Medium OF foundation, forberedelse, anvendelser og begrænsninger

671
Basil Manning

Det medium OF eller glucose fermenteringsagar er en halvfast agar, der er specielt designet til undersøgelse af oxidativt og fermentativt stofskifte af kulhydrater i en vigtig gruppe af andre mikroorganismer end Enterobacteriaceae, kaldet ikke-enterisk gramnegative baciller.

Det blev skabt af Hugh og Leifson; disse forskere indså, at konventionelle metoder til at studere syreproduktion fra kulhydrater ikke var egnede til denne specifikke gruppe af bakterier.

A. Kommerciel basal OF medium. B. Rør med OF medium sået. Kilde: A og B Billeder taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Dette skyldes, at ikke-enteriske gramnegative stænger generelt producerer lave mængder syrer i modsætning til Enterobacteriaceae..

I denne forstand har OF-mediet specielle egenskaber, der kan detektere de små mængder dannet syre, både ved oxidative og fermenterende veje. Disse forskelle er relateret til mængden af ​​peptoner, kulhydrater og agar..

Dette medium indeholder færre peptoner og en højere koncentration af kulhydrater, hvilket reducerer de produkter, der alkaliserer mediet som et resultat af proteinmetabolisme og øger produktionen af ​​syrer på grund af brugen af ​​kulhydrater..

På den anden side favoriserer faldet i mængden af ​​agar formidlingen af ​​syren, der produceres gennem mediet, ud over at tillade os at observere bevægelighed.

OF-medium består af pepton, natriumchlorid, bromothymolblåt, dikaliumphosphat, agar og et kulhydrat. Det mest almindelige kulhydrat er glukose, men andre kan bruges i henhold til det, du vil studere, såsom lactose, maltose, xylose, blandt andre..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Oxidationsproces
    • 1.2 Fermenteringsproces
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Såning
    • 3.2 Fortolkning
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Som ethvert dyrkningsmedium skal OF-medium indeholde næringsstoffer, der garanterer bakterievækst; disse stoffer er peptoner.

På sin side leverer kulhydrat energi og tjener samtidig til at undersøge mikroorganismens opførsel over for det, det vil sige det tillader, at bakterierne klassificeres som en oxidativ, fermenterende eller ikke-saccharolytisk organisme..

OF-medium indeholder et 1: 5 pepton / kulhydrat-forhold i modsætning til 2: 1 konventionelle medier. Dette sikrer, at mængden af ​​alkaliske aminer dannet ved nedbrydning af peptoner ikke neutraliserer dannelsen af ​​svage syrer..

På den anden side indeholder mediet natriumchlorid og dikaliumphosphat. Disse forbindelser stabiliserer osmotisk mediet og regulerer henholdsvis pH. Bromothymolblåt er pH-indikatoren, som omdanner mediet fra grøn til gul ved produktion af syre..

Nogle mikroorganismer kan bruge kulhydrater gennem oxidations- eller fermenteringsveje, mens andre ikke tager nogen af ​​de to ruter..

Dette afhænger af egenskaberne ved hver mikroorganisme. For eksempel kan nogle strenge aerobe mikroorganismer oxidere visse kulhydrater, og fakultative anaerober kan oxideres og gæres afhængigt af miljøet omkring dem, mens andre ikke oxiderer eller gærer kulhydrater (asacarolytisk).

Endelig er der en ændring af OF-mediet, der anbefales af CDC, der indeholder en speciel OF-base med phenolrød som en indikator..

Oxidationsproces

Glukoseoxidationsprocessen kræver ikke glucosefosforylering, ligesom fermenteringsprocessen. I dette tilfælde oxideres aldehydgruppen til en carboxylgruppe, hvilket resulterer i gluconsyre. Dette oxideres igen til 2-ketogluconic.

Sidstnævnte enten akkumuleres eller nedbrydes til to molekyler pyruvinsyre. Dette system kræver tilstedeværelse af ilt eller en uorganisk forbindelse som den endelige elektronacceptor..

Produktionen af ​​syrer ad denne vej er svagere end den, der opnås ved gæringsvejen.

Fermenteringsproces

For at gæringen af ​​glukose kan forekomme ad en af ​​de tilgængelige ruter, skal den først phosphoryleres og blive glucose-6-fosfat.

Glukose gæring kan tage flere ruter, den vigtigste er Embden-Meyerhof-Parnas ruten, men de kan også tage Entner-Doudoroff ruten eller Warburg-Dickens hexose monophosphat ruten, også kendt som af nedbrydningen af ​​pentoser.

Den valgte rute afhænger af det enzymatiske system, som mikroorganismen besidder..

Via Embden-Meyerhof- Parnas

I fermenteringen af ​​glucose ad Embden-Meyerhof-Parnas-vejen opdeles den i to triomolekyler, der derefter nedbrydes til forskellige carbonforbindelser, indtil den når dannelsen af ​​glyceraldehyd-3-phosphat. Derfra stammer et mellemliggende stof, som er pyruvinsyre..

Derfra dannes forskellige typer blandede syrer, der kan variere fra en art til en anden..

Dette system forekommer i fravær af ilt og kræver en organisk forbindelse som den endelige elektronacceptor..

Entner-Doudoroff-sti

Ved gæring af glucose via Entner-Doudoroff-banen bliver glucose 6-phosphat glucono-ono-lacton-6-phosphat, og derfra oxideres det til 6-phosphogluconat og 2-keto-3-deoxy-6- phosphogluconat, til til sidst danner pyruvinsyre. Denne vej behøver ilt for at glykolyse kan forekomme.

Pentose nedbrydningsvej eller Warburg-Dickens Hexoxa monophosphatvej

Denne rute er en hybrid af de foregående 2. Det begynder svarende til Entner-Doudoroff-stien, men senere dannes glyceraldehyd-3-phosphat som en forløber for pyruvinsyre, som det forekommer i Embden-Meyerhof-Parnas-stien..

Forberedelse

Veje:

2 g pepton

5 g natriumchlorid

10 g D-glucose (eller det kulhydrat, der skal tilberedes)

0,03 g bromothymolblåt

3 gr agar

0,30 g dikaliumphosphat

1 liter destilleret vand.

Bland alle forbindelser undtagen kulhydrat og opløses i 1 liter destilleret vand. Varm og ryst, indtil den er helt opløst.

Efter afkøling til 50 ° C tilsættes 100 ml 10% glucose (filtreret).

Distribuer aseptisk 5 ml OF-medium i bomuldsdækkede reagensglas og autoklaver ved 121 ° C, tryk 15 pund i 15 minutter.

Lad størkne i lodret position.

Mediets pH skal være 7,1 Farven på det tilberedte medium er grøn.

Opbevares i køleskab.

Ansøgninger

OF-mediet er et specielt medium til bestemmelse af den metaboliske opførsel af en mikroorganisme mod et kulhydrat. Især for dem, der danner små, svage eller ingen syrer.

Sået

For hver mikroorganisme er der brug for 2 OF-rør, begge skal inokuleres med den mikroorganisme, der skal undersøges. Kolonien tages med et lige håndtag, og der foretages en punktering i midten af ​​røret uden at nå bunden; flere punkteringer kan udføres, så længe der ikke er nogen interesse i at observere bevægelighed.

Et lag sterilt flydende vaselin eller sterilt smeltet paraffin (ca. 1 til 2 ml) tilsættes til et af rørene og mærkes med bogstavet "F". Det andet rør efterlades original og er mærket med bogstavet "O". Begge rør inkuberes ved 35 ° C og observeres dagligt i op til 3 til 4 dage..

Fortolkning

Metabolisme og gasproduktion

Tabel: Klassificering af mikroorganismer efter deres opførsel i åbne (oxidative) og lukkede (fermentative) OF-rør

Kilde: Lavet af forfatteren MSc. Marielsa Gil

Gassen observeres med dannelsen af ​​bobler eller forskydning af agaren.

Det skal bemærkes, at en organisme, der kun oxiderer glukose, men ikke gærer den, heller ikke vil være i stand til at fermentere andre kulhydrater, under alle omstændigheder oxiderer den kun den. Derfor udelades det forseglede rør til undersøgelse af andre kulhydrater i denne situation..

Motilitet

Derudover kan bevægelighed ses i OF-mediet.

Positiv motilitet: vækst, der ikke er begrænset til podningszonen. Der er vækst mod siderne af røret.

Negativ motilitet: kun vækst i det oprindelige inokulum.

QA

Følgende stammer kan bruges som kvalitetskontrol: Escherichia coli, Pseudomonas aeruginosa Y Moraxella sp. De forventede resultater er:

  1. coli: Glukosegærer (både gule og mousserende rør).
  2. aeruginosa: Glukoseoxideringsmiddel (gult åbent rør og grøn eller blå tætning).
  3. Moraxella sp: Ikke-saccharolytisk (grøn eller blå åben slange, grøn forseglet slange).

Begrænsninger

-Nogle mikroorganismer kan ikke vokse i OF-medium. I disse tilfælde gentages testen, men der tilsættes 2% serum eller 0,1% gærekstrakt til mediet..

-Oxidationsreaktioner observeres ofte kun tæt på overfladen, og resten af ​​mediet kan forblive grønt, på samme måde betragtes det som positivt.

Referencer

  1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  3. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske tests til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udgave Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  4. Francisco Soria Melguizo Laboratories. 2009. OF Glucose Medium. Tilgængelig på: http://f-soria.es
  5. Conda Pronadisa Laboratories. AF glukosemedium. Tilgængelig på: condalab.com
  6. BD Laboratories. 2007. AF Basal Medium. Tilgængelig på: bd.com

Endnu ingen kommentarer