Det lactophenolblåt eller bomuldsblåt er et præparat med enkle farveegenskaber. Det bruges i kliniske laboratorier til primært at farve svampestrukturer som hyfer, kimrør og sporer..
Det hjælper med den formodede eller foreløbige diagnose af visse svampe, men det tilrådes altid at forstærke diagnosen med mere specifikke tests, såsom biokemiske eller serologiske tests..
Lactophenolblåt består af mælkesyre, anilinblåt, glycerin, phenol og deioniseret vand. Det kan fremstilles i laboratoriet, eller det kan købes klar til brug. Når den er klar, er den klar til brug, under ingen omstændigheder skal den fortyndes, da denne handling vil give forfærdelige resultater.
Koncentrationen af dets komponenter gør den ideel til farvning af svampestrukturer, da phenol eliminerer den ledsagende bakterielle mikrobiota, mens mælkesyre genererer en beskyttende film omkring svampestrukturen. Endelig har anilinblåt en affinitet til at klæbe til svampens strukturer..
Artikelindeks
Med lactophenolblåt udføres en simpel farvning af svampestrukturer i en bestemt mykologisk kultur. Det kaldes simpelt, fordi det kun bruger et farvestof.
Lactophenolblåt, bortset fra farvning, fungerer også som en klaringsmiddel for prøven takket være den fælles virkning af mælkesyre og phenol, desuden opfører phenol sig som en mordant og forhindrer samtidig lysis af mikroorganismen ved at hæmme den hydrolytiske enzymer, der kan være til stede.
Mens mælkesyre bevarer morfologien af svampens strukturer.
På den anden side har anilinblåt den egenskab at klæbe eller binde til kitinholdige strukturer. Strukturer bejdser lyseblå.
Det skal bemærkes, at cellevæggen i svampemikroorganismer, især forme, indeholder kitin, hvorfor dette farvestof er ideelt til farvning af disse mikroorganismer..
Lactophenolblå opløsning er en let overskyet, let overskyet, vandig farvestof, stærkt sur, lyseblå farve. Den forbliver stabil, hvis den opbevares mellem 15 ° C og 25 ° C. Flasken skal holdes ordentligt lukket. Det er irriterende og ætsende for hud og slimhinder.
Formlen til fremstilling af en liter lactophenolblå er som følger:
-250 g / l mælkesyre
-1,0 g / L anilinblåt eller methylblåt
-500 g / L glycerin
-250 g / l phenol
-250 ml deioniseret eller destilleret vand.
Phenolen opløses i det tidligere opvarmede vand. Mælkesyre og glycerin tilsættes og blandes meget godt. Endelig opløses den anilinblå. Blandes igen og er klar til brug.
Portionerne til fremstilling af 80 ml lactophenolblå opløsning er:
-20 g phenolkrystaller
-20 ml mælkesyre
-40 ml glycerin eller glycerol
-20 ml destilleret vand.
Det bruges til at plette svampestrukturer og gennem de morfologiske egenskaber, der observeres på det mikroskopiske niveau, være i stand til at stille en formodet diagnose af svampen.
- En ren svampekultur er taget, hvorfra du vil observere dens strukturer.
- Det foretrækkes at arbejde i en laminær strømningshætte eller under tænderen ved hjælp af en maske og handsker, da det er nødvendigt at overholde biosikkerhedsstandarder, fordi de fleste forme er lette at sprede i miljøet og derfor udgør en fare for operatøren.
- En dråbe lactophenolblåt placeres på et dias..
- En lille firkant klæbebånd af god kvalitet skæres og klæbes meget omhyggeligt til enden af platinahåndtaget, allerede steriliseret og koldt..
- Platinahåndtaget nærmes til den mest overfladiske del af svampekolonien, og kulturen berøres meget omhyggeligt, nøjagtigt hvor klæbebåndet er placeret..
- Derefter føres det til objektglasset og placeres lige over dråben lactophenolblåt, idet man sørger for, at båndet strækkes perfekt og smøres med farvestoffet. Platinahåndtaget er meget forsigtigt fjernet.
- En anden dråbe lactophenolblåt placeres på båndet og et dækglas ovenpå. Brug ikke for meget pres for at undgå at ødelægge svampens strukturer, da disse er ekstremt skrøbelige. Farvestoffet skal have lov til at virke i ca. 3 til 4 minutter.
- Efter denne tid er præparatet klar til at blive observeret under et mikroskop i 10X eller 40X forstørrelse. Hvis der kræves observation ved 100X, skal du bruge nedsænkningsolie.
- Svampens strukturer er generelt farvede blå med undtagelse af dematiaceous svampe, der bevarer deres karakteristiske brune farve af denne type svampe..
Hvis det er nødvendigt at undersøge en direkte biologisk prøve, såsom sputum, pus, ekssudater, sekreter, blandt andre, skal disse have en forudgående procedure til dekontaminering af prøven. NaOH-opløsning anvendes til dette.
I tilfælde af hårprøver kan disse farves direkte.
Flere berørte hår (10 i alt) tages fra de formodede tinea capitis-læsioner (alopeciske områder) og placeres på et dias (3 til 4 hår pr. Objektglas). Et par dråber lactophenolblåt placeres ovenpå og straks dækkes med et dækglas..
Tag fat i diaset med pincet og varm forsigtigt over en brænder. For at gøre dette skal du foretage 3 til 4 hurtige passeringer gennem flammen. Overhold mikroskopet ved 40X og se efter sporer uden for eller inde i håret (henholdsvis ectothrix eller endothrix). Tilsæt om nødvendigt nedsænkningsolie og observer ved 100X.
Efter inkubering af den formodede kultur af Candida albicans i humant serum i 2 til 4 timer ved 37 ° C, tag en del af opløsningen og plet med lactophenolblåt. Præparatet observeres under mikroskop ved 40X. Kimrøret er til stede, og blastosporer pletter lyseblå.
National Fire Protection Association (NFPA) etablerer sikkerhedsdatabladet for kemiske stoffer med hensyn til den risiko, det repræsenterer i henhold til forskellige aspekter, disse er symboliseret med en farvet rombe og et tal, der spænder fra 0-4.
Sundhedsfarer identificeres med blåt, antændelighed i rødt, ustabilitet eller reaktivitet i gult og enhver særlig fare i hvidt..
Sundhedsrisikoen for lactophenolblåt ifølge NFPA er niveau 3. Dette betyder, at stoffet er ekstremt farligt ved indtagelse eller i direkte kontakt med hud eller slimhinder..
Det er et meget ætsende og irriterende stof.
I kontakt med hud og slimhinder forårsager det alvorlige forbrændinger.
Hvis det indtages, kan det forårsage hovedpine, forvirring, sløvhed, bevidstløshed, åndedrætsbesvær og endda død..
Ifølge NFPA er Lactophenol Blue klassificeret som niveau 1 for antændelighed. Dette betyder, at det kun brænder, hvis det opvarmes over 94 ° C..
Opført under NFPA på niveau 0 (nul) for reaktivitet. Dette betyder, at det ikke har nogen risiko for reaktivitet, det vil sige, det er et kemisk stabilt stof..
Tilbyder ingen yderligere særlige farer.
Endnu ingen kommentarer