Det fosfatbuffer, BPS eller fosfatbuffer saltvand Det er en buffer- og isotonisk opløsning, hvis funktion er at opretholde pH og osmotisk tryk så tæt som muligt på det naturlige biologiske (fysiologiske) miljø. Forkortelsen PBS står for phosphatbufret saltvand..
PH og osmolaritet er to meget vigtige aspekter, der skal kontrolleres i visse laboratorieprotokoller. I tilfælde af pH er det vigtigt, at det kontrolleres, især i biokemiske reaktioner, da disse kan variere eller ikke udføres, hvis reaktanterne har en uhensigtsmæssig pH.
I mellemtiden er kontrol med osmolaritet vigtig, især når man arbejder med levende celler, da plasmamembranerne i cellerne reagerer i henhold til koncentrationen af opløste stoffer, hvori de findes..
Hvis cellerne overføres til et hypertonisk medium dehydrerer de, da vandgradienten vil blive transporteret til den side, hvor der er en højere koncentration af opløste stoffer. Hvis celler på den anden side placeres i et hypotonisk medium, absorberer cellerne væske, indtil de lyseres..
Derfor bruges PBS-bufferen til laboratorieprotokoller, der kræver vedligeholdelse af celler. in vitro, på denne måde beskadiges cellerne ikke.
PBS består af en kombination af salte, såsom natriumchlorid, natriumphosphat, kaliumchlorid og kaliumphosphat. Sammensætningen af PBS kan variere afhængigt af protokollen..
Artikelindeks
Grundlæggende er saltfosfatbufferens funktion at opretholde en konstant fysiologisk pH sammen med en elektrolytkoncentration svarende til den, der findes i kroppen..
I dette miljø er celler i stand til at forblive stabile, da fysiologiske forhold simuleres så meget som muligt..
Andre forbindelser kan sættes til den originale PBS-formulering, hvis det er nødvendigt, for eksempel er tilsætning af EDTA til bufferen nyttig til vask af røde blodlegemer i krydskompatibilitetstesten..
EDTA forhindrer, at fraktionen af komplement C1, der er til stede i serum, spaltes og lyseres til de røde blodlegemer, dvs. det undgår falske uforenelighedsresultater. Derudover hjælper EDTA med at adskille celler.
Mængden af salte, der skal vejes til fremstilling af PBS-phosphatbufret saltvand, afhænger af den mængde, der skal fremstilles:
For en liter opløsning:
Veje:
80,6 g NaCl,
2,2 g KCl,
11,5 g NatoHPO4,
2,0 g KHtoHPO4
Anbring de tunge salte i et bægerglas, tilsæt nok vand (80%) og bland på omrøringspladen med magnetstang, indtil saltene er opløst..
Filtrer for at fjerne uopløste partikler. Brug filtre med 0,45 µm porer. Autoklaveres og distribueres aseptisk i laminær flowhætte i glasbeholdere med låg.
10X-opløsningen (koncentreret) justerer ikke pH-værdien. Justeringen foretages en gang fortyndet til 1X PBS-bufferkoncentration (1:10 fortynding).
1X PBS kan fremstilles direkte under vejning af de tilsvarende mængder af hvert salt, eller det kan fremstilles ved at fortynde stamopløsningen (1:10) med sterilt destilleret vand..
-For at klargøre en liter 1X PBS fosfatbufret saltvand direkte skal du veje:
8,06 g NaCl,
0,22 g KCl,
1,15 g NatoHPO4,
0,20 g KHtoHPO4
Fortsæt som forklaret for den koncentrerede opløsning. Derefter skal pH justeres. For at gøre dette skal du måle pH-værdien, og brug syre (HCI) eller base (NaOH) til henholdsvis at sænke eller hæve pH-værdien, indtil det er 7,4.
Syren eller basen tilsættes dråbe for dråbe under overvågning af opløsningens pH-værdi ved hjælp af et pH-meter. Filtrer, autoklaver og fordel aseptisk i koniske rør eller krukker efter behov.
-For at forberede 1X PBS fra 10X stamopløsningen:
Foretag en 1:10 fortynding. For eksempel for at forberede 1 liter 1X PBS måles 100 ml stamopløsningen og tilsættes 700 ml sterilt destilleret vand. Juster pH og fyld vandmængden op til 1000 ml.
Den forberedte PBS-buffer er farveløs og gennemsigtig.
Den daglige PBS kan opbevares ved stuetemperatur og resten i køleskabet.
Til 100 ml 1 molær HCL (saltsyre).
Mål 91 ml destilleret vand og anbring det i et 250 ml bægerglas.
Mål 8,62 ml koncentreret HCI, og tilsæt det langsomt i bægerglasset, der indeholder vandet (gør det aldrig omvendt). Tag de relevante biosikkerhedsforanstaltninger ved håndtering af stærke syrer (stærkt ætsende stof).
Bland i 5 minutter, fortrinsvis ved hjælp af en omrøringsplade med en magnetstang inde i glasset. Overfør til en 100 ml ballon og fyld op til 100 ml med HtoEller destilleret.
For 100 ml NaOH (natriumhydroxid) 10 molær.
Mål 40 ml destilleret vand og læg det i et 250 ml bægerglas. Mål 40 g NaOH og tilsæt til vandet. Bland ved hjælp af en omrøringsplade med en magnetstang inde i glasset.
Overfør til en 100 ml målekolbe og fyld op til mærket med destilleret vand. Overhold biosikkerhedsbestemmelserne, fordi denne reaktion er eksoterm (den frigiver energi i form af varme).
Hvis du vil tilberede andre mængder fosfatopløsning, kan du se følgende tabel:
Bruges hovedsageligt i cellebiologi, immunologi, immunhistokemi, bakteriologi, virologi og forskningslaboratorier.
Det er ideelt til cellevask ved centrifugering (røde blodlegemer), celle-monolagsvask, i spektroskopiske ellipsometri-teknikker, til kvantificering af bakterielle biofilm, vedligeholdelse af cellekulturer for vira som en vaskeopløsning i den indirekte immunfluorescensteknik. i teknikker til karakterisering af monoklonale antistoffer.
Det bruges også til at transportere celler eller væv, som et fortyndingsmiddel til celletælling, fremstilling af cellulære enzymer (trypsin), som et fortyndingsmiddel til biomolekyleudtørringsmetoden og til at fremstille andre reagenser..
På den anden side demonstrerede Martin et al. I 2006 viste, at PBS er nyttigt i retsmedicinske laboratorier, specifikt til inddrivelse af sæd fra vaginale udstrygninger eller til inddrivelse af vaginale celler fra penisudstrygninger. På denne måde kan det fastslås, om der har været et seksuelt forhold.
-Nogle PBS-buffere indeholder et stof kaldet natriumazid som konserveringsmiddel. Denne forbindelse kan danne eksplosive stoffer, hvis den kommer i kontakt med bly eller kobber. Af denne grund skal der udvises særlig forsigtighed, når dette reagens bortskaffes i afløbet. Hvis det bortskaffes på denne måde, skal der tilsættes masser af vand for at fortynde det så meget som muligt..
-Zink bør ikke tilsættes til fosfatbufferen, da det får nogle salte til at udfældes.
-Wangen et al. I 2018 fastslog, at brugen af PBS ikke var egnet til vask af primær akut myeloid leukæmi (AML) celler ekstraheret fra perifert blod på grund af det faktum, at mange celler går tabt ved lysis med et stort fald i proteinmateriale.
Derfor besluttede de, at primære AML-celler ikke skulle vaskes med PBS efter opbevaring i flydende nitrogen..
Endnu ingen kommentarer