Det kapselfarvning er en differentiel farvningsteknik, der har den egenskab at fremhæve polysaccharidstrukturen, der omgiver visse bakterier og gær kaldet kapsel. Det bruges i kliniske laboratorier til at diagnosticere visse patologier forårsaget af kapslede mikroorganismer..
Det bruges også i undervisningslaboratorier til demonstration af denne morfologiske struktur til studerende inden for sundhedsvidenskabelige karrierer, såsom: medicin, bioanalyse, sygepleje eller cytoteknologi, blandt andre..
Der er flere enkle teknikker til at demonstrere kapslens tilstedeværelse i mikroorganismerne, der har den, disse er: den negative plet, Anthony-pletten og en variant, der kombinerer de to foregående.
Negativ farvning bruges hovedsageligt i CSF-prøver, når der er mistanke om tilstedeværelse af gær. Cryptococcus neoformans. Denne gær er en almindelig årsag til meningitis.
Denne teknik bruger nigrosin eller Indien-blæk og er baseret på at skabe en kontrast mellem baggrunden for præparatet og den uigennemtrængelige kapsel af mikroorganismen. Baggrunden bliver mørk, og kapslen er farveløs. På denne måde fremhæves denne struktur.
Med hensyn til Anthony-teknikken kan det siges, at den mest bruges i undervisningslaboratorier til at demonstrere polysaccharidstrukturen i bakterier såsom Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae Y Neisseria meningitidis.
Anvendelsen af denne teknik til diagnostiske formål er meget sjælden, da der er andre rutineprøver, der muliggør identifikation af disse mikroorganismer..
Artikelindeks
Kapslen er en stærk struktur af polysaccharid-natur. Dette beskytter mikroorganismer mod fagocytose og er derfor en vanskelig struktur at trænge igennem.
Derfor er kapselpletter baseret på kontrast. Farvestofferne pletter bunden af præparatet, mens kapslen forbliver farveløs.
Derfor er kapslen let genkendelig med disse teknikker. Hvis mikroorganismen ikke har en kapsel, kan den ikke skelnes med denne type farve, fordi alt bliver farvet den samme farve..
Alle de teknikker, der bruges til at farve kapslen, har den samme begrundelse på trods af forskellige farvestoffer og procedurer..
Anthony's plet bruger krystalviolet som en plet. Dette pletter bakteriekroppen og baggrunden lilla.
På den anden side anvendes 20% kobbersulfat. Dette tjener som en vaskeopløsning, dvs. fjerner overskydende violet krystal fra præparatet, hvilket gør kapslerne klare, men uden at miste bakteriekroppens eller baggrundens farve..
- Iriserende mælk.
- Mikroskoprutschebane.
- 1% violet krystal.
- 20% kobbersulfat.
- Optisk mikroskop.
- Nedsænkningsolie.
Denne teknik består af:
Det er vigtigt ikke at bruge varme hverken til at fastgøre eller tørre, da dette beskadiger kapslen. Vask heller ikke med vand.
Iriserende mælk er et fremragende dyrkningsmedium, da det tilvejebringer de næringsstoffer, der er nødvendige for, at mikroorganismen kan udvikle en fremtrædende kapsel.
På den anden side vil den iriserende mælk danne en tyk og kompakt bund, der farves lilla sammen med bakterielegemet, men kapslen, der omgiver mikroorganismen, forbliver farveløs. Derfor observeres en klar halo omkring bakterielegemet..
Det er en simpel teknik at udføre. Ingen reparation krævet.
Ligeledes skal det bemærkes, at andre dyrkningsmedier kan anvendes, men mælkemediet foretrækkes, fordi det har den fordel, at det tilvejebringer mere fremtrædende kapsler..
Det er en lidt mere besværlig teknik end negativ farvning, og dens visualisering kræver, at man venter på, at præparatet tørrer helt..
- Mikroskopglas.
- Dyrkningsmedium med mikroorganismen.
- Kinesisk blæk eller nigrosin.
- Optisk mikroskop.
- Fysiologisk saltopløsning.
Anbring en dråbe fysiologisk saltvand på dækglas og opløs en lille del af den mikrobielle kultur. Det er vigtigt, at præparatet ikke er for tykt. Anbring derefter en dråbe kinesisk blæk eller nigrosin og bland.
Et dækglasplade placeres derefter over præparatet uden at flyde over væsken. Det observeres under mikroskopet ved først at fokusere på et 10X-mål og derefter flytte til 40X.
Denne teknik kan også bruges direkte på CSF-prøver. I stedet for at placere en dråbe mikrobiel kultur placeres en dråbe CSF.
Det er en enkel metode til at udføre og samtidig billig. Kræver ikke fiksering eller tørring af præparatet.
Det har den ulempe, at det skal observeres under et mikroskop, før præparatet tørrer, for hvis dette sker, vil mikroorganismerne trække sig sammen, hvilket vil gøre visualiseringen vanskelig..
På den anden side kan falske positive opstå, hvis analytikeren er uerfaren, da leukocytter ofte forveksles med gær..
Observation af gærkapsler med kinesisk blæk eller nigrosin-teknik bør betragtes som en formodet diagnose af Cryptococcus neoformans indtil det demonstreres med kulturen.
Dette skyldes, at der er andre gær, der kan være årsagen til meningitis og ikke kun Cryptococcus neoformans, såsom slægten Candida og Rhodotorula såvel som andre arter af Cryptococcus.
Hvis der er kapslede mikroorganismer, vil der blive observeret en mørk baggrund med transparente kroppe, der flyder i væsken og fremhæver tilstedeværelsen af kapslen..
Denne teknik kan også udføres med nigrosin. Det er en kombination af de tidligere forklarede teknikker. Denne teknik bruger krystalviolet og indisk blæk eller nigrosin.
Bakterielegemet bliver lilla fra krystalviolet, fordi det er negativt ladet, mens nigrosin farver bunden af udstrygningen. Hvis bakterien har en kapsel, vises den som en gennemsigtig glorie omkring mikroorganismen..
Krystalviolet kan erstattes af en af disse farver: safranin, basisk fuchsin eller methylenblåt.
- Violet glas.
- Nigrosin eller indisk blæk.
- Mikroskopglas.
- Mikroskop.
- Dyrk mikroorganismen i et dyrkningsmedium.
- Placer en dråbe af kulturen på enden af et dias, og placer ved siden af det en dråbe krystal-Indien-blæk eller nigrosin, bland og spred med enden af et andet dias..
- Lufttør og opvarm ikke.
- Dæk med en krystalviolet opløsning i 1 minut, vask med destilleret vand men meget fint (blid strøm), lad det lufttørre.
- Observer under et mikroskop med et nedsænkningsmål. Søg mod enderne af spredningen.
En violet farvet bakteriel krop og en mørk baggrund ses. Kapslen vises, hvis den er til stede, farveløs omkring bakterierne.
Endnu ingen kommentarer