Baird Parker agarfundament, forberedelse og brug

4808
Abraham McLaughlin

Det Baird Parker agar Det er et solidt, selektivt og differentieret kulturmedium. Det blev oprettet i 1962 til påvisning og optælling af koagulase-positive stafylokokker (Staphylococcus aureus).

Den består af pancreas kaseinhydrolysat, kødekstrakt, gærekstrakt, lithiumchlorid, glycin, natriumpyruvat, kaliumtellurit, agar og æggeblommeemulsion..

Typiske Staphylococcus aureus-kolonier på Baird Parker-agar. Kilde: Daizy John [CC BY 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0)]

Baird Parker Agar er baseret på evnen hos S. aureus for at reducere tellurit og producere lecithinase. Begge egenskaber genererer en koloni med specifikke egenskaber for denne art. Derfor er det yderst effektivt til at detektere denne mikroorganisme..

De typiske kolonier i S. aureus De er sorte eller mørkegrå med en farveløs kant og en lys glorie, der omgiver dem, der adskiller dem fra andre mikroorganismer. Dette patogen kan findes i kliniske prøver, vand, kosmetik og rå eller kogte fødevarer..

Dens diagnose eller påvisning er af største betydning på grund af de mange patologier, den producerer, såsom madforgiftning, skoldet hudsyndrom, toksisk choksyndrom, bylder, meningitis, septikæmi, endokarditis, blandt andre..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Næringsstyrke
    • 1.2 Selektiv
    • 1.3 Differentiale
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Æggeblommeemulsion
    • 2.2 Kalium tellurit 1% w / v
    • 2.3 Forberedelse af dyrkningsmediet
  • 3 Brug
    • 3.1 Kliniske prøver
    • 3.2 Fødevareprøver
    • 3.3 Vandprøver
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Anbefalinger
  • 6 Referencer

Basis

Nærende kraft

Bukspyttkjertelkaseinhydrolysat, kødekstrakt og gærekstrakt er kilderne til næringsstoffer, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for generel mikrobiel udvikling, mens pyruvat og glycin er forbindelser, der fremmer den specifikke vækst af Staphylococcus aureus.

Selektiv

Baird Parker Agar er selektiv, fordi den indeholder stoffer, der hæmmer væksten i den ledsagende flora, mens den fremmer udviklingen af S. aureus. De hæmmende forbindelser er lithiumchlorid og kaliumtellurit..

Differentiale

Dette medium gør det muligt at differentiere S. aureus af resten af ​​koagulase-negative stafylokokker. S. aureus har evnen til at reducere tellurit til frit metallisk sort tellur, der danner sorte eller mørkegrå kolonier.

På samme måde tilvejebringer æggeblommen substraterne for at demonstrere tilstedeværelsen af ​​enzymet lecithinase og lipase.. S. aureus er lecithinase-positiv, og der vil derfor blive observeret en klar halo omkring kolonien, hvilket indikerer, at lecithinet blev hydrolyseret.

I denne forstand indikerer udseendet på denne agar af skinnende sorte eller mørkegrå kolonier med en lys glorie omkring sig tilstedeværelsen af S. aureus. 

Hvis der dannes en udfældningszone, er det en indikation af lipaseaktivitet. Nogle stammer af S. aureus de er lipase positive og andre negative.

I tilfælde af at S. aureus Hvis lipase er positiv, vil der blive observeret et uigennemsigtigt område omkring den sorte eller mørkegrå koloni og derefter en lys halo på grund af lecithinase-virkningen..

Kolonier af andre bakterier end S. aureus i stand til at vokse i dette medium vil udvikle farveløse eller brune kolonier uden nogen omgivende glorie.

Atypiske sorte kolonier kan også ses med eller uden en farveløs kant, men uden en lys glorie. Disse kolonier bør ikke tages i betragtning, de svarer ikke til S. aureus.

Forberedelse

Æggeblommeemulsion

Tag et frisk kyllingæg, vask det godt og læg det i 70% alkohol i 2 til 3 timer. Ægget åbnes derefter aseptisk, og den hvide adskilles omhyggeligt fra æggeblommen. Derefter tages 50 ml af æggeblommen og blandes med 50 ml steril fysiologisk opløsning..

Kalium tellurit 1% w / v

Nogle kommercielle huse sælger 1% kalium tellurit klar til brug. Det tilsættes til mediet, før mediet størkner.

For at fremstille denne opløsning i laboratoriet vejes 1,0 g kaliumtellurit og opløses i en del vand. Derefter er vandmængden færdig indtil den når 100 ml. Opløsningen skal steriliseres efter filtreringsmetoden.

Fremstilling af dyrkningsmedium

Afvej 60 g af det dehydrerede medium og opløses i 940 ml destilleret vand. Lad blandingen hvile i ca. 5 til 10 minutter.

Påfør varme ved at omrøre mediet ofte for at forbedre opløsningsprocessen. Kog i et minut. Steriliseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

Lad den stå, indtil den når en temperatur på 45 ° C, og tilsæt 50 ml æggeblommeemulsion og 10 ml 1% tellurit. Bland godt og hæld 15-20 ml på sterile petriskåle..

Lad det størkne, anbring det omvendt i pakker og opbevar i køleskabet indtil brug.

Den endelige pH i det fremstillede medium skal være 6,8 ± 0,2.

Inden såning af en prøve skal du vente på, at pladen når stuetemperatur. Så plader ved stribe eller overflade såning med Drigalski spatel.

Farven på det dehydratiserede medium er lysebrun, og farven på det fremstillede medium er lysegult.

Brug

Kliniske prøver

De kliniske prøver sås direkte ved at udlede en del af materialet i den ene ende af pladen, og derfra stryges det af udmattelse. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Madprøver

Vej 10 g af fødevareprøven, og homogeniser den i 90 ml 0,1% peptonvand, derfra fremstilles der om nødvendigt fortyndinger. Inokuler pladerne i tre eksemplarer med 0,3 ml af de tilberedte opløsninger og frø på overfladen med en Drigalski-spatel. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C.

Denne metode gør det muligt at tælle de opnåede typiske kolonier og er ideel, når tilstedeværelsen af S. aureus over 10 CFU pr. gr / ml prøve.

Hvis mængden af S. aureus Det er lille, eller der er meget ledsagende flora, det foreslås at berige prøven i trypticase-sojabuljong med 10% NaCl og 1% natriumpyruvat. Dette vil favorisere væksten af S. aureus og vil hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora. Grumset rør er sået på Baird Parker agar..

Vandprøver

I et steriliseret vakuumfiltreringssystem filtreres 100 ml studievand, og derefter fjernes den 0,4 mikron mikroporøse membran med en steril pincet og anbringes på en Baird Parker-plade. Inkuber i 24 til 48 timer ved 35-37 ° C. Denne teknik muliggør optælling af typiske kolonier af S. aureus.

QA

Kendte stammer kan bruges til at vurdere kvaliteten af ​​Baird Parker Agar, såsom Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

I tilfælde af stammer af S. aureus ATCC vides at reducere tellurit, og de er lipase- og lecithinase-positive. Derfor skal der være en tilfredsstillende udvikling og vokse konvekse kolonier med et sort center og en farveløs kant med en uigennemsigtig halo og en lys yderste glorie..

For sin del S. epidermidis der forventes dårlig udvikling på dette medium med brungrå til sorte kolonier uden lys halo.

For at E coli Y P. mirabilis det forventes at blive helt eller delvist hæmmet. I tilfælde af vækst udvikles brune kolonier uden uigennemsigtigt område eller lys halo.

anbefalinger

-Mediet bør ikke opvarmes efter tilsætning af tellurit og æggeblomme.

-Fremstillingen af ​​æggeblommeemulsionen og dens tilsætning i midten er et meget sårbart trin for kontaminering. Der skal udvises forsigtighed.

-Hvis der er typiske kolonier af S. aureus skal bekræftes ved at montere en koagulasetest på nævnte stamme.

-Hvis der er tvivlsomme resultater med koagulase, bør andre bekræftende tests monteres.

-Pas på ikke at forvirre tilstedeværelsen af ​​typiske kolonier i S. aureus med atypiske sorte kolonier.

Referencer

  1. Wikipedia-bidragydere. Baird-Parker agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. marts 2017, 19:36 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org/ Adgang til 18. februar 2019.
  2. BD Laboratories. Baird Parker Agar. 2006. Fås på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Baird Parker agarbase. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. Baird Parker Agar. Tilgængelig på: http://f-soria.es/Inform
  5. Britannia Laboratories. Kalium tellurit. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Transport af Staphylococcus aureus enterotoksigen type A, i nasopharyngeal vatpinde i fødevarebehandlere. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
  7. Venezuelansk standard Covenin 1292-89. (1989). Mad. Isolering og optælling Staphylococcus aureus. Tilgængelig i:sencamer.gob.ve

Endnu ingen kommentarer