Det urinstof bouillon Det er et flydende dyrkningsmedium, der bruges til at vise tilstedeværelsen af enzymet urease i visse mikroorganismer. Uris er et mikrobielt enzym, der produceres på en konstitutiv måde, dvs. det syntetiseres uanset om substratet, som det virker på, er til stede..
Funktionen af urease er relateret til nedbrydningen af organiske forbindelser. Ikke alle mikroorganismer er i stand til at syntetisere dette enzym, og dets bestemmelse i laboratoriet gør det derfor muligt at identificere visse bakteriestammer og endda skelne mellem arter af samme slægt..
Der er to typer urinstofprøver: Stuart og Christensen. De adskiller sig i sammensætning og følsomhed. Den første er speciel for at vise en stor mængde urease produceret af arter af slægten Proteus.
Den anden er mere følsom og kan detektere små mængder urease, der genereres sent af andre bakterier, såsom Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter og Mycobacterium.
Stuarts urinstof er sammensat af urinstof, natriumchlorid, dikaliumphosphat, monokaliumphosphat, gærekstrakt, fenolrødt og destilleret vand.
I mellemtiden består Christensens urinstof bouillon eller agar af peptoner, natriumchlorid, monokaliumphosphat, glucose, urinstof, phenolrødt, destilleret vand og agar-agar. Sidstnævnte kun hvis det er det faste medium.
Artikelindeks
Enzymet urease hydrolyserer urinstof til dannelse af kuldioxid, vand og to ammoniakmolekyler. Disse forbindelser reagerer for at danne det endelige produkt kaldet ammoniumcarbonat..
Stuarts urinstof bouillon er mere bufret med en pH på 6,8. Derfor skal mikroorganismen være i stand til at danne store mængder ammoniak for at blive phenolrød. PH skal stige over 8.
Derfor er Stuarts urinstof bouillon selektiv for Proteus-arter, hvilket giver positive resultater inden for 24 til 48 timer efter inkubation, og det er ikke effektivt for bakterier, der producerer lave mængder urease, eller som langsomt hydrolyserer urinstof..
Dette skyldes, at Proteus-arter er i stand til at bruge urinstof som en nitrogenkilde. I stedet har andre urease-producerende bakterier brug for en ekstra kilde.
Pérez et al. (2002) fastslog, at Stuarts urinstof var lige så effektiv som Christensens urinstofagar til at bestemme urease i gærstammer af slægterne Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon og Saccharomyces.
Undersøgelsesforfatterne hævder at have opnået 100% aftale med begge medier (Stuart og Christensen), når de inkuberer i 24 og 48 timer; med undtagelse af, at de stammer, der formåede at gøre medierne til en stærk lyserød-fuchsia-farve, blev betragtet som positive.
Denne afklaring er nødvendig, da Lodder (1970) sagde, at næsten alle gær formår at vende skråningen af Christensens urinstofagar til lyserød. Dette skyldes, at de kan hydrolysere urinstof i små mængder og på grund af dannelsen af aminer ved oxidativ decarboxylering af aminosyrerne på overfladen. Dette skal ikke opfattes som positivt.
Christensens urinstof bouillon eller agar er mindre bufret og er i stand til at detektere små mængder ammoniak. Desuden er dette medium beriget med peptoner og glucose. Disse forbindelser får andre urease-producerende mikroorganismer til at vokse, der ikke vokser i Stuart-bouillon..
På samme måde tilbyder Christensen urinstofprøven hurtigere resultater, især for Proteus, der er i stand til at give stærkt positivt på kun 30 minutter som minimumstid og op til 6 timer som maksimal tid.
Resten af de urease-producerende mikroorganismer formår at vende farven på mediet let efter 6 timer og stærkt efter 24, 48, 72 timer eller mere, og endda nogle stammer kan give svage reaktioner efter 5 eller 6 dage.
Mediet er oprindeligt gul-orange i farve, og en positiv reaktion vil vende farven på mediet til lyserød-fuchsia. Farvens intensitet er direkte proportional med mængden af produceret ammoniak.
En negativ reaktion vil efterlade mediet i den originale farve med undtagelse af gær, der kan blive lyserød på Christensens urinstofagarmedium..
Vej de nødvendige gram i henhold til indikationerne fra det kommercielle selskab. Opløs i fortrinsvis sterilt destilleret vand. Brug ikke varme til at opløse, da urinstof er følsom over for varme.
Membranfiltreringsmetode bruges til sterilisering. Til dette anvendes et Millipore-filter med porer med en diameter på 0,45 µm. Brug ikke en autoklave. Når opløsningen er filtreret, fordeles den i sterile rør. For at opnå pålidelige resultater skal den overføres mellem 1,5 ml som en minimumsmængde og 3 ml som en maksimal mængde pr. Rør..
Opbevares i køleskab og varmes op inden brug..
Hvis filtreringsmetoden ikke er tilgængelig, skal mediet straks anvendes til pålidelige resultater..
En anden måde at forberede Stuarts urinstof på er som følger:
Nogle kommercielle huse sælger basismediet til urinstofprøven, inklusive urinstof..
Den mængde, der er angivet af det kommercielle selskab, vejes. Det opløses i destilleret vand og steriliseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter. Lad det hvile lidt, og når mediet er varmt, tilsættes 100 ml af en urinstofopløsning tilberedt med 20% og steriliseret ved filtrering..
Det fordeles i sterile rør som tidligere beskrevet.
Der afvejes 29 g dehydreret urinstof og opløses i 100 ml destilleret vand. Brug filtreringsmetoden til at sterilisere. Undgå at autoklave.
Opløs 24 g af dehydreret base-agar i 950 ml destilleret vand. Steriliseres i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter. Lad den stå, indtil den når en temperatur på 50 ° C, og tilsæt det tidligere tilberedte urinstof aseptisk.
Hæld 4 til 5 ml i sterile rør og vip, indtil de er faste. Der skal være en lang fløjte næb.
Dette medium kan også fremstilles i flydende form.
Urinstofprøven er yderst effektiv til at skelne slægten Proteus fra andre slægter i familien Enterobacteriaceae i betragtning af den hurtige reaktion, der leveres af Proteus..
Ved hjælp af Christensen-sammensætningen hjælper testen med at skelne mellem arter af samme slægt. For eksempel, S. haemolyticus og S. warneri spå Staphylococcus koagulase-negativ og beta-hæmolytisk, men de adskiller sig i det S. haemolyticus er urinstof negativ og S. warneri er urinstof positiv.
På den anden side brugte McNulty med succes Christensens 2% urinstof til at undersøge tilstedeværelsen af Helicobacter pylori i biopsiprøver taget fra gastrisk slimhinde (antral region).
Tilstedeværelsen af H. pylori det fremgår af en positiv urinstofprøve. Varigheden for at observere resultaterne er direkte proportional med mængden af tilstedeværende mikroorganismer.
Som det kan ses, er det en enkel metode til diagnose af Helicobacter pylori i gastriske biopsier.
Endelig er denne test også nyttig til at differentiere arter af slægterne Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus og Mycobacteria..
Begge metoder kræver et stærkt mikrobielt inokulum for at optimere resultaterne. Bakteriekolonier er fortrinsvis taget fra blodagar og gær fra Sabouraud agar med nogle få undtagelser. Inokulatet emulgeres i det flydende medium.
Til Stuarts urinstof bouillon inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer, idet du ved, at du kun leder efter stammer af slægten Proteus, når stammen er en bakterie. For gær kan den inkuberes ved 37 ° C eller ved stuetemperatur i 24 til 48 timers inkubation.
I tilfælde af Christensens urinstof, inkuberes den ved 37 ° C i 24 timer. Hvis testen er negativ, kan den inkuberes i op til 6 dage. Hvis testen er positiv inden 6 timer, indikerer det, at det er en stamme af slægten Proteus.
I tilfældet med Christensens ureaagar inokuleres agarens skråning stærkt uden punktering. Bouillon inkuberes og fortolkes på samme måde.
Kontrolstammer som f.eks Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 og Salmonella typhimurium. De to første skulle give positive resultater og de sidste to negative resultater..
Endnu ingen kommentarer