Thioglycollate bouillon begrundelse, forberedelse og anvendelser

2009
Philip Kelley

Det thioglycollat ​​bouillon Det er et beriget kulturmedium med en flydende konsistens. Det er kendt af akronymet FTM for dets akronym på engelsk Fluid Thioglycollate Medium. Det blev oprettet af Brewer og modificeret i 1944 af Vera, der tilføjede kaseinpepton.

Dette medium har et lavt oxidationsreduktionspotentiale, det anbefales derfor ikke til udvikling af strenge aerobe bakterier, men det er ideelt til at inddrive fakultative aerobe, strenge anaerobe og ikke-krævende mikroaerofile bakterier..

Thioglycollat ​​bouillon uden indikator. Viser udflåd. Kilde: Bobjgalindo [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Den høje ydeevne, der observeres med dette medium i isolering og genvinding af en lang række mikroorganismer, har gjort det accepteret af United States Pharmacopoeia (USP), af den officielle sammenslutning af landbrugskemikere (AOAC) og af European Pharmacopoeia (EP)..

Disse organisationer anbefaler det til test af sterilitetskontrol af farmaceutiske produkter og til berigelse af forskellige typer prøver..

Cado-thioglycolat består af gærekstrakt, pancreasfordøjelse af kasein, vandfri dextrose, L-cystin, natriumchlorid, natriumthioglycollat, resazurin og agar i lille mængde.

Der er flere versioner af dette medium, blandt dem er: thioglycollate bouillon med indikator, thioglycollate bouillon uden indikator, thioglycollate bouillon med indikator beriget med hemin og vitamin K1, og calciumcarbonat-thioglycollat-bouillon.

Det skal bemærkes, at den thioglycollatvæske, der er beriget med hemin og vitamin K, tjener til at forøge væksten af ​​hurtige anaerober, og den thioglycollatvæskevariant, der indeholder calciumcarbonat, er nyttig til at modvirke de syrer, der produceres under mikrobiel vækst..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Thioglycollat ​​bouillon med indikator
    • 2.2 Thioglycollat ​​bouillon med indikator beriget med hemin og vitamin K1
    • 2.3 Thioglycollat ​​bouillon med calciumcarbonat
    • 2.4 Thioglycollat ​​bouillon uden indikator
  • 3 Brug
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Anbefalinger
  • 6 Referencer

Basis

Thioglycollat ​​bouillon betragtes som et ikke-selektiv berigelsesmedium, da det tillader vækst af de fleste ikke-krævende bakterier. Ernæringsmæssige krav leveres af gærekstrakt, fordøjelse i bugspytkirtlen og glukose.

På den anden side indeholder dette medium, selvom det er en bouillon, en lille mængde agar; Dette betyder, at det har et lavt oxidationsreduktionspotentiale på grund af det faktum, at det sænker indgangen af ​​ilt på en sådan måde, at iltet falder, når det går dybere ind i røret..

Derfor er dette medium ideelt til udvikling af fakultative aerobe, mikroaerofile og strenge anaerobe bakterier, sidstnævnte 2 uden behov for at inkubere under disse betingelser. Det samme medium regulerer mængden af ​​ilt i mediet, idet det er fraværende i bunden af ​​røret og i tilstrækkelig mængde på overfladen..

Ligeledes fungerer thioglycollat ​​og L-cystin som reduktionsmidler og hjælper med at forhindre ophobning af stoffer, der er skadelige for bakteriel udvikling, såsom peroxid. Derudover indeholder disse forbindelser sulfhydrylgrupper (-SH-), hvilket neutraliserer de hæmmende virkninger af kviksølvderivater, arsenikaler, blandt andre tungmetaller..

Resazurin er på sin side en indikator for oxidreduktion. Dette stof er farveløst, når det reduceres og lyserødt, når det oxideres. Der er indikatorer og ikke-indikatorer thioglycollate bouillonvarianter. Dens anvendelse afhænger af typen af ​​prøve og laboratoriets præference..

I mellemtiden opretholder natriumchlorid den osmotiske balance i thioglycollat ​​bouillon, og brugen af ​​glucose i vandfri form forhindrer overskydende fugt i det dehydratiserede medium..

Forberedelse

Thioglycollate bouillon med indikator

Afvej 29,75 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Blandingen får lov til at henstå i ca. 5 minutter. Bring til en varmekilde og ryst ofte, indtil den er helt opløst..

Hæld mediet i reagensglas og autoklaver ved 121 ° C i 15 minutter. Lad afkøle inden brug. Kontroller indsatsen af ​​det kommercielle hus for dets bevarelse. Nogle anbefaler at opbevare ved stuetemperatur et mørkt sted, og andre i et køleskab beskyttet mod lys.

PH i det fremstillede medium er 7,1 ± 0,2.

Farven på det dehydrerede medium er lys beige, og det fremstillede medium er lysegult med en vis opalcens..

Thioglycollat ​​bouillon med indikator beriget med hemin og K-vitamin1

Der er kommercielle midler, der allerede bringer hemin og vitamin K1, specielt til dyrkning af anaerober.

Hvis det berigede anaerobe medium ikke er tilgængeligt, kan den basiske thioglycollat ​​bouillon fremstilles. Til dette tilsættes 10 mg heminhydrochlorid og 1 mg vitamin K.1 for hver liter medium. Men hvis der tilsættes blod eller serum til thioglycollat-bouillon, er tilsætning af hemin eller K-vitamin ikke nødvendig..

Thioglycollat ​​bouillon med calciumcarbonat

Den kommer kommercielt og fremstilles efter instruktionerne på indsatsen.

Thioglycollate bouillon uden indikator

Dette har den samme sammensætning af det basiske thioglycollat, men indeholder ikke resazurin.

Vej 30 g af det dehydratiserede medium og opløs det i en liter destilleret vand. Resten af ​​præparatet er det samme som beskrevet i thioglycollat ​​bouillon med indikator.

Brug

Thioglycollat ​​bouillon er nyttig til berigelse af kliniske prøver, især dem fra sterile steder. Det er også nyttigt til ikke-kliniske prøver, såsom kosmetik, medicin osv..

Til inokulering af flydende prøver (såsom CSF, synovialvæske, blandt andre) centrifugeres prøverne, og derefter tages 2 dråber af sedimentet og anbringes i thioglycollat-bouillon. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer. Hvis der ikke er nogen vækst (turbiditet) på denne tid, inkuberes op til maksimalt 7 dage.

Hvis prøven tages med en vatpind, podes dyrkningsmediet først i plader, og til sidst indføres podepinden i bouillon, den fremspringende del opdeles, og røret lukkes og efterlader podepinden inde. Inkuber ved 35 ° C i 24 timer, maksimalt 7 dage.

For faste prøver homogeniseres i fysiologisk saltopløsning (SSF) og podes derefter thioglycollat-bouillon med 2 dråber suspension..

Det kan undertiden bruges som et transportmedium til prøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelsen af ​​strenge anaerober eller som en backup berigelse bouillon..

Thioglycollat-bouillonvarianten med calciumcarbonat anvendes til vedligeholdelse af kontrolstammer i længere tid, fordi den har evnen til at neutralisere de syrer, der produceres ved anvendelse af glucose; disse syrer er giftige for visse bakterier.

Vækst i thioglycollat ​​bouillon vil blive observeret af mediumets uklarhed. Det anbefales at udføre en Gram-plet og derefter subkultur i ikke-selektive og selektive medier, afhængigt af typen af ​​prøve og de mistænkte mikroorganismer..

QA

Til sterilitetskontrol anbefales det at inkubere en eller to bouillon uden podning. Det forventede resultat er en klar bouillon uden farveændring, skønt det er normalt at se en lyserød farve på rørets overflade..

Til kvalitetskontrol bør mellem 10 - 100 CFU af certificerede kontrolstammer inokuleres, f.eks Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostridium sporogenes ATCC 11437, Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Inkuber ved 30-35 ° C i aerobiose i 24 timer op til maksimalt 3 dage, da disse mikroorganismer vokser hurtigt.

God udvikling forventes i alle tilfælde undtagen Micrococcus luteus Y Bacillus subtilis, hvor der kan være moderat udvikling.

Til kvalitetskontrol af thioglycollat ​​bouillon beriget med hemin og vitamin K1, kontrolstammer kan bruges Bacteroides vulgatus  ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 og Bacteroides fragilis ATCC 25285. Det forventede resultat er tilfredsstillende vækst.

anbefalinger

-Undertiden kan overfladen på indikatoren thioglycollate bouillon ses til at blive lyserød; Dette skyldes oxidation af mediet. Hvis den lyserøde farve dækker 30% eller mere af den samlede bouillon, kan den opvarmes i et vandbad i 5 minutter, afkøles igen og bruges..

Dette fjerner det absorberede ilt og returnerer mediet til sin oprindelige farve. Denne procedure kan kun udføres en gang.

-For at forbedre væksten af ​​aerobe bakterier skal den inkuberes med hætten let løs. Det foretrækkes imidlertid at anvende en hjerneinfusionsbuljong eller trypticase-sojabouillon til dette formål til korrekt udvikling af strenge aerober..

-Frysning af mediet eller overophedning bør undgås, da begge forhold beskadiger mediet..

-Direkte lys beskadiger dyrkningsmediet, det skal opbevares beskyttet mod lys.

Referencer

  1. Britannia Laboratories. Thioglycollate USP med indikator. 2015.Tilgængelig på: labBritania.com.
  2. Chios Sas laboratorier. 2019. Thioglycollate bouillon. Tilgængelig på: quios.com.co
  3. BD Fluid Thioglycollate Medium (FTM) laboratorier. 2003. Tilgængelig på: bd.com/Europe
  4. BBL-medier fremstillet i rør til dyrkning af anaerobe mikroorganismer. Thioglycollate medier. 2013. Tilgængelig på: bd.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer