Næringsstofagarfundament, forberedelse og anvendelser

1212
Robert Johnston

Det næringsagar Det er et fast ikke-selektivt og ikke-differentielt dyrkningsmedium. I dette medium vokser alle slags bakterier, der ikke er krævende ud fra et ernæringsmæssigt synspunkt..

Det er et simpelt medium, og på trods af dets navn indeholder det en lavere ernæringsværdi sammenlignet med andre lignende medier, såsom hjernehjerteinfusionsagar eller trypticase sojagar..

Koloni regner med næringsagar

Dens anvendelighed i laboratoriet er meget varieret. Bruges hovedsageligt til artsubkultur, vedligeholdelse af stammer, kolonitælling, som grundlag for fremstilling af blodagar, blandt andre..

På grund af sin lyse beige farve er produktionen af ​​pigmenter, der genereres af nogle bakteriestammer, såsom det grønlige pigment af Pseudomonas aeruginosa, det murstenrøde pigment produceret af Serratia marcescens ved stuetemperatur, det gyldne gule pigment af Staphylococcus aureus, blandt andre.

Derudover er det et af de billigste voksende medier, der findes på markedet..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Sammensætning
  • 3 Forberedelse
  • 4 anvendelser
    • 4.1 Som grundlag for fremstilling af blodagar
    • 4.2 Stimuler sporulation af sporedannende bakterier
    • 4.3 Vedligeholdelse af stammen
    • 4.4 Kolonitælling
    • 4.5 Kørsel af diagnostiske tests
    • 4.6 Gendannelse af mesofile aerober fra saltvand (fritidsstrande)
  • 5 Referencer

Basis

Som allerede nævnt ovenfor er det et meget simpelt medium, der er baseret på at give næringsstoffer til bakterievækst uden begrænsning og uden komplekse reaktioner at fortolke..

Da mediet er gennemskinneligt, er det ideelt til at tælle kolonier ved hjælp af dybdesåningsmetoden..

Sammensætning

Den består hovedsageligt af kødekstrakt eller gærekstrakt, peptoner eller gelatine-pancreasfordøjelse, agar-agar, natriumchlorid og destilleret vand..

Kød- eller gærekstraktet og peptonerne repræsenterer de essentielle kilder til kulstof og mineraler (nitrogen, fosfor og svovl), som vil blive brugt af bakterier som kilde til energi og vækstfaktorer..

Ligeledes er agar-agar basen for alle faste kulturmedier, der kommer til at erstatte gelatine, som var den første baseforbindelse, der blev brugt af Robert Koch til at give solid konsistens til sine medier..

Agar er et polysaccharid sammensat af galactose, galactomannan, agarose og agaropectin. Indstilles ved 40 ° C og smelter tæt på 100 ° C.

På sin side forsyner natriumchlorid mediet med den nødvendige osmolaritet til bakteriel udvikling.

Endelig tjener vandet til at hydratisere og opløse de lyofiliserede forbindelser. Destilleret vand justeret til neutral pH bør anvendes. Vand fra hanen bør ikke bruges, fordi det indeholder calcium og magnesium, der kan reagere med fosfater i mediet og danne uopløselige salte..

Forberedelse

For en liter næringsagar skal 31 g af det dehydratiserede medium vejes. Den anbringes i en kolbe og opløses i en liter destilleret vand. Efter 5 minutters stående varme over en varmekilde og blandes konstant indtil kogning i 1 eller 2 minutter..

Fremstilling af dyrkningsmedium.

Kolben anbringes derefter i en autoklave og steriliseres ved 121 ° C i 20 minutter..

Sterilisering i autoklave

I slutningen af ​​tiden fjernes den fra autoklaven og serveres i sterile petriskåle ved hjælp af en laminær strømningshætte eller Bunsen-brænder..

Hvis petriskålene er engangs (plastik), skal mediet fordeles, når agaren har en temperatur på ca. 50 ° C for at forhindre, at de deformeres af overdreven varme.

Lad størkne og opbevare på en omvendt pladeholder og afkøles ved 2-8 ° C indtil brug.

Pladerne skal hærdes, inden de sås ud. Næringsagarplader bør ikke bruges, hvis de er forurenede eller dehydreret.

PH i det fremstillede medium skal justeres til 7,3 ± 0,2.

Ansøgninger

Det er det enkleste dyrkningsmedium, der anvendes i mikrobiologilaboratoriet. Dens formulering er fremragende til vækst af ikke-krævende bakterier.

Dens vigtigste anvendelser forklares nedenfor:

Som grundlag for fremstilling af blodagar

Dette medium bruges undertiden som en base til at forberede blodagar, men det er ikke den mest almindelige base..

Stimuler sporulering af sporedannende bakterier

Dette dyrkningsmedium er især nyttigt til stimulering af sporulation af sporedannende bakterier, såsom Bacillus sp.

For at gøre dette, en stamme af slægten Bacillus og inkuberes i 24 timer ved 37 ° C i aerobiose. Når kolonierne er vokset, udsættes pladen for temperaturbelastning, dvs. temperaturen i ovnen øges til 44 ° C og efterlades i yderligere 24 timer eller placeres i køleskab i 24 timer.

I slutningen af ​​tiden fremstilles udstrygninger af kulturen og farves med Gram-plet eller med Shaeffer-Fulton-spore-plet. I dem vil bacillerne med endosporer (sporer inde i bacillus) og exospores (sporer uden for bacillus) blive observeret..

Vedligeholdelse af stammen

Nogle forskningslaboratorier eller universitetsundervisningslaboratorier kræver opretholdelse af levedygtige bakterier af klinisk betydning så længe som muligt for at bruge bakteriebanken (bacterioteca) til forskningsarbejde eller til forberedelse af undervisningspraksis, hvor de studerende lærer at manipulere og identificere disse mikroorganismer.

Næringsagar såvel som hjerneinfusionsagar kan bruges til dette formål. Agaren fremstilles, hældes i rør med et bakelitlåg og vippes på en base på en sådan måde, at agaren størkner og danner en blok i bunden og en skråning på overfladen (fløjte næb).

Hvert rør er mærket med navnet på de bakterier, der skal podes, og datoen. Hver af bakterierne frøes på rammen og inkuberes i 24 timer, når kolonierne er vokset, opbevares rørene ved stuetemperatur.

Bakterioteca skal fornyes fra 1 til 3 måneder for at undgå forurening og dehydrering af mediet og såvel bakteriedød..

Kun ikke-krævende bakterier kan opretholdes på denne måde.

Kolonitælling

Selvom der er specialiserede midler til at tælle kolonier, såsom standardtællingsagar, kan næringsagar bruges til dette formål, enten ved overfladesåning med en drigalski-spatel eller ved dybde. Af denne grund er det meget nyttigt i den mikrobiologiske analyse af mad og vand..

Kører diagnostiske tests

Fordi det er et medium, der ikke indeholder blod eller noget andet tilsætningsstof, er det ideelt til at tage kolonier dyrket på dette medium for at udføre katalasetesten..

På grund af sin lyse farve er det ligeledes angivet at udføre oxidasetest direkte på et område af den podede agar uden indblanding..

Gendannelse af mesofile aerober fra saltvand i fritidsaktiviteter (Strande)

Næringsagaren fremstillet med 10% havvand er nyttig til evaluering af mesofile aerober i strandvand..

På denne måde kan det reelle niveau af forurening, som vandet har med disse mikroorganismer, forstås, da resultaterne i denne type prøver overlapper hinanden, når der anvendes dyrkningsmedier fremstillet på den konventionelle måde..

Dette blev demonstreret af Cortez et al. i 2013 i et forskningsarbejde.

Dette kan forklares på grund af den pludselige ændring, som bakterier gennemgår, når de går fra et hypersaltet miljø til et miljø med lavt saltindhold, derfor kommer mikroorganismerne ind i en tilstand af sløvhed, hvor de er levedygtige, men ikke dyrkbare..

Referencer

  1. "Ernæringsagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13 sep 2016, 20:33 UTC. 29. dec 2018, 21:04 en.wikipedia.org
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Argentina. Redaktionel Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, redaktionelt Panamericana S.A.
  4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Effekt af kulturmedier tilberedt med havvand på sundhedsindikatorer i kurbade i Chichiriviche, Falcón-stat, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
  5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M og Cardoso M. Mikrobiologisk vandkvalitet til inseminerende doser til svin.Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
  6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.

Endnu ingen kommentarer