Hektoen agar fundament, forberedelse og anvendelser

2535
Charles McCarthy
Hektoen agar fundament, forberedelse og anvendelser

Det Hektoen agar eller enterisk Hektoen agar er et fast, selektivt og differentieret kulturmedium. Det blev oprettet på Hektoen Institute af King og Metzger til isolering af enteropatogene bakterier af slægterne Shigella og Salmonella.

Mediet er sammensat af proteosepepton, gærekstrakt, galdesalte, lactose, saccharose, salicin, natriumthiosulfat, natriumchlorid, jerncitrat, ammoniumcitrat, bromothymolblåt, surt fuchsin og agar. Denne formulering gør det muligt at differentiere slægterne Shigella og Salmonella fra resten af ​​de bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium..

A. Virgin Hektoen agar B. Seeded Hektoen agar. Kilde: Flickr.com/Den oprindelige uploader var Philippinjl på fransk Wikipedia. [CC BY-SA 2.0 fr (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/2.0/fr/deed.en)]

Selvom der er andre medier med samme funktion som Hektoen agar, har det en større fordel i forhold til andre medier, især når du vil genoprette Shigella-arter..

Arten af ​​begge køn producerer alvorlige gastrointestinale problemer hos mennesker på grund af forbruget af forurenet mad; Derfor er transmission fækal - oral. Derfor er brugen af ​​Hektoen agar hovedsageligt indikeret i mikrobiologisk analyse af afføring og madprøver..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Hektoen agar indeholder peptoner og gærekstrakt som kilde til næringsstoffer, hvilket giver de væsentlige elementer til mikrobiel udvikling.

Det har dog også galdesalte, der virker ved at hæmme væksten af ​​nogle bakterier, især Gram-positive og nogle Gram-negative. Det er af denne grund, at det betragtes som et selektivt medium.

På den anden side er Hektoen agar et differentieret medium. Denne egenskab tildeles ved tilstedeværelsen af ​​fermenterbare kulhydrater, såsom lactose, saccharose og salicin, sammen med pH-indikatorsystemet, repræsenteret af bromothymolblåt og surt fuchsin..

Alle bakterier, der er i stand til at vokse på dette medium, og som ikke tilhører slægten Salmonella og Shigella, udvikler laks eller appelsinkolonier med undtagelse af slægten Proteus. Dette skyldes fermenteringen af ​​en eller flere af de tilstedeværende kulhydrater, som forsyrer mediet, hvilket får pH-indikatoren til at ændre sig..

Slægten Shigella og Salmonella er på sin side ikke i stand til at fermentere nogen af ​​de tilstedeværende kulhydrater ved kun at bruge peptoner som energikilde, som alkaliserer mediet, og derfor er deres kolonier blågrønne.

Bakterier, der er i stand til at danne hydrogensulfid (farveløs gas), kan også skelnes i dette medium. Natriumthiosulfat fungerer som kilde til svovl, mens jerncitrat er udviklingsmidlet. Begge forbindelser muliggør dannelsen af ​​et sort bundfald af jernsulfid, der viser reaktionen.

Det sorte bundfald i midten af ​​kolonien med en gennemsigtig glorie omkring det giver et fisk-øje-udseende. Denne egenskab antyder tilstedeværelsen af ​​slægten Salmonella.

Endelig opretholder natriumchloridet den osmotiske balance, og agaren tilvejebringer den faste konsistens til mediet..

Forberedelse

Vej 76 g af det dehydratiserede medium og opløs det i en liter destilleret vand. Ryst blandingen kraftigt, og lad den hvile i 10 til 15 minutter. Det kan opvarmes og koges, hvilket giver roterende bevægelser indtil dets totale opløsning. Dette medium autoklaveres ikke.

Når mediet når en temperatur på ca. 45 ° C, hældes et volumen på 20 ml direkte i sterile petriskåle..

Agaren får lov til at størkne. På det tidspunkt er de klar til brug. Det anbefales at bruge dem med det samme. Hvis dette ikke er muligt, opbevares de i køleskabet indtil brug..

Plader skal fjernes fra køleskabet på forhånd inden såning for at bringe dem til stuetemperatur.

Mediets pH skal være 7,5 ± 0,2. Farven på det dehydratiserede medium er lilla og det tilberedte medium er brungrønt.

Brug

Det anbefales at bruge Hektoen agar til at søge efter bakterier af slægten Shigella og Salmonella i afføring og madprøver..

Muligheden for at isolere disse bakterier øges betydeligt, hvis prøven tidligere er beriget i specielle bouillon, såsom selenitbuljong, cystinselenitbuljong, tetrathionatbuljong osv..

Inokulumet skal være stærkt, og såningen sker ved striber. Pladerne inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.

Inkubation i 48 timer anbefales, fordi kolonienes egenskaber er tydeligere for deres fortolkning og differentiering på dette tidspunkt..

QA

For at udføre kvalitetskontrol på dette medium anvendes certificerede bakteriestammer, såsom: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 og Shigella sonnei ATCC 25931.

De forventede resultater er som følger: Salmonella typhimurium og  Salmonella enteritidis de skulle udvikle blågrønne kolonier med eller uden et sort center. Mens Shigella-arterne vil vokse som grønblå kolonier.

Stammer af Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

I disse tilfælde er de observerede egenskaber følgende: E coli Y K. pneumoniae kolonier vil udvikle sig i denne mellemstore laksefarve til orange, med et bundfald af samme farve omkring. Mens Proteus vil udvikle blågrønne kolonier med eller uden et sort center..

Mens S. aureus Y  E. faecalis skal undertiden hæmmes E. faecalis formår at vokse som meget små, gule kolonier.

På den anden side, da dette medium ikke autoklaveres, er det vigtigt at evaluere steriliteten af ​​mediet. Derfor skal en til to uinokulerede plader fra hver forberedt batch inkuberes ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose..

Der forventes åbenbart ingen vækst af nogen art på pladen.

Begrænsninger

-Proteusarter kan udvikle sig i dette medium, og egenskaberne ved deres kolonier kan forveksles med Salmonella- eller Shigella-arter. Af denne grund skal enhver mistænkelig koloni bekræftes med biokemiske tests..

-Det er nødvendigt at ledsage brugen af ​​dette medium med andre mindre selektive agarer, for hvis den ønskede mikroorganisme findes i lave koncentrationer, udvikler den muligvis ikke i dette medium..

-Må ikke overophedes under tilberedningen, da overdreven varme ændrer sammensætningen af ​​mediet.

-Lactosegærende Salmonellakolonier kan forekomme usædvanligt og kan gå ubemærket hen.

Referencer

  1. Wikipedia-bidragydere. Hektoen enterisk agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. marts, 2019, 23:38 UTC. Tilgængelig på: .wikipedia.org / Adgang til 16. marts 2019.
  2. BD Laboratories. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Hektoen Enteric Agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Hektoen agar. Fås på: f-soria.es
  5. Difco & BBL Manual, Hektoen Enteric Agar. 2. udgave. Fås på: bd.com/europe

Endnu ingen kommentarer