Peptonvandets begrundelse, forberedelse og anvendelser

4723
Abraham McLaughlin

Det peptonvand Det er et flydende, ikke-selektivt berigelsesmedium, der primært anvendes som et fortyndingsmiddel til prøver af mad eller andre materialer. Dette medium er kemisk set meget simpelt, det indeholder kødpepton, natriumchlorid og vand..

Det har en vis næringsværdi, der gør det muligt at berige prøven. Hvis der er misbrugte bakterier, har dette medium beføjelse til at reparere levedygtighed. Det er især nyttigt til genopretning af bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien..

Peptonvand i flasker. Kilde: MSc. Marielsa Gil

I tilfælde af indvinding af Salmonellas anbefales anvendelse af varianten af ​​bufret peptonvand; Dette fungerer som et præberigelsesmedium til prøven, i dette tilfælde indeholder det andre elementer såsom dinatriumphosphat og dikaliumphosphat..

Normalt fremstilles peptonvand ved neutral pH, men der er andre varianter, hvor det er nødvendigt, at pH er 8,5 ± 0,2 (alkalisk), fordi den bakterie, der skal isoleres, er basisk, såsom Vibrio cholerae.

Desuden kan dette medium bruges som et basismedium til test af kulhydratfermentering..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Hjemmelavet tilberedning (ikke-kommerciel)
    • 2.2 Forberedelse under anvendelse af kommercielt medium
    • 2.3 Forberedelse til gæringstest
    • 2.4 Andre varianter af peptonvand
  • 3 Brug
    • 3.1 Afføringsprøver
    • 3.2 Fødevareprøver
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Peptoner tilvejebringer de næringsstoffer, der kræves til bakterievækst, især kvælstof og kortkædede aminosyrer, mens natriumchlorid opretholder osmotisk balance..

Derudover tillader mediet at sprede, homogenisere og reparere bakterieceller, der er blevet beskadiget af industrielle processer..

Som fortyndingsmiddel er det ideelt og erstatter effektivt fysiologisk opløsning (SSF) eller phosphatbufferopløsning (PBS).

Bakterievækst er tydelig ved at observere dens uklarhed..

Forberedelse

Hjemmelavet tilberedning (ikke kommerciel)

Vej 1 g pepton og 8,5 g natriumchlorid op, opløses i 1 liter destilleret vand. PH skal justeres til 7,0. Til dette kan 1 N natriumchlorid anvendes..

Fremstilling under anvendelse af kommercielt medium

Vej 15 g af det dehydratiserede medium og opløs det i en liter destilleret vand. Homogeniser blandingen. Om nødvendigt koges blandingen i 1 minut for at hjælpe med den totale opløsning. Serveres i 100 ml flasker eller 10 ml rør efter behov. Autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter.

Afkøl og brug eller opbevar i køleskab. Mediets endelige pH er 7,2 ± 0,2.

Farven på det dehydratiserede medium er lysebeige, og det fremstillede medium er lysegult.

Forberedelse til gæringstest

Til det foregående præparat - inden sterilisering - skal kulhydratet tilsættes til en slutkoncentration på 1% plus Andrade-indikatoren (syrefuchsin) eller phenolrødt (0,018 g / L). Rørene skal være udstyret med en Durham-klokke for at observere gasdannelse.

Andre varianter af peptonvand

-Pufret eller bufret peptonvand

Det indeholder enzymatisk hydrolysat af kasein, natriumchlorid, dihydrogenkaliumphosphat og natriumhydrogenphosphatdodecahydrat. Endelig pH er 7,0 ± 0,2.

Vej 20 g af det dehydratiserede medium til dets fremstilling og opløses i 1 liter destilleret vand. Lad det hvile i ca. 5 minutter. Varm i 1 minut, indtil den er helt opløst.

Hæld i egnede krukker efter behov. Steriliser ved hjælp af autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.

-Alkalisk peptonvand

Vej 25 g af det dehydrerede medium og opløses i 1 liter vand. Fortsæt som beskrevet ovenfor. PH varierer fra 8,3 til 8,7.

Brug

Inokulum udføres ved at placere prøven direkte.

Det bruges til at fortynde prøver, især når det mistænkes for, at der kan være beskadigede bakterier. Fortyndingerne er normalt 1:10 og 1: 100.

Inkuber i 24 timer i aerobiose ved 35-37 ° C.

Afføringsprøver

Til afføringsprøver på udkig efter Salmonella anbefales brug af bufret eller bufret vand som et præberigelsesmedium..

For at gøre dette skal du gøre som følger:

Hvis afføringen er dannet, skal du tage 1 g prøve. Hvis de er flydende, skal du tage 1 ml afføring og suspendere i et rør med 10 ml bufferet peptonvand. For rektale vatpinde, udtøm podepindematerialet i røret med bufret peptonvand.

I alle tilfælde blandes og homogeniseres prøven meget godt..

Inkuber ved 37 ° C i 18 til 24 timer. Derefter subkultur i en berigelsesbuljong, såsom selenit-cystin-bouillon eller tetrathionat-bouillon ved 37 ° C i mere 18-24 timer. Endelig dyrk i selektive medier til Salmonella, såsom SS agar, XLD agar, Hektoen agar, blandt andre..

Madprøver

Peptonvand anvendes som et berigelsesmedium eller som et simpelt fortyndingsmiddel, men hvis der søges Salmonella-arter, anvendes det som et præberigelsesmedium, som allerede beskrevet..

Fortsæt med mad som følger:

For faste fødevarer vejer 25 g af prøven, og for flydende fødevarer måles 25 ml af den. Placer nævnte del i kolber indeholdende 225 ml peptonvand. Bland og homogeniser prøven.

Hvis den mistanke om mikrobiel belastning er høj, kan der foretages serielle eller decimale fortyndinger for at lette optællingen af ​​kolonidannende enheder (CFU)..

Antallet af fortyndinger afhænger af typen af ​​prøve og analytikerens erfaring..

Hvis det tværtimod mistænkes, at den mikrobielle belastning er meget lav, er det ikke nødvendigt at udføre fortyndinger. Derefter subkultur på selektive medier.

I tilfælde af mad fra havet, såsom skaldyr, fisk, blandt andre på jagt efter Vibrio cholerae eller andre Vibrio-arter, skal der anvendes peptonvand justeret til pH 8,5 (alkalisk peptonvand).

QA

Fra hver batch fremstillet, skal et til to rør inkuberes uden inokulering i 24 timer i aerobiose ved 37 ° C. I slutningen af ​​tiden skal der ikke observeres uklarhed eller farveændring.

Kendte kontrolstammer kan også bruges til at evaluere deres effektivitet:

Følgende bakteriestammer kan anvendes til dette: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

I alle tilfælde forventes tilfredsstillende mikrobiel udvikling, som observeres ved turbiditet i mediet..

Begrænsninger

-Det dehydratiserede medium er meget hygroskopisk, så det skal holdes væk fra fugt.

-Mediet bør ikke bruges, hvis der observeres nogen form for forringelse.

-Det dehydrerede dyrkningsmedium skal opbevares mellem 10 - 35 ° C

-Det tilberedte medium skal opbevares nedkølet (2-8 ° C).

Referencer

  1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B og Velázquez O. Teknikker til mikrobiologisk analyse af fødevarer. 2009, 2. udgave Det kemiske fakultet, UNAM. Mexico. Version til Manuals and Documents Administrator (AMyD) fra det kemiske fakultet, UNAM 1. Findes på: http://depa.fquim.unam.mx
  2. Britannia Laboratories. Bufret peptonvand. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Peptonvand. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  4. Britannia Laboratories. Peptonvand. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  5. Merck Laboratories. Bufret peptonvand. Tilgængelig på: merckmillipore.com
  6. Conda Pronadisa Laboratories. Alkalisk peptonvand. Tilgængelig på: condalab.com
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer