Det Thayer Martin agar er et meget nærende og selektivt fast medium til isolering af Neisseria meningitidis og Neisseria gonorrhoeae; begge kendt som patogene eller klinisk vigtige Neisserias.
En af de vigtigste specielle egenskaber ved Thayer Martin Agar er dens høje indhold af ernæringstilskud. Denne egenskab er vigtig, fordi Neisserias er meget krævende mikroorganismer ud fra et ernæringsmæssigt synspunkt og derfor ikke vokser i almindelige medier..
Da disse mikroorganismer normalt findes i ikke-sterile områder, er det på den anden side nødvendigt at tilføje hæmmere, der forhindrer væksten af den ledsagende flora uden at påvirke udviklingen af Neisseria-slægten.
Denne agar består af GC-basagar, hæmoglobin, yderligere ernæringstilskud og et kompleks af hæmmende stoffer (antibiotika og svampedræbende midler). Kommercielle huse sælger hvert tillæg separat.
Prøven, der skal sås i dette medium, afhænger af den mikroorganisme, der søges. For at Neisseria gonorrhoeae ideelle prøver er vaginale og urinrørsekretioner. Mens for Neisseria meningitidis de mest anvendte prøver er CSF, pharyngeal og nasopharyngeal exudates.
Artikelindeks
Neisserias er mikroorganismer klassificeret som irriterende, og derfor er deres isolering vanskelig. Af denne grund er Thayer Martín et komplekst medium, og hver af dets komponenter udfylder en funktion, der forklares nedenfor:
GC-agar indeholder proteosepepton, majsstivelse, natriumchlorid, dikaliumphosphat, monokaliumphosphat og agar-agar. Dets komponenter tilvejebringer de grundlæggende næringsstoffer til mikrobiel udvikling, neutraliserer giftige fedtsyrer, hjælper med at opretholde osmotisk balance, definerer pH og giver mediet konsistens..
Hæmoglobin tilvejebringer faktorer V og X (henholdsvis nicotinamid-adenindinukleotid NAD og hemin). Af denne grund vokser Haemophilus-arter også i dette medium. Hæmoglobin kan opnås kommercielt i en dehydreret form, eller frisk defibrineret bovint blod kan tilsættes til mediet..
På den anden side skal der tilsættes et berigelsestilskud til Thayer-Martin-mediet, da næringsstofferne i basisagaren ikke er tilstrækkelige til kravene i Neisseria-slægten..
Det mest anvendte berigelse supplement kaldes isovitalex. Den indeholder glutamin, adenin, NAD, cocarboxylase, guanin, jernnitrat, p-amino benzoesyre, vitamin B12, thiamin og glucose. Alle disse forbindelser er nødvendige for korrekt udvikling af patogene Neisserias.
Da det er et meget nærende medium, skal der anvendes hæmmere, der forhindrer væksten af mikroorganismer i den sædvanlige flora i området og således favoriserer isoleringen af Neisseria-slægten..
Inhibitor-komplekset er sammensat af vancomycin, colistin og nystatin. Vancomycin hæmmer væksten af Gram-positive bakterier, colistin forhindrer væksten af Gram-negative bakterier såsom Pseudomonas og nogle saprofytiske Neisserias, og nystatin virker på gær som Candida albicans.
Imidlertid blev Thayer Martin Agar senere ændret; ændringerne bestod af tilsætning af trimethoprim, stigningen i mængden af agar og tilsætningen af ekstra glucose. Disse ændringer forbedrede signifikant genopretningen af arten af Neisseria gonorrhoeae.
Det skal bemærkes, at trimethoprim hæmmer væksten af slægten Proteus og dens deraf følgende sværmende dannelse. I denne forstand er antibiotika dem, der giver Thayer Martin-mediet den selektive karakter.
Afvej 8,2 g dehydreret GC-medium og suspender i 100 ml. Bland og kog i 1 minut med hyppig omrøring for at opløses fuldstændigt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Suspender 2 g dehydreret hæmoglobin i 2 eller 3 ml varmt destilleret vand, indtil der dannes en ensartet blanding. Tilsæt mere vand lidt efter lidt for at få et volumen på 100 ml. Suspensionen skal være homogen inden sterilisering.
Steriliser i autoklave i 15 minutter.
Rekonstituer det kommercielle hætteglas med det fortyndingsmiddel, der leveres af det samme kommercielle firma. Bland godt. Mængden af fortyndingsmiddel, der skal bruges, vil blive specificeret i sætinstruktionerne..
Rekonstituer hætteglasset med det fortyndingsmiddel, der er leveret af det kommercielle selskab. Bland godt. Mængden af fortyndingsmiddel, der skal bruges, vil blive specificeret i sætinstruktionerne..
For hver 100 ml GC-agar gøres følgende:
Når GC-agaren forlader autoklaven, skal den afkøles til en temperatur på ca. 50 ° C og der tilsættes 2 ml af den tilberedte hæmoglobinopløsning, 2 ml af berigelsestilskuddet (isobitalex eller britalex) og 2 ml af inhiberingstilskuddet. Bland og server i sterile petriskåle..
Lad det størkne og opbevares i køleskabet indtil brug.
Farven på det tilberedte medium er kirsebærrød. Mediets endelige pH er 7,2 ± 0,2
Afvej 8,2 g dehydreret GC-medium og suspender i 100 ml. Tilsæt 1 g agar-agar og tilsæt 0,3 g glucose. Bland og kog i 1 minut med hyppig omrøring for at opløse helt. Steriliser blandingen i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter.
Forbered hæmoglobin og berigelse supplement som beskrevet ovenfor.
Det anvendte inhiberingstilskud er V.C.N.T (vancomycin, colistin, nystatin, trimethoprim).
Fortsæt som beskrevet for den originale Thayer Martin-agar.
Thayer Martin Agar skal have lov til at varme op, før prøverne stribes. Almindeligt anvendte prøver er svælgpindepinde, næsespindepinde, vaginal, urethral og / eller rektal udflåd og CSF..
Brug friske prøver og lav stærke podestoffer på agaren. Prøver sås direkte ved materialeafladning og derefter udtømning stribet på overfladen.
Pladerne inkuberes ved 35-37 ° C i 24 til 48 timer i en mikroaerofil krukke (5% COto). Ved afslutningen af inkubationstiden undersøges pladerne for små kolonier, gråfarve og undertiden slimformede..
Udfør Gram og bekræftende biokemiske tests på mistænkelige kolonier.
Følgende mikrobielle stammer kan bruges til at udføre kvalitetskontrol på Thayer Martin Agar.
Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 og Neisseria meningitidis ATCC 13090; der forventes tilfredsstillende udvikling i begge stammer.
Følgende stammer skal også medtages: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 og Candida albicans ATCC 10231. I dem alle forventes en total eller delvis hæmning i dette medium..
-Det skal huskes, at bakterier, der er resistente over for de anvendte hæmmere, kan vokse i mediet.
-Der er stammer af Neisseria gonorrhoeae som kan være følsomme over for den anvendte koncentration af vancomycin. Af denne grund anbefales det at bruge chokoladeagar suppleret med isovitalex, men uden hæmmere..
-Der er nystatinresistente gærstammer, der kan vokse i dette medium og forstyrre isoleringen af patogene Neisserias, især gonokokker..
Endnu ingen kommentarer