Det tetrathionat bouillon eller TT-bouillon er et selektivt flydende dyrkningsmedium til berigelse og udvinding af stammer af slægten Salmonella. Det blev oprettet af Müeller og senere modificeret af Kauffmann, hvorfor der er dem, der kalder det Müeller-Kauffmann-bouillon.
Det oprindelige medium indeholdt proteosepeptoner, calciumcarbonat og natriumthiosulfat. Kauffmann tilsatte galdesalte til det og skabte en anden modalitet med lysegrøn. Disse stoffer hæmmer væksten af coliforme stoffer og efterlader mediet frit til udvikling af patogene bakterier, i dette tilfælde Salmonella.
Ændringen var meget vellykket, fordi den signifikant øgede mediets følsomhed. Af denne grund er det i øjeblikket nyttigt til søgning efter salmonella i enhver type prøve, men især til fast eller flydende afføring og mad..
Dets forberedelse består af to faser; det kommercielle medium er en base til fremstilling af tetrathionat-bouillon og efterfølgende, således at tetrathionatet kan dannes, tilsættes en ioderet iodopløsning for at fuldføre mediet.
American Public Health Association (APHA) anbefaler brug af tetrationat bouillon suppleret med lysegrøn til berigelse af prøver til Salmonella, da det er mere selektivt end tetrationat bouillon og selenit bouillon..
Generelt er tetrathionat bouillon ideel, når der er mistanke om tilstedeværelsen af bakterier af slægten Salmonella i små mængder, eller når de misbruges ved eksponering for hæmmende stoffer eller ved industrielle processer, der minimerer deres levedygtighed..
Artikelindeks
De tilstedeværende peptoner svarer til fordøjelse i bugspytkirtlen af kasein og peptisk fordøjelse af animalsk væv. Disse giver kilden til kulstof, kvælstof og generelle næringsstoffer til bakterievækst..
Natriumthiosulfat reagerer på sin side med den ioderede opløsning til dannelse af tetrathionat. Dette hæmmer væksten af coliforme stoffer og favoriserer udviklingen af bakterier, der indeholder enzymet tetrathionatreduktase, blandt dem er slægten Salmonella, men også Proteus.
Galdesalte fungerer også som et hæmmende stof for de fleste Gram-positive og nogle Gram-negative bakterier (coliforme stoffer)..
Calciumcarbonat absorberer de giftige stoffer, der dannes ved nedbrydningen af tetrathionat, som danner svovlsyre. I denne forstand neutraliserer calciumcarbonat surhedsgraden og holder pH i mediet stabilt..
I tilfælde af den lysegrønne modalitet øger dette stof den selektive kraft af tetrathionat-bouillon ved at hæmme andre mikroorganismer end Salmonella-slægten..
Veje:
Kaliumiodidet opløses i ca. 5 ml sterilt destilleret vand, hvorefter joden tilsættes lidt efter lidt, mens blandingen opvarmes. Efter at den er helt opløst, fyldes op til mærket med sterilt destilleret vand, indtil det endelige rumfang på 20 ml når..
Vej 46 gram af det dehydrerede medium, og suspender det i 1 liter sterilt destilleret vand. Bland og opvarm indtil det er helt opløst, det kan kun koge i et par minutter. Undgå at autoklave. Basen af mediet får lov til at afkøle til ca. 45 ° C, og på det tidspunkt tilsættes 20 ml af den ioderede opløsning..
Efter tilsætning af iodidopløsningen til mediet skal den bruges straks. Hvis du ikke ønsker at bruge hele blandingen, skal du gøre som følger:
10 ml af basemediet fordeles i rør, og kun til dem, der skal inokuleres med prøver, tilsættes 0,2 ml af den ioderede opløsning..
Dem, der ikke skal bruges, kan stadig opbevares i køleskabet, men da mediet ikke steriliseres, er det ideelle at forberede den nøjagtige mængde, der er nødvendig..
Mediets farve inden tilsætning af jodjodopløsningen er mælkehvid med et hvidt bundfald, og efter tilsætning er det brunt med et tæt bundfald. Det observerede bundfald er normalt og svarer til calciumcarbonat, der ikke opløses. Mediets endelige pH er 8,4 ± 0,2.
Til fremstilling af den lysegrønne tetrathionat-bouillon udføres alle de ovenfor beskrevne trin, men derudover tilsættes 10 ml af den lysegrønne opløsning fremstillet ved 0,1% til blandingen..
Denne opløsning fremstilles som følger:
Der afvejes 0,1 g lysegrøn og suspenderes i 100 ml destilleret vand. Varm op til kog for at opnå fuldstændig opløsning. Opbevares i ravflaske.
For afføringsprøver (afføringskultur) er protokollen som følger:
Inokuler 1 g fast afføring eller 1 ml flydende afføring i et rør med 10 ml klar til brug tetrathionat bouillon. Omrystes kraftigt og inkuberes aerobt ved 43 ° C i 6-24 timer.
Tag derefter en alikvot på 10 til 20 µl af bouillon og subkultur i et selektivt medium til Salmonella, såsom SS-agar, XLD-agar, lysegrøn agar, Hektoen enterisk agar, blandt andre..
Parallelt med dette skal selektive medier til Salmonella podes med den direkte prøve (afføring) uden berigelse. Til prøver fra rektal vatpind udledes det opsamlede materiale i røret og fortsæt som beskrevet ovenfor..
Ved fødevareprøver afvejes 10 g fast mad eller 10 ml flydende mad og inokuleres en flaske med 100 ml klar til brug tetrationat bouillon. Fortsæt på samme måde som beskrevet ovenfor, men inkuber ved 37 ° C.
Som det kan ses, vil forholdet mellem prøven og bouillon altid være 1:10.
Kendte kontrolstammer kan bruges til at teste dyrkningsmediet. De mest anvendte er ATCC-certificerede stammer.
De stammer, der skal bruges, er Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Der forventes fremragende udvikling for Salmonella-stammer, mens Escherichia coli kan have svag eller regelmæssig udvikling, og grampositive stammer (Enterococcus og Staphylococcus) hæmmes delvist eller fuldstændigt.
-Da dette medium ikke hæmmer væksten af Proteus, bruger nogle laboratorier at placere 40 mg / L novobiocin for at undgå udviklingen af denne mikrobielle stamme. Antibiotikumet skal tilsættes før jodjodopløsningen..
-Efter forberedelse af mediet inklusive jodjodopløsningen bør det ikke tage mere end 2 timer at blive inokuleret..
-Når mediet fordeles i rørene, skal blandingen kontinuerligt homogeniseres for at resuspendere det dannede bundfald..
-I mindre kontaminerede prøver inkuberes tetrathionat-bouillon ved 35-37 ° C, og i stærkt kontaminerede prøver anbefales inkubation ved 43 ° C..
Endnu ingen kommentarer