M.R.S agar fundament, forberedelse og anvendelser

2951
Charles McCarthy
M.R.S agar fundament, forberedelse og anvendelser

Det agar M.R.S. er et selektivt fast dyrkningsmedium, der anvendes til isolering og optælling af mælkesyrebakterier, især af slægten Lactobacillus. Denne agar blev oprettet i 1960 af Man, Rogosa og Sharpe med samme navn, men på grund af dens kompleksitet bruges ofte forkortelsen M.R.S..

Den består af proteosepepton, kødekstrakt, gærekstrakt, glukose, sorbitanmonoleat, dikaliumphosphat, natriumacetat, ammoniumcitrat, magnesiumsulfat, mangansulfat og agar..

Man Rogosa og Sharpe-agar (M.R.S.) podet med Lactobacillus sp. Kilde: Foto doneret til denne artikel af forfatterne: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under undersøgelsen med titlen: Evaluering af mælkesyrebakterier og bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og spædbørns afføring.

Denne sammensætning tillader korrekt udvikling af mælkesyrebakterier fra kliniske prøver, såsom afføring, vaginal udflåd, orale prøver og modermælk samt mejeriprodukter og kødfødevarer.

Det bruges ikke rutinemæssigt i kliniske laboratorier, fordi mælkesyrebakterier sjældent er involveret i sygdomsprocesser. Imidlertid er brugen af ​​M.R.S agar hyppigere inden for fødevaremikrobiologi..

På den anden side bruges dette medium af nogle forskningscentre, hvis mål er at undersøge mælkesyrebakterier..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Karakteristika for kolonierne
    • 3.2 Isolering af mælkesyrebakterier
    • 3.3 Mælkesyrebakterier tæller
    • 3.4 På forskningsniveau
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Man, Rogosa og Sharpe agar har en ret kompleks sammensætning. Ved at nedbryde funktionen af ​​hver af dens komponenter, kan dens forklaring forklares.

Proteinepepton, kødekstrakt, gærekstrakt og glukose er næringsstoffer, der giver kilden til kulstof, nitrogen, vitaminer og mineraler, der er nødvendige for bakterievækst. Derudover er glukose den universelle energikilde, der anvendes i de fleste kulturmedier..

For at fremme væksten af ​​mælkesyrebakterier er det på den anden side nødvendigt med tilstedeværelsen af ​​kofaktorer (kationer), der er essentielle i metabolismen af ​​Lactobacillus og relaterede bakterier; disse forbindelser er saltene af natrium, magnesium og mangan.

Ligeledes er sorbitanmonoleat eller polysorbat 80 en vigtig kilde til fedtsyrer, da de absorberes som næringsstoffer..

Derudover virker sorbitanmonoleat og ammoniumcitrat ved at hæmme udviklingen af ​​den ledsagende flora, især gramnegative bakterier, hvilket giver denne agars selektive karakter..

Endelig er agar-agar den, der giver mediet fast konsistens.

Der er andre varianter af Man Rogosa Sharpe agar; en af ​​dem suppleres med cystein (M.R.S.c), der er meget nyttig til isolering af bifidobakterier blandt andre mikroorganismer. På den anden side er der MRS-mediet suppleret med neomycin, paromomycin, nalidixinsyre og lithiumchlorid, især til selektiv optælling af bifidobakterier i mejeriprodukter..

Forberedelse

Afvej 68,25 gram af det dehydratiserede medium og opløses i en liter destilleret vand. Lad stå i 5 minutter. For at opløses helt, drej til en varmekilde, omrør ofte, og kog i 1 til 2 minutter. Steriliseres i autoklave ved 121 ° C i 15 minutter.

Når du forlader autoklaven, skal du lade den stå i et par minutter og distribuere, mens den stadig er varm i sterile petriskåle..

Lad pladerne størkne og vende pladerne, bestil i pladestativ og afkøles indtil brug. Lad pladerne komme op til stuetemperatur inden brug.

Mediets pH skal være 6,4 ± 0,2. Nogle kommercielle huse anbefaler pH mellem 5,5 og 5,9.

Det dehydratiserede medium er beige og fremstillet er mørkt ravgult.

Både det dehydratiserede medium og de tilberedte plader skal opbevares ved 2 til 8 ° C..

Ansøgninger

M.R.S. De kan sås på overfladen (udmattelse eller med Drigalski-spatel). Det kan også sås efter dybde. Pladerne skal inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilicitet (4% Oto og 5-10% COto) i 24 til 72 timer.

Såmetoden vælges efter det forfulgte formål (isolering eller optælling).

Karakteristika for kolonierne

Formodede Lactobacillus-kolonier bliver hvidlige i farve og har et slimformet eller cremet udseende på denne agar. Senere skal de identificeres.

Isolering af mælkesyrebakterier

Til dette anvendes overfladesåning. De prøver, der skal sås, kræver en tidligere procedure. 

I tilfælde af modermælkeprøver anbefales det at centrifuge 1 ml af prøven ved 14.000 omdr./min i 10 minutter for at fjerne det fede lag. 900 µl kasseres, og i de resterende 100 µl suspenderes pelleten og hældes på overfladen af ​​M.R.S. Den skal derefter fordeles jævnt med en Drigalski-spatel..

I tilfælde af afføringsprøver vejes et (1) gram afføring og homogeniseres i 9 ml 0,1% sterilt peptonvand svarende til en 1/10 fortynding. Derefter foretages seriefortyndinger, indtil en endelig fortynding på 10-4.

Endelig tages 100 pi af de 10 fortyndinger-to, 10-3 og 10-4 og hver fortynding podes på MRS-agar og fordeler sig jævnt med en Drigalski-spatel.

Mælkesyrebakterier tæller

I dette tilfælde sås såningen med dybde.

Til modermælkeprøver tages 1 ml og placeres i et sterilt konisk plastrør. MRS-agar tilsættes ved en omtrentlig temperatur på 40 ° C til et slutvolumen på 25 ml, hvilket giver en homogen blanding. Derefter hældes det i sterile petriskåle på en ensartet måde og lades hvile indtil polymerisation..

For afføringsprøver foretages fortyndinger som tidligere beskrevet. Tag 1 ml af hver fortynding og placer den i sterile koniske plastrør. Smeltet MRS-agar tilsættes til et volumen på 25 ml.

Blandingen fra hver fortynding hældes jævnt i sterile petriskåle. Endelig lades det hvile indtil dets polymerisering.

Koloni stoler på Man Rogosa og Sharpe agar (M.R.S.). Kilde: Foto doneret til denne artikel. Forfattere: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Foto taget under undersøgelsen med titlen: Evaluering af mælkesyrebakterier og Bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og spædbørns afføring.

Forskningsniveau

Hver dag får undersøgelsen af ​​mælkesyrebakterier mere interesse; Forskere søger især at lære om nye stammer og deres potentiale som startgæringer til standardisering inden for fremstilling af mejeriprodukter, blandt andre anvendelser..

I denne forstand har Alvarado et al. (2007) brugte M.R.S. at udføre en undersøgelse, hvor de isolerede, identificerede og karakteriserede mælkesyrebakterier, der var til stede i en håndværker Andesrøget venezuelansk ost.

I osten fandt de tilstedeværelsen af ​​bakterier af slægten Lactococcus og Lactobacillus og konkluderede, at blandingerne af isolerede stammer er egnede som startstammer til fremstilling af ost ud fra pasteuriseret mælk..

På den anden side Sánchez et al. (2017) brugte M.R.S. at undersøge tilstedeværelsen af ​​mælkesyrebakterier i smågriseens fordøjelseskanal for at bruge dem som native probiotika, der øger produktiviteten hos sunde smågrise.

Med dette medium lykkedes det dem at isolere fire arter: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae Y Pediococcus pentosaceus.

Ligeledes Báez et al. (2019) brugt M.R.S. at evaluere mælkesyrebakterier (LAB) og bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og spædbørns fæces.

De formåede at isolere 11 BAL og 3 Bifidobacteria sp i modermælk og 8 BAL og 2 Bifidobacteria sp. i afføring. Alle opfyldte visse parametre, der beviste dem som bakterier med probiotisk aktivitet.

Forfatterne konkluderede, at både modermælk og afføring fra udelukkende ammede spædbørn tjener som naturlige kilder til probiotiske bakterier..

QA

For at evaluere kvaliteten af ​​M.R.S. Kontrolstammer såsom:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichia coli og Bacillus cereus.

De forventede resultater er tilfredsstillende vækst for de første 6 bakterier, mens E coli Y Bacillus cereus skal være fuldstændig hæmmet.

Referencer

  1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Isolering, identifikation og karakterisering af mælkesyrebakterier fra en venezuelansk røget andes håndværksost. Dens anvendelse som en startkultur. Cient. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Tilgængelig på: scielo.org.
  2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Isolering af mælkesyrebakterier fra Grisens fordøjelseskanal. Præst investiga. dyrlæge. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Tilgængelig på: scielo.org.
  3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluering af mælkesyrebakterier og bifidobakterier med probiotisk potentiale i modermælk og afføring hos spædbørn i Acevedo-kommunen, Miranda 2017. Undergraduate-arbejde for at kvalificere sig til bacheloruddannelsen i bioanalyse . University of Carabobo, Venezuela.
  4. Britannia Laboratory. M.R.S agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  5. Wikipedia-bidragydere. FRU agar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. januar 2018, 19:44 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org Adgang til 17. februar 2019.
  6. Roy D. Media til isolering og optælling af bifidobakterier i mejeriprodukter. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.

Endnu ingen kommentarer