Endo agar fundament, forberedelse og brug

1095
Sherman Hoover

Det endo agar eller Endo-medium er et fast, differentieret kulturmedium med en vis grad af selektivitet. Den oprindelige formel blev oprettet af Endo i 1904 for at differentiere lactosefermentering fra ikke-fermenterende bakterier. Oprindeligt var det designet til at isolere Salmonella typhi, men senere vendte formålet med mediet om at søge efter coliformer.

Endo Agar-princippet er forblevet, men dets formulering har gennemgået utallige ændringer gennem årene. I øjeblikket er mediet sammensat af peptisk fordøjelse af animalsk væv, lactose, dikaliumhydrogenphosphat, natriumsulfit, basisk fuchsin og agar..

A: Virgin Endo Agar B: Seeded Endo Agar, midt i agaren kan man mærke den metalliske glans af en E. coli-stamme. Kilde: A: Strolch1983 [CC BY-SA 3.0 (http://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0/)] / B: LenkaM [CC BY-SA 1.0 (https://creativecommons.org/licenses /by-sa/1.0)]

Hovedanvendelsen af ​​mediet har været knyttet til isolering og differentiering af Gram-negative baciller tilhørende Enterobacteriaceae-familien og til andre nære familier..

I lang tid blev det brugt til påvisning af coliforme stoffer i vand-, mælke- og fødevareprøver, men i dag er brugen af ​​dette medium blevet fortrængt af andre med lignende funktioner. Imidlertid bruger nogle mikrobiologiske laboratorier denne agar til isolering af Enterobacteriaceae fra prøver af klinisk oprindelse..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Endo agar
    • 2,2 m-endo agar variant
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Endo agar indeholder peptoner, der tjener som en kilde til aminosyrer, nitrogen, kulstof og energi, der er nødvendige for væksten af ​​ikke-krævende mikroorganismer..

På den anden side tilvejebringes den let selektive karakter af agaren ved tilsætning af natriumsulfit og basisk fuchsin; begge komponenter hæmmer delvist eller fuldstændigt væksten af ​​de fleste Gram-positive bakterier.

Den differentielle karakter er givet ved tilstedeværelsen af ​​det fermenterbare kulhydrat, som i dette tilfælde er lactose og basisk fuchsin, som også fungerer som en pH-indikator..

Gramnegative bakterier, der vokser på denne agar og er i stand til at fermentere lactose, vil danne stærke lyserøde kolonier; at være patognomonisk af Escherichia coli dannelsen af ​​mørkerøde kolonier med en iriserende grønlig metallisk glans. Dette skyldes den høje produktion af syrer fra kulhydratfermentering..

Det skal bemærkes, at mediet omkring kolonierne også får en stærk lyserød farve. Mens ikke-laktosegærende Gram-negative stænger danner lyserødfarvede kolonier svarende til mellemstore eller farveløse.

Dikaliumhydrogenphosphat afbalancerer mediumets pH, og agar er den komponent, der giver den faste konsistens.

Forberedelse

Endo agar

Vej 41,5 g af det dehydrerede medium op og opløses i 1 liter destilleret vand. Varm blandingen under hyppig omrøring, indtil mediet er helt opløst. Steriliser i autoklave ved 121 ° C, ved 15 lb tryk i 15 minutter.

Når den fjernes fra autoklaven, lad den afkøle til en temperatur på ca. 45-50 ° C, ryst blandingen for at homogenisere inden servering. Hæld 20 ml i sterile petriskåle.

Lad pladerne størkne, vende op og opbevare i en plaquero eller pakk med mørkt papir, inden de opbevares i køleskab. Det er meget vigtigt at beskytte det tilberedte medium mod direkte lys. En anbefalet praksis er at forberede det nøjagtige beløb, du har brug for.

Hvis de opbevares i køleskab, skal pladerne få lov til at varme op inden brug..

Mediets pH skal være mellem 7,2 og 7,6, og farven på det fremstillede medium er lyserød..

M-endo agar-variant

Der er en anden version af Endo-agar (m-Endo), der følger formlen McCarthy, Delaney og Grasso, som indeholder flere forbindelser og varierer i form af præparat.

Denne variant indeholder: Lactose, Tryptose, Enzymatisk fordøjelse af kasein, Enzymatisk fordøjelse af animalsk væv, Natriumchlorid, Dibasisk kaliumphosphat, Natriumsulfit, Gærekstrakt, Monobasisk kaliumphosphat, Grundlæggende fuchsin, Sodiumdeoxycholat, Laurylsulfatnatrium og agar.

I dette tilfælde vejes 51 g af det dehydratiserede medium og suspenderes i 1 liter destilleret vand indeholdende 20 ml ethanol..

Varm let under omrøring, indtil mediet opløses fuldstændigt. Det bør ikke overophedes og bør ikke autoklaveres. Når blandingen er homogen, skal du servere i sterile petriskåle og lade den størkne..

Brug

I nogle lande bruges det stadig til at tælle samlede og fækale coliformer i mad- og vandprøver, især på udkig efter tilstedeværelsen af Escherichia coli som den vigtigste indikator for fækal forurening.

M-Endo agar anbefales af American Public Health Association (APHA) til overvågning og kontrol af desinfektions- og spildevandsbehandlingsprogrammer samt til evaluering af drikkevandskvaliteten..

Den mest anvendte metode er membranfiltrering efter berigelse af prøven med Laurylsulfat bouillon i 2 til 4 timer..

Det kan også bruges som erstatning for EMB-agar i den mikrobiologiske analyse af mad og vand ved hjælp af den mest sandsynlige talteknik (MPN), specifikt i den komplette bekræftende fase for at bekræfte tilstedeværelsen af E coli fra uklare EF-bouillon.

QA

For at evaluere kvaliteten af ​​det forberedte Endo-agarbatch sås kendte eller certificerede kontrolstammer..

Blandt de stammer, der kan bruges til dette formål, er: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus mirabilis ATCC 14153 og Enterococcus faecalis ATCC 11700.

Stammerne udsås ved udmattelse og inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

De forventede resultater er:

  • For at Escherichia coli: stærke røde kolonier med metallisk glans.
  • For at E. cloacae Y K. pneumoniae kolonier skal være lyserøde.
  • I tilfælde af S. typhimurium, S. flexneri og P. mirabilis kolonier er normalt lyserøde eller farveløse.
  • Langt om længe, E. faecalis det forventes delvis hæmmet, og dets vækst skal derfor være dårlig med meget små, stærke lyserøde kolonier.

Begrænsninger

-Endomedium har lav selektiv effekt, det er derfor muligt, at nogle grampositive mikroorganismer såsom Staphylococcus, Enterococcus og endda gær kan vokse.

-Andre baciller, der ikke hører til Enterobacteriaceae-familien, kan udvikle sig i dette medium, f.eks Pseudomonas sp Y Aeromonas sp. Karakteristika ved disse stammer er farveløse uregelmæssige kolonier.

-Dette forberedte medium er meget følsomt over for lys, derfor forringes langvarig eksponering for det indikatorsystemet og beskadiger mediet irreversibelt..

-Komponenterne i mediet betragtes som kræftfremkaldende, derfor bør direkte kontakt undgås.

-Det dehydratiserede medium er meget hygroskopisk og skal opbevares i sin originale beholder ved stuetemperatur, tæt lukket og i et tørt miljø..

Referencer

  1. BD Laboratories. Endo Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
  2. Neogen Laboratories. M Endo Agar. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  3. "Agar Endo." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 7. sep 2017, 08:27 UTC. 28. feb 2019, 22:55. Fås på: en.wikipedia.
  4. MercK-laboratorium. Endo agar. 2019. Tilgængelig på: merckmillipore.com
  5. Tekniske arklaboratorier. M -Endo Agar LES. 2015.Tilgængelig på: liofilchem.net

Endnu ingen kommentarer