Det Biuret er et reagens, der anvendes til bestemmelse af proteiner med lang kæde og kort kæde. Det bruges især inden for området analytisk kemi og urinanalyse til at undersøge koncentrationen af totale proteiner i serum, plasma og urin..
Proteinværdier kan øges eller nedsættes i visse patologier. Hypoproteinemia symptomer forekommer normalt hos patienter med nyresygdom, hos underernærede patienter og hos patienter med kroniske infektioner..
Mens hyperproteinæmi observeres i patologier som multipelt myelom, systemisk lupus erythematosus, bakteriel endocarditis, bakteriel meningitis, Waldenstroms makroglobulinæmi, blandt andre..
På den anden side skyldes tilstedeværelsen af protein i urinen filtreringen af albumin i nyrerne. Dette er en patologisk adfærd, der skal undersøges.
I denne forstand er Biuret meget nyttigt, da det gør det muligt at kvantificere tilstedeværelsen af proteiner i serum, plasma, urin blandt mange andre prøver..
Selv Biuret kan bruges til at undersøge tilstedeværelsen og koncentrationen af proteiner i dårligt udforskede prøver eller prøver med ukendt sammensætning. Derfor bruges den i vid udstrækning inden for forskningsområdet.
Biuret-testen er baseret på påvisning af peptidbindinger. Testen finder sted i et alkalisk medium. Prøven skal indeholde mindst to peptidbindinger, for at et violet-lilla kompleks kan dannes. Komplekset er dannet af foreningen af bindingerne og kobberionen.
Artikelindeks
Biurets reagens består af kaliumhydroxid, kobbersulfat og natrium- og kaliumtartrat. Natriumhydroxid bruges til at alkalisere mediet, da denne tilstand er afgørende for, at reaktionen finder sted.
De stoffer, der reagerer med proteiner, er kobbersulfat, mens natriumtartrat har den funktion, at det ikke tillader dannelse af kobberhydroxid, som har tendens til at udfældes og interfererer med reaktionen..
Hvis der findes stoffer med peptidbindinger (polypeptider eller proteiner) i prøven, vil testen være positiv.
En reaktion fortolkes som positiv, når opløsningen bliver lilla. Farven frembringes ved dannelsen af et kompleks mellem mindst to peptidbindinger, der har CO-NH-gruppen og de kupiske kationer.
Det violette kompleks kan dannes på to måder: den ene er ved tab af protoner fra amidgrupperne, der binder til metallet (depronotation), og den anden ved foreningen af ilt- og nitrogenelektronerne, der er frie og binder. Med kobber.
Denne reaktion kan variere i intensitet og farve afhængigt af typen af protein..
Testen kan udføres kvalitativt eller kvantitativt. I den kvalitative form rapporteres det som positivt eller negativt. Mens den er i den kvantitative form kan koncentrationen måles ved den spektrofotometriske metode.
Reaktionen læses mellem 540-560 nm. Intensiteten af farven er direkte proportional med koncentrationen af peptidbindinger i prøven..
-Natriumhydroxid (NaOH) 20%
-1% Cupric Sulfate Pentahydrate (CuSO4. 5HtoELLER)
-Blandet natriumkaliumtartrattetrahydrat (KNaC4H4ELLER64HtoELLER)
-Det skal opbevares nedkølet.
-Anbring 100 µl af prøven eller standarden, der skal analyseres, i et reagensglas.
-Tilsæt 2 ml natriumhydroxid.
-Bland meget godt.
-Tilsæt 5 ml Biuret-reagens.
-Bland og lad stå i 25 minutter ved stuetemperatur, dæk og beskyt mod lys.
-Overhold dannelsen af farve eller ej, og mål spektrofotometrisk.
Bovint serumalbumin kan bruges som standard til at udføre kalibreringskurven. Der fremstilles forskellige koncentrationer ud fra det. For eksempel 25, 50, 75, 100, 125 og 150%.
Reaktionen indstilles med alle disse kendte koncentrationer, og absorbansen læses ved en bølgelængde på 540 nm. Med dataene for de kendte koncentrationer og absorbansaflæsningerne foretages kalibreringskurven.
I hver bestemmelse eller batch af forarbejdede prøver anbefales det at montere en standard. Bovint serumalbumin 0,1-2 mg / ml kan anvendes som kalibreringsstandard..
Målinger foretages på et spektrofotometer ved 540 nm.
Lineæritet er opfyldt op til en koncentration på 12 g / dl.
Selvom det ikke er særlig hyppigt, skal det bemærkes, at nogle stoffer kan interferere under udførelsen af denne test. For eksempel kan tilstedeværelsen af ammoniak hæmme dannelsen af farve.
På samme måde kunne andre stoffer absorbere ved den samme bølgelængde, såsom visse pigmenter..
På den anden side kan der genereres interferens, når et andet stof end peptidbindingen danner et kompleks med det kobberiske salt. Eksempel: nogle kulhydrater og visse lipider.
Hvis prøven, der skal analyseres, har en form for bundfald, skal den filtreres eller centrifugeres, før testen monteres..
Testen påvirkes ikke af tilstedeværelsen af:
-Bilirubin op til en koncentration på 20 mg / dl.
-Hæmoglobin op til en koncentration på 750 mg / dl.
-Dextran op til en koncentration på 30 g / L.
-Triglycerider op til en koncentration på 4000 mg / dl.
-Det er en enkel metode til at udføre.
-Det er en økonomisk test.
-Har høj specificitet for proteiner.
-Lille interferens.
Det har dårlig følsomhed til at detektere lave mængder protein. Arbejdet udført af Fuentes og samarbejdspartnere bekræfter, at Biuret-testmetoden har en detektionsgrænse på 1 mg / ml protein og en kvantificeringsgrænse på 3 mg / ml.
Imidlertid rapporterer anden forskning udført ved University of Amazonia meget lavere værdier. Detektionsgrænsen rapporteret af undersøgelsen er 0,020 mg / ml, og kvantificeringsgrænsen er 1,33 mg / ml..
Biuret-reagenset eller testen bruges til bestemmelse af proteiner i kliniske og ikke-kliniske prøver i rutine- og forskningslaboratorier.
I mange patologier er det vigtigt at bestemme koncentrationen af totale proteiner i kliniske prøver, som kan være høje eller lave.
De er forhøjet i:
-Multipelt myelom,
-Systemisk lupus erythematosus,
-Bakteriel endokarditis,
-Bakteriel meningitis,
Waldenstroms makroglobulinæmi blandt andre.
Det er faldet i:
-Nyreinsufficiens,
-Mennesker med svær grad af underernæring,
-Patienter med blandt andet kroniske infektioner.
De mest almindelige kliniske prøver er serum, plasma og urin. Den normale værdi af proteiner i serum eller plasma er 6,0-8,8 gr / dl.
Koncentrationen af protein i urinen hos voksne overstiger ikke tallet 150 mg / 24 timer.
Spædbørn: < a 0,50 mg
Børn 2 år og ældre: indeks: 0,20 mg
Voksne: < 0,2 mg
Biuret-reaktionen kan bruges til mange typer ikke-kliniske prøver, såsom mejeriprodukter, modgift eller ethvert ukendt stof, som du vil undersøge forekomsten af proteiner for..
Endnu ingen kommentarer