Det kromatogram er en todimensionel grafisk registrering opnået på et absorberende medium, der viser adskillelsen af stoffer ved kromatografi. Et synligt mønster, toppe eller pletter dannes på kromatogrammet, hvilket afspejler den fysiske adskillelse af komponenterne i en blanding.
Den nederste figur er et kromatogram med tre toppe, A, B og C, af tre komponenter i prøven adskilt ved kromatografi. Det observeres, at hver af de tre toppe har forskellig højde og placering på kromatogrammet..
Ordinaten eller Y-aksen registrerer information om signalets intensitet (i millivolt mV i dette tilfælde). Repræsenterer registreringen, afhængigt af detektoren, af en eller anden fysisk egenskab ved stoffet eller den separate komponent i blandingen.
Højden af toppen er proportional med koncentrationen af komponenten adskilt fra prøven i et optimalt system. Således er det for eksempel let at visualisere, at komponent B findes i en højere andel end A og C.
På abscissa- eller X-aksen er retentionstiden for komponenterne i prøven eller blandingen repræsenteret. Det er den tid, der går fra injektionen af prøven, indtil den stopper, idet den er forskellig for hvert rent stof.
Artikelindeks
Det er den endelige registrering af hele kromatografiprocessen. Parametre, der er af analytisk interesse, fås ud fra den. Dette kan opnås som en elektronisk fil, et trykt histogram eller på procesmediet; på papir, for eksempel.
Y-aksen genereres af signal- eller intensitetsresponsdetektorer, såsom spektrofotometre. En optimal analyse af tiden, af karakteristikaene for de opnåede toppe eller pletter er vigtig; størrelse, placering, farve, blandt andre aspekter.
Kromatogramanalyser kræver generelt brug af kontroller eller standarder, stoffer med kendt identitet og koncentration. Analysen af disse kontroller gør det muligt at fastslå ved sammenligning med de karakteristiske prøver af komponenterne i den undersøgte prøve.
I kromatogrammet kan observation og analyse af, hvordan adskillelsen af komponenterne i en blanding blev udført, udføres. Dens optimale undersøgelse gør det muligt at identificere et stof, demonstrere dets renhed, kvantificere mængden af stoffer, der er til stede i en blanding, blandt andre aspekter.
De ekstraherede oplysninger kan være kvalitative; for eksempel når stoffer identificeres og deres renhed bestemmes. Kvantitative oplysninger vedrører bestemmelsen af antallet af komponenter i blandingen og koncentrationen af den separerede analyt..
Ved at analysere resultaterne af kromatogrammet kan forskellige stoffer identificeres ved at sammenligne retentionstiderne med kendte stoffer. Det kan observeres, hvis stofferne, der undersøges, kører samme afstand, hvis de har samme tid som de kendte stoffer.
For eksempel kan kromatogrammet detektere og identificere metabolitter af lægemidler, såsom stimulanser og steroider i atletens urin. Det er en vigtig støtte i undersøgelsen og forskningen af nogle metabolitter produceret af genetiske lidelser hos den nyfødte.
Kromatogrammet letter påvisning af halogenerede kulbrinter, der findes i drikkevand, blandt andre stoffer. Det er vigtigt i kvalitetskontrol laboratorieanalyser, da det gør det muligt at detektere og identificere forurenende stoffer i de forskellige produkter.
I et kromatogram kan du skelne mellem rene og urene stoffer. Et rent stof ville producere en enkelt top på kromatogrammet; mens et urent stof ville producere to eller flere toppe.
Ved korrekt justering af de betingelser, hvorunder kromatografien udføres, kan to stoffer forhindres i at danne en enkelt top..
Ved at analysere kromatogrammets spidsareal kan koncentrationen af prøvekomponenterne beregnes.
Derfor er arealet af toppen proportionalt med mængden af stoffet, der er til stede i prøven. Disse kvantitative data opnås i meget følsomme systemer, såsom dem, der genereres ved f.eks. Gas eller væskekromatografi.
En af klassificeringerne af kromatogrammer er tæt knyttet til de forskellige typer kromatografi, som genererer det tilsvarende kromatogram..
Afhængigt af driftsforholdene vil detektorerne blandt andet variere kromatogrammet i dets indhold og kvalitet..
Kromatogrammet kan genereres direkte på papir eller tyndt lag, der direkte viser fordelingen eller fordelingen af komponenterne i prøven.
Det er meget nyttigt til adskillelse og undersøgelse af farvede stoffer, der har naturlige pigmenter, såsom klorofyl. Det kan udsættes for udviklingsprocesser, hvis stofferne ikke har naturlig farve, og det er nyttigt til kvalitative studier.
Kromatogrammet kan også opnås ved hjælp af en detektor, der registrerer chromatografins respons, output eller endelige signal. Som tidligere nævnt er denne detektor normalt et spektrofotometer, et massespektrometer, automatiske sequencere, elektrokemikalier, blandt andre..
Kromatogrammer genereret i kolonner, hvad enten det er af gasser eller væsker, såvel som dem med høj opløsning i tynde lag, bruger detektorer.
Afhængigt af detektortypen kan kromatogrammet klassificeres i differentiel eller integreret, afhængigt af detektorens responsform..
En differentiel detektor måler kontinuerligt svarsignalet fra kromatogrammet, mens integrerede detektorer kumulativt måler det tilsvarende signal.
Et differentielt kromatogram er et kromatogram opnået af en differentiel detektor. Disse detektorer indbefatter for eksempel spektrofotometre og detektorer for ændringer i elektrisk ledningsevne..
Denne type kromatogram har vist resultatet af adskillelsen af anioner fra en prøve, detekteret ved indirekte fotometri. De samme resultater er også opnået til undersøgelse af ioner, for eksempel med endelig påvisning ved konduktimetri..
Den øverste graf viser eksemplet på et differentielt kromatogram, opnået ved hjælp af automatiske DNA (deoxyribonukleinsyre) sekventeringsmidler. Grafen viser tydeligt toppe i fire farver, en farve for hver af de nitrogenholdige baser i DNA..
Ved hjælp af et edb-program letter fortolkningen af sekvensen af baserne i det analyserede DNA såvel som for mere komplekse analyser.
Det integrerede kromatogram svarer til det, der opnås ved en integreret detektor. Dette kromatogram viser output fra en enkelt komponent, der undersøges. Flere toppe opnås ikke som i differentialen.
I det integrerede kromatogram opnås en registrering med en form beskrevet som et trin. Denne form er den del af kromatogrammet, der svarer til mængden af et enkelt stof, der forlader søjlen..
Endnu ingen kommentarer