Maj Grünwald-Giemsa begrundelse, teknik og anvendelser

849
Simon Doyle
Maj Grünwald-Giemsa begrundelse, teknik og anvendelser

Det Må Grünwald-Giemsa plette o Pappenheim er en differentiel farvningsteknik, der blander Giemsa og May Grünwald reagenser. Det bruges til differentiering af normale og unormale blodlegemer i perifert blod og knoglemarvsudstrygninger samt til farvning af histologiske sektioner og cytologiske prøver..

Begge reagenser -Giemsa og May Grünwald- stammer fra farvning af Romanowsky-typen, en teknik der er baseret på kombinationen af ​​sure og basiske farvestoffer..

Udstrygning, der viser en segmenteret neutrofil og en millocyt i et tilfælde af kronisk myeloid leukæmi, farvet med May Grünwald Giemsa-pletten. Dr Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) gennem Wikipedia.org.

Giemsa forbedrede teknikken ved at stabilisere blandingen af ​​eosin, methylenblåt og deres derivater med glycerol. I stedet bruger May Grünwald eosin og methylenblåt med methanol som opløsningsmiddel. Denne strategiske kombination har givet fremragende resultater.

Selvom det med hensyn til observation af cellemorfologi virker på samme måde som Giemsa og Wright-pletterne, forbedrer denne teknik de tidligere ved at raffinere farvningen af ​​parasitterne, der forårsager malaria, Chagas sygdom, leishmaniasis og trichomoniasis..

Derudover har det vist sig at være en meget nyttig teknik til den cytologiske undersøgelse af sædvæske. Det har ikke kun markeret sig ved at vise sædcellernes morfologiske egenskaber, men også ved at tillade differentiering af leukocytter, epitelceller og sædceller med stor effektivitet..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Forskellige farvestoffer
  • 2 Teknik
    • 2.1 Materialer
    • 2.2 Koncentreret maj Grünwald farvestofopløsning
    • 2.3 Koncentreret Giemsa-plet
    • 2.4 Fremstilling af bufferopløsning ved pH 7,2
    • 2.5 Blod- eller knoglemarvsfarvningsprocedure
    • 2.6 Teknik til farvning af udstrygninger af sædvæske
    • 2.7 Vigtige specifikationer
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Vaginal cytologi
    • 3.2 Spermeprøve
  • 4 Referencer

Basis

Teknikken følger fundamentet for Romanowsky-pletter, hvor sure farvestoffer har selektiv affinitet for basiske cellulære komponenter, og sure komponenter tiltrækker basale pletter..

Forklaret på en anden måde har både cellestrukturer og farvestoffer positive eller negative elektriske ladninger; som afgifter afviser og forskellige afgifter tiltrækker.

For eksempel er grundlæggende farvestoffer som methylenblåt positivt ladede og tiltrukket af negativt ladede strukturer. Derfor pletter dette farvestof kerner, der er rige på DNA og RNA, der har negativt ladede fosfatgrupper..

Granulaterne af segmenterede basofiler og cytoplasmaerne i mononukleære hvide blodlegemer indeholdende RNA farves også..

Syrefarvestoffet bærer ligeledes en negativ ladning, hvorfor det binder til positivt ladede strukturer såsom erytrocytter og granulater af segmenterede eosinofiler. Hvad angår granulaterne af de segmenterede neutrofiler, fikserer disse begge farvestoffer.

Forskellige farvestoffer

I denne teknik eksisterer en kombination af reaktioner sammen mellem ortokromatisk og metakromatisk farvestof. Ortokromatika (eosin og methylenblåt) binder til den cellestruktur, som de er relateret til, og giver en stabil farve, der ikke varierer.

På den anden side varierer metakromatika (derivaterne af methylenblå azurblå A og azurblå B) deres oprindelige farve, når de først er knyttet til den specifikke struktur, og der kan endda være en række nuancer.

Endelig kræver det trin, som May Grünwald-løsningen tager, tilstedeværelse af vand, da farvestoffet uden dette vil trænge igennem strukturer, men ikke sætte sig. For at dette kan ske, skal farvestoffet blive polært eller ionisere og således være i stand til at udfælde og binde til beslægtede strukturer..

Teknik

Materialer

- Mikroskopglas.

- Broer til farvning.

- Maj-Grünwald-løsning.

- Giemsa plet.

- Destilleret vand.

Kan Grünwald farve koncentreret opløsning

0,25 g eosin-methylenblåt (plet ifølge May Grünwald) skal afvejes og opløses i 100 ml methanol. Derefter blandes præparatet i 1 time og lades hvile i 24 timer. Når tiden er gået, lækker den.

For at anvende teknikken skal May Grünwald-farvestoffet fortyndes som følger: For 200 ml fortyndet farvestof måles 30 ml af den koncentrerede opløsning, der tilsættes 20 ml bufferopløsning og 150 ml destilleret vand justeret til pH7,2-7,3. Senere blandes det og filtreres.

Giemsa-pletkoncentrat

0,5 g azurblå-eosin-methylenblåt (plet ifølge Giemsa) skal vejes, opløses i 50 ml methanol og 50 ml glycerin tilsættes til blandingen.

For at udføre teknikken fortyndes den 1:10 med bufferopløsning og får lov til at henstå i 10 minutter. Kan filtreres om nødvendigt.

Fremstilling af bufferopløsningen ved pH 7,2

De skal vejes:

- 40 mg kaliumdihydrogenphosphat (KH2PO4).

- 151 mg di-natriumhydrogenphosphat 12-hydrat (Na2HPO4).

Begge forbindelser opløses i 100 ml vand.

Fremgangsmåde til farvning af blod eller knoglemarv

Der er to tilstande: en klassiker og en hurtig.

Klassisk tilstand

  1. Dæk udstrygningerne i 2 til 3 minutter med den fortyndede May-Grünwald-opløsning..
  2. Vask med bufferet destilleret vand for at fjerne den tidligere opløsning.
  3. Dæk med den samme bufrede vaskeopløsning, og lad den stå i 1 minut. Ideen er, at det forrige farvestof er fastgjort til strukturerne, og at cellerne samtidig hydratiseres.
  4. Tilsæt 12 dråber fortyndet Giemsa-tinktur til det bufrede vand og blæs for at blande og homogenisere. Lad stå i 15-20 minutter.
  5. Vask udstrygninger med bufret destilleret vand og anbring det til lufttørring.
  6. Fokuser og observer de farvede blodlegemer under et lysmikroskop ved hjælp af 40X-målet. Om nødvendigt kan 100X bruges.

Hurtig tilstand

  1. Dæk udstrygningen med fortyndet May Grünwald-plet i 1 minut..
  2. Vask med bufferet destilleret vand.
  3. Dæk med bufret vand og lad det stå i 1 minut.
  4. Anbring den fortyndede Giemsa-plet og lad den stå i 5 minutter.
  5. Vask med bufferet destilleret vand og lad det lufttørre.

De her beskrevne teknikker er en retningslinje, men det skal tages i betragtning, at procedurerne og farvetiderne varierer alt efter det kommercielle firma, der distribuerer reagenserne. Det tilrådes at følge de trin, der er strengt angivet af hvert kommercielt hus.

Teknik til farvning af udstrygninger af sædvæske

1- Dæk udstrygningen med et tyndt lag af May Grünwald-opløsningen i 4 minutter.

2- Fjern farvestoffet og vask med destilleret vand.

3- Anbring et lag fortyndet Giemsa (1:10) i destilleret vand i 15 minutter.

4- Fjern farvestoffet og vask med destilleret vand.

5- Lad tørre og observer i mikroskopet.

Forventede farver med May Grünwald Giemsa-pletten

Vigtige specifikationer

Teknikken kræver, at reagenserne og vaskeopløsningerne har en pH-værdi justeret til 7,2 -7,3, så farvestoffernes affiniteter for cellestrukturer ikke forvrænges, og den forventede endelige farve ikke varierer..

Ansøgninger

Denne teknik bruges af kliniske laboratorier til at plette perifert blod og knoglemarvsudstrygninger, vævsafsnit og cytologier..

Inden for det hæmatologiske felt er denne teknik af vital betydning i undersøgelsen af ​​abnormiteter i celler med hensyn til form, størrelse og antal. Det er et meget værdifuldt værktøj til diagnose af visse sygdomme, såsom leukæmier og anæmi.

Derudover er det af enestående nytte, når man leder efter parasitter i hæmatologiske områder (Plasmodium sp Y Trypanosome cruzi) eller histologisk (Leishmanias sp).

Vaginal cytologi

Med hensyn til vaginal cytologi er denne teknik især fordelagtig til observation af Trichomonas vaginalis. Dette er et vigtigt fund, da dets tilstedeværelse simulerer billeder af karcinom. in situ som derefter forsvinder, når parasitten fjernes.

Spermeprøve

Det har været et ideelt værktøj til undersøgelse af sædprøver, da det giver værdifuld information om sædkvaliteten.

De data, den tilbyder, har hovedsageligt at gøre med antal og morfologi såvel som de samtidig celler, der kan være til stede, og som er af vital betydning, såsom kimceller, leukocytter og epitelceller..

Med denne analyse er det muligt at beskrive abnormiteter observeret i sædcellerne i hoved, nakke, midtstykke og hoveddel..

Derudover kan de også hjælpe med at vise tilfælde af hæmospermi (tilstedeværelse af røde blodlegemer i sæd) og leukospermi eller piospermi (øget antal leukocytter i sæd).

Referencer

  1. Costamagna S, Prado M. Validering af den friske test, May Grünwald-Giemsa og Gram pletter og dyrkningsmedier til diagnose af Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Fås i: scielo.
  2. Merck KGaA-laboratorium. Maj Grünwald eosin methylenblåt til mikroskopi.
  3. "May-Grünwald-Giemsa plet." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 15. nov 2018, 14:37 UTC. 8. jan 2019, 04:29: en.wikipedia.org
  4. Glass Chemicals Panreac Laboratory. Reagenser til histologiske teknikker, hæmatologi og mikrobiologi. Tilgængelig på: glasschemicals.com
  5. Retamales E, Manzo V. Anbefaling til farvning af blodudstrygninger til aflæsning af hæmogrammet. Nationalt og reference biomedicinsk laboratorium. Institut for Folkesundhed i Chile.
  6. Sarabia L. Spermiogram i henhold til WHO-kriterier. Udviklingsanatomi og biologi-program. School of Medicine. University of Chile. Tilgængelig på: pp.centramerica.com

Endnu ingen kommentarer