalitetskontrol af mediet
  • 5 Referencer

Basis

For den mikrobiologiske analyse af nogle prøver er trinet til berigelse vigtigt for at være i stand til at gendanne en bestemt mikroorganisme, der kan være i meget lav mængde eller under ugunstige forhold, der krænker eller minimerer dens levedygtighed..

Dette er tilfældet med tørrede og forarbejdede fødevarer, muligvis forurenet med Salmonellas sp. I disse tilfælde, hvis bakterierne er til stede, har de lidt fysisk og kemisk misbrug under produktionsprocessen for produktet..

På en sådan måde, at mikroorganismer udsættes for ugunstige faktorer såsom dehydrering, eksponering for hæmmende eller toksiske produkter og overlapningen, der genereres af tilstedeværelsen af ​​andre bakterier i større mængde, blandt andre..

I denne forstand har laktosekraften en reparerende virkning på de beskadigede strukturer i mikroorganismen, hvilket får den til at komme sig og reproducere på en sådan måde, at den kan detekteres.

Ligeledes har lactose-bouillon evnen til at fortynde de hæmmende stoffer, der kan påvirke dens levedygtighed, hvilket tillader dens udvikling. Derudover er den ernæringsmæssige sammensætning af lactose bouillon strategisk for at fremme væksten af Salmonella sp over andre mikroorganismer.

For endelig identifikation, subkultur til andre endelige kulturmedier.

På den anden side tillader sammensætningen af ​​mediet også påvisning af lactosefermenterende mikroorganismer, der producerer gas..

Forberedelse

For at fremstille en liter lactosebuljone skal 13 gram af det dehydratiserede medium vejes og opløses i 1000 ml destilleret vand..

For at hjælpe med at opløse mediet i vandet kan opløsningen opvarmes lidt, men ikke for meget..

Når den er homogen, fremstilles opløsningen som følger: hvis bouillon vil blive brugt til at søge efter coliformer, fremstilles et stativ med reagensglas, hvori et Durham-fermenteringsrør indsættes på hovedet.

Durham-røret er en meget vigtig detalje, fordi det gør det muligt at detektere gasdannelse, data af stor værdi i søgningen efter coliformer.

Når rørene er klar, fordeles der 10 ml af mælkekraften i dem, en mængde, der skal være tilstrækkelig til at dække hele Durham-røret..

Hvis lactose-bouillon skal bruges som en præ-berigelsesbuljong, er det ikke nødvendigt at placere et Durham-fermenteringsrør. I dette tilfælde kræves der en større mængde medium (225 ml), som serveres i 500 ml flasker, bred mund og med et termo-resistent skruelåg..

Derefter autoklaveres rørene eller kolberne ved 121 ° C i 15 minutter..

Mediet skal forblive ved en endelig pH på 6,9 ± 0,2 ved 25 ° C.

Bouillonerne opbevares i køleskabet indtil brug.

Før brug skal bouillon bringes til stuetemperatur.

På den anden side kan lactosekraften også fremstilles i en dobbelt koncentration..

Nogle laboratorier tilføjer bromocresol lilla til laktosekraften som en pH-indikator for at vise rørene, hvor der har været laktosegæring på grund af farveændringen. I dette tilfælde får bouillon en lilla farve, og hvis der er gæring, bliver den gul.

Ansøgninger

I mikrobiologilaboratorier anvendes laktose-bouillon i vid udstrækning, da det er et relativt billigt medium, der giver pålidelige og hurtige resultater (24-48 timer)..

Den kan bruges til analyse af totale og fækale coliforme stoffer i mad og vand eller som en præberigelsesbuljong til Salmonella.

Forberigelse

Forberigelse er et trin før prøveberigelse, hvilket i høj grad forbedrer genopretningen af ​​bakterier af slægten Salmonella i forarbejdede fødevarer..

For at gøre dette podes prøven af ​​den faste mad (25 gram) eller væsken (25 ml) i 225 ml lactose-bouillon, der inkuberes i 24 til 48 timer. Derefter vil den underdyrkes i et beriget medium, såsom selenit cystin bouillon eller tetrathionat bouillon. Gå derefter videre til XLD og SS selektive medier.

Total og fækal coliform analyse

Det er et fremragende medium som en indikator for fækal forurening.

Derfor er lactose bouillon ideel til den formodede fase af studiet af coliforme stoffer efter metoden Most Probable Number..

For prøver, hvor der er mistanke om en stor mængde coliforme, inokuleres en mindre mængde af dem (1 ml), mens for prøver, hvor der er mistanke om en lavere mængde coliforme, inokuleres et større volumen af ​​prøver (10 ml) ..

Til analysen foretages der fortyndinger 10-1, 10-to, 10-3, danner et batteri på 3-5 rør for hver anvendte koncentration.

Fra hver fortynding sås det samme volumen i lactosekraften.

Rørene inkuberes i 24 timer. Negative bouillon inkuberes i yderligere 24 timer.

Fortolkningen af ​​resultaterne foretages ved at observere to karakteristika: den første er tilstedeværelsen eller fraværet af uklarhed, og da dette medium ikke indeholder en pH-indikator, vil der ikke være nogen farveændring..

Det andet er produktion eller ej af gas. Gas kan let påvises i Durham-røret ved udseendet af en eller flere luftbobler indeni..

Det betragtes som positivt, hvis begge egenskaber observeres, det vil sige uklarhed med gasproduktion. Positive rør skal sås igen i bekræftende medier (Brilliant Green Bile 2% bouillon og EF-bouillon).

Kvalitetskontrol af mediet

- Når du forbereder mediet, er det vigtigt ikke at glemme at placere Durhams-rørene, hvis formålet med røret er at studere coliforms..

- Opvarm ikke mediet før sterilisering.

- Fordel i reagensglas inden sterilisering, aldrig efter.

- Må ikke bruges, hvis mediet er mere end 3 måneder gammelt..

- Brug ikke, hvis du observerer ændringer i mediet sædvanlige egenskaber.

- Når du forbereder et parti lactose-bouillon, skal du teste batchens kvalitet ved at plante stammer kendt som Escherichia coli, Enterobacter aerogenes , Citrobacter freundii Y Klebsiella pneumoniae. De vokser meget godt med gasproduktion (positiv kontrol).

- Det kan også omfatte Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis, der vokser godt, men uden gasproduktion (negativ kontrol).

- Det skal bemærkes, at den originale farve på det dehydratiserede medium er beige, og at det fremstillede medium er meget lys og gennemsigtig gul. Hvis der observeres en ændring i farve eller udseende, kan det blive forringet..

Referencer

  1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Miljøbiologi og mikrobiologi. (2013) 1. udgave. University of Cartagenas, Colombia.
  2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. (2009). Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2. udgave Det kemiske fakultet, UNAM. Mexico.
  3. Conda Pronadisa Laboratories. 2017. Dobbelt koncentration af lactose bouillon (European Pharm.)
  4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Sammenligning af teknikker til ekstraktion af coliforme bakterier fra sedimentet i Xochimilco-søen, Mexico. Præst argent. mikrobiol.  2013; 45 (3): 180-184. Tilgængelig på: scielo.org.
  5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Bestemmelse af den mikrobiologiske kvalitet af det artesiske brøndvand i distrikterne i afdelingerne Central, Cordillera og Capital Municipality. Mem Inst. Undersøgelse. Videnskab. Sundhed 2013; 11 (1): 5-14. Tilgængelig fra: scielo.iics.

Endnu ingen kommentarer