Selenit bouillon fundament, forberedelse og anvendelser

3500
Anthony Golden

Det selenit bouillon Det er et selektivt flydende dyrkningsmedium. Det blev designet af Leifson til berigelse af prøver, hvor mistanke om tilstedeværelsen af ​​enteropatogene bakterier af slægten Salmonella..

Dette medium overholder kravene fra American Public Health Association (APHA) og accepteres derfor til undersøgelse af tilstedeværelsen af ​​Salmonella i prøver af afføring, urin, flydende eller fast mad, vand, blandt andre..

Selenit bouillon. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil

Dens kemiske sammensætning favoriserer genopretningen af ​​disse mikroorganismer og hæmmer igen andres vækst. Det er primært giftigt for de fleste bakterier, der tilhører Enterobacteriaceae-familien. Det tillader imidlertid også inddrivelse af Shigella-stammer og hæmmer ikke væksten af ​​Pseudomonas og Proteus..

Den består af vandfrit natriumhydrogenselenit, vandfrit natriumphosphat, peptoner og lactose. Der er også en variant, som cystin tilsættes, deraf navnet Selenite-cystine bouillon..

For tiden foretrækkes anvendelsen af ​​selenit-cystin-bouillon, da der opnås en højere procentdel af Salmonella-genvinding, svarende til den, der observeres med andre selektive medier til det samme formål, såsom natriumtetrathionat-bouillon..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 -Selenit bouillon
    • 2.2 -Forberedelse af det kommercielle miljø
    • 2.3 Selenit-cystin bouillon variant
  • 3 anvendelser
  • 4 Sået
  • 5 Kvalitetskontrol
  • 6 Begrænsninger
  • 7 Referencer

Basis

Peptonerne indeholdt i bouillon tjener som næringsstoffer til korrekt udvikling af mikroorganismer. Salmonella-stammer bruger peptoner som kilde til nitrogen, vitaminer og aminosyrer.

Lactose er det fermenterbare kulhydrat, mens natriumselenit er det hæmmende stof, der stopper væksten af ​​Gram-positive bakterier og de fleste af de bakterier, der er til stede i tarmfloraen, især de af Enterobacteriaceae-familien. Natriumphosphat er bufferen, der stabiliserer mediumets pH.

I tilfælde af selenitvæskevariant, der indeholder L-cystin, er denne yderligere forbindelse et reduktionsmiddel, der minimerer selenittoksicitet, hvilket øger Salmonella-opsvinget..

Forberedelse

-Selenit bouillon

Hvis du har komponenterne i blandingen, kan du veje:

4 g vandfri natriumhydrogenselenit.

10 g vandfrit natriumphosphat.

5 gram peptoner.

4 g lactose.

Opløs forbindelserne i 1 liter sterilt destilleret vand. Det kan opvarmes let for at opløses helt.

Nogle laboratorier udsætter mediet i 10 minutter i flydende damp for at sterilisere det, da en autoklav ikke bør bruges. Hvis mediet er steriliseret, kan det opbevares i køleskabet indtil brug..

Det kan også fremstilles ikke-sterilt og serveres direkte 10 til 15 ml til sterile reagensglas.

I dette tilfælde skal det lade sig hvile og bruge det med det samme. Da mediet ikke er sterilt, kan det ikke opbevares i køleskabet til senere brug..

-Fremstilling af det kommercielle medium

Hvis det kommercielle medium er tilgængeligt, afvejes 23 g af det dehydratiserede medium og opløses i en liter sterilt destilleret vand. Varm kort op for at afslutte opløsningen. Undgå at autoklave. Server aseptisk 10 eller 15 ml i sterile reagensglas.

Mediets endelige pH skal være 7,0 ± 0,2.

Det skal bemærkes, at farven på det dehydratiserede medium er beige, og præparatet er let og gennemskinneligt rav..

Selenit-cystin bouillon variant

Den indeholder de samme forbindelser som selenit bouillon, men 10 mg cystin tilsættes. Resten af ​​proceduren er nøjagtig den samme som beskrevet ovenfor.

Ansøgninger

Dette medium er specielt at bruge i epidemiologiske studier, i tilfælde hvor sygdommen ikke er i dets akutte fase, asymptomatiske patienter eller raske bærere.

Isolering af slægten Salmonella er generelt vanskelig, da de normalt kun er dårligt forurenende prøver. Da det er i få mængder, overlappes det let af væksten af ​​andre bakterier, der findes i større mængde..

På den anden side udsættes råmaterialet, hvormed forarbejdede fødevarer fremstilles, ofte blandt andet for varme, dehydrering, anvendelse af desinfektionsmidler, stråling og konserveringsmidler..

Derfor misbruges Salmonellas til stede i råmaterialet ved at udsætte produktet for de førnævnte industrielle processer. Ligeledes i tilfælde af kliniske prøver som afføring kan stammerne være svage, hvis de kommer fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika..

Derfor bør enhver prøve, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af Salmonella, præberiges i lactose-bouillon og derefter beriges i selenit-bouillon for at optimere dens genopretning i selektive medier, såsom SS-agar, xylose-agar, lysin-deoxycholat (XLD), enterisk Hektoen agar (HE) og lysegrøn agar, blandt andre.

Sået

For afføringsprøver skal der tages 1 g prøve og suspenderes i et rør med 10 til 15 ml selenitbuljong. Hvis afføringen er flydende, skal du tage 1 ml og suspendere i bouillon. For rektale vatpinde skal du lade vattpindematerialet ud i bouillon.

I faste fødevareprøver skal du tage 1 gr og suspendere i selenitbuljongen.

Bland i flydende fødevarer i lige store dele med selenit bouillon i dobbelt koncentration.

Til urinprøver centrifugeres, supernatanten kasseres, alt sedimentet tages op og suspenderes i selenit-bouillon..

Bouillonerne inkuberes ved 37 ° C i 24 timers inkubation. Bakterievækst fremgår af uklarhed. Et ekstra rør pr. Prøve kan også medtages til inkubation ved 42 ° C. Efterfølgende såning af selektive faste medier fra selenitbuljongen.

QA

For at kontrollere sterilitet inkuberes en selenit-bouillon fra hver uinokuleret batch ved 37 ° C i 24 timer. Der forventes ingen uklarhed eller farveændring af mediet..

For at kontrollere, at mediet fungerer korrekt, kan kendte stammer anvendes, såsom:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028,  Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 og Proteus mirabilis ATCC 43071.

De forventede resultater er:

  • Vækst skal være tilfredsstillende for de første tre bakteriestammer.
  • For at Escherichia coli delvis hæmning.
  • For Proteus moderat vækst.

Begrænsninger

Selenit bouillon medium er giftigt for menneskelig hud, og derfor bør direkte kontakt undgås..

Referencer

  1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Sammenligning mellem natriumselenit og natriumtetrathionat-kulturmedier, begge inkuberet ved 37 ° C og 42 ° C til isolering af Salmonella spp fra bærerens afføring. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
  2. Britannia Laboratories. Selenito bouillon. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  3. Neogen Laboratories. Selenit bouillon. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Mikrobiologisk isolering af Salmonella spp. og molekylære værktøjer til dets påvisning. Sundhed, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Tilgængelig fra: http://www.scielo.org.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer