Vogel-Johnson agar begrundelse, forberedelse og anvendelser

4363
David Holt

Det Vogel-Johnson agar er et fast, selektivt og differentieret dyrkningsmedium, specielt formuleret til isolering af Staphylococcus aureus. Dette medium blev skabt af Vogel og Johnson i 1960 fra modifikationen af ​​tellurit glycinagar formuleret i 1955 af Zebovitz, Evans og Niven..

Modifikationen bestod i at øge koncentrationen af ​​mannitol til stede i mediet og i inkorporeringen af ​​en pH-indikator. Den nuværende formel er sammensat af triptein, gærekstrakt, mannitol, dikaliumphosphat, lithiumchlorid, glycin, phenolrød, agar, 1% kaliumtelluritopløsning og vand..

Kilde: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Det skal bemærkes, at der er andre medier, der ligesom Vogel-Johnson agar er selektive til isolering af S. aureus, såsom salt mannitolagar og Baird Parker-agar. I denne forstand kan det siges, at fundamentet for Vogel-Johnson-agar er en blanding mellem salt mannitolagar og Baird Parker-agar..

I den første kolonier af S. aureus De skelnes ved at fermentere mannitolen og gøre pH-indikatoren gul. På den anden side i det andet S. aureus det er kendetegnet ved at reducere tellurit til tellur og danne grå til sorte kolonier. Begge egenskaber observeres i Vogel-Johnson agar..

Dette medium er ligesom dets kolleger nyttigt til påvisning af Staphylococcus aureus i fødevareprøver, hygiejnekontrol af industriprodukter og i kliniske prøver.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Næringsstofforsyning
    • 1.2 Selektiv effekt
    • 1.3 Differentialeffekt
    • 1.4 Osmotisk balance og størkningsmiddel
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Kaliumtelluritopløsning ved 1% vægt / volumen
    • 2.2 Vogel-Johnson Agar Base Medium
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Næringsstofforsyning

Vogel-Johnson medium indeholder triptein og gærekstrakt; Begge stoffer giver langkædede aminosyrer, der tjener som kilder til kulstof og nitrogen, der er nødvendige for bakterievækst. Bakterier, der er i stand til at vokse i dette medium, tager næringsstofferne fra disse stoffer..

Selektiv kraft

Vogel-Johnson agar er i stand til at hæmme væksten af ​​Gram-negative bakterier og endda nogle Gram-positive bakterier, hvilket favoriserer udviklingen af ​​koagulase-positive stafylokokker. De hæmmende stoffer er kaliumtellurit, lithiumchlorid og glycin..

Differentialeffekt

De stoffer, der fremstiller dette differentierede medium, er mannitol og kaliumtellurit. Mannitol er et kulhydrat, og når det fermenteres, produceres syrer, der får mediet til at blive rød til gul, hvilket sker takket være tilstedeværelsen af ​​den røde phenol pH-indikator..

Mens den farveløse tellurit, når den reduceres til frit metallisk tellur, tager en mørkegrå til sort farve..

Det Staphylococcus aureus fermenterer mannitol og reducerer tellurit til tellurium. Derfor er de typiske kolonier i S. aureus i dette medium er de grå eller sorte omgivet af et gult medium.

Bakterier, der vokser i dette medium og ikke reducerer tellurit eller gæring mannitol, vil danne gennemsigtige kolonier omgivet af et rødt farvet medium, endnu mere intens end den originale farve, på grund af alkaliseringen af ​​mediet ved brug af peptoner.

På den anden side vil bakterier, der reducerer tellurit, men ikke gærer mannitol, vokse som grå eller sorte kolonier omgivet af et dybt rødt medium..

Hvis mediet blev fremstillet uden tilsætning af kaliumtellurit, blev kolonier af S. aureus ville udvikle sig som gule kolonier, omgivet af et gult medium, som i salt mannitolagar.

Osmotisk balance og størkningsmiddel

Dikaliumphosphat opretholder mediumets osmotiske balance og justerer pH til neutralitet 7.2. Mens agar giver dyrkningsmediet en solid konsistens.

Forberedelse

Kaliumtelluritopløsning 1% vægt / volumen

Denne opløsning er ikke inkluderet i det dehydratiserede medium, da den ikke kan steriliseres i en autoklav. Af denne grund fremstilles det separat og tilsættes til det allerede steriliserede medium..

Nogle kommercielle huse sælger den færdige 1% kalium-tellurit-opløsning. Hvis du vil forberede dig på laboratoriet, skal du gøre som følger:

Vej 1,0 g kaliumtellurit op, og mål 100 ml destilleret vand. Opløs kaliumtellurit i en del vand, og færdiggør derefter vandmængden, indtil den når 100 ml. Steriliser opløsningen ved filtreringsmetode.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Afvej 60 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Blandingen opvarmes til kogning for at hjælpe med fuldstændig opløsning. Under opløsningsprocessen omrøres mediet ofte.

Steriliser i autoklave ved 15 punds tryk og 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven, og lad den hvile, indtil mediet når en temperatur på ca. 45 til 50 ° C. Tilsæt 20 ml af den tidligere fremstillede 1% kaliumtelluritopløsning.

Bland og hæld i sterile petriskåle. Lad størkne og bestil omvendt på pladeholdere til senere opbevaring i køleskabet indtil brug.

Den endelige pH i det fremstillede medium skal være 7,2 ± 0,2.

Før du så en prøve, skal du vente på, at pladen når stuetemperatur..

Farven på det tilberedte medium er rød.

Brug

Selvom det kan bruges til isolering af S. aureus i enhver type prøver bruges det hovedsageligt til mikrobiologisk analyse af farmaceutiske produkter, kosmetik og mad.

Det anbefales, at inokulatet er tæt. Såning kan ske ved striering med et platinahåndtag eller ved overflade med en Drigalski-spatel.

Plader inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i aerobiose.

QA

Følgende kontrolstammer kan bruges til at udføre kvalitetskontrol på Vogel-Johnson-mediet:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 eller Proteus mirabilis ATCC 43071.

Det forventede resultat er som følger: for stammer af S. aureus Tilfredsstillende vækst med sorte kolonier omgivet af gult medium. For at S. epidermidis regelmæssig vækst med gennemskinnelige eller sorte kolonier omgivet af rødt medium.

Ligeledes for E coli total hæmning forventes, og for Proteus mirabilis delvis eller total hæmning hvis det vokser, vil det gøre det sparsomt, og kolonierne vil være sorte omgivet af rød halvdel.

Referencer

  1. BD Laboratories. VJ (Vogel og Johnson Agar). 2006. Fås på: bd.com
  2. Britannia Laboratories. Vogel- Johnson Agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Britannia Laboratories. Kalium tellurit. 2015.Tilgængelig på: britania.com
  4. Himedia-laboratorium. Vogel- Johnson Agar Medium. 2018. Tilgængelig på: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
  5. Vogel- Johnson Agar Base. Merck Microbiology Manual. 12. udgave, s. 502-503. Tilgængelig på: Brugere / Team / Downloads
  6. Wikipedia-bidragydere, “Ágar Vogel Jonhson”, Wikipedia er gratis en encyklopædi,   tilgængelig på: wikipedia.org.
  7. Venezuelansk standard Covenin 1292-89. (1989). Mad. Isolering og optælling Staphylococcus aureus. Tilgængelig i:sencamer.gob.ve

Endnu ingen kommentarer