Det BIGGY agar Det er et solidt, selektivt og differentieret kulturmedium. Det var designet til at isolere og hjælpe med at identificere de vigtigste Candida-arter. Navnet BIGGY kommer fra akronymet på engelsk Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Den originale formel blev skabt af Nickerson, hvorfor dette medium også er kendt som Nickerson agar. I øjeblikket er det sammensat af gærekstrakt, glycin, dextrose, ammoniumcitrat, bismuthcitrat, natriumsulfit og agar..
BIGGY agar er formuleret til differentiering af artskompleks C. albicans, C. tropicalis, C. krusei og C. kefyr, men andre arter vokser også som Candida glabrata, C. parapsilosis, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum og Saccharomyces cerevisiae.
Det har god følsomhed og specificitet, men når det sammenlignes med andre medier med lignende funktion, er det på andenpladsen og bliver overgået af CHROMagar. Af denne grund foretrækker mange laboratorier sidstnævnte, skønt det er meget dyrere..
Det skal være klart, at brugen af BIGGY Agar såvel som andre lignende midler hjælper med en hurtig formodet identifikation, men aldrig bekræftende. Derfor skal yderligere identifikationsmetoder være tilgængelige; f.eks. Vitek 32 og API 20 identifikationssystemer.
Artikelindeks
BiGGY agar betragtes som et delvist selektivt medium til isolering af gær, især af slægten Candida, selvom andre slægter kan vokse.
Det er også et differentieret medium, fordi forskellige karakteristika vil blive observeret med hensyn til udseende, farve, form og størrelse afhængigt af den involverede art. Det betragtes som et kromogent medium på grund af udviklingen af forskellige farver i kolonierne.
Farven på gærkolonierne skyldes tilstedeværelsen af bismuthsulfit i agaren. Nickerson indså, at gær af slægten Candida udfører en ekstracellulær reduktion af bismuthsulfit og omdanner den til bismuthsulfid (et uopløseligt sort stof). Dette resulterer i lysebrune til sorte kolonier..
Denne agar indeholder gærekstrakt og dextrose, som giver kilden til basale næringsstoffer og energi til gærudvikling. Glycin er et gærvækststimulerende middel, mens det hæmmer væksten af visse bakterier.
I samme forstand fungerer ammonium og bismuthcitrat såvel som natriumsulfit som hæmmere af bakterievækst. Agar er det middel, der giver medium fast konsistens.
Vej 45 g af det dehydrerede dyrkningsmedium og opløs det i en liter destilleret vand. Ryst og opvarm blandingen, kog i 1 minut, indtil den er helt opløst. Dette dyrkningsmedium kan ikke autoklaveres.
Ved afkøling til ca. 45 ° C i et vandbad, hældes 20 ml på sterile petriskåle..
Farven på det dehydrerede medium er gulgrå og fremstillet er en gullig hvid gel, hvori der kan observeres et let flokkulerende bundfald.
PH-værdien skal være 6,8 ± 0,2.
Det tilberedte medium skal opbevares i køleskab (4 ° C) og beskyttes mod lys. Da det er et medium, der ikke kan autoklaveres, skal det bruges så hurtigt som muligt. Dets anvendelse anbefales inden for 3 dage efter klargøring.
Pladerne inkuberes ved stuetemperatur (25 ° C) i 24, 48 og 72 timer, og inkubationstiden kan forlænges op til 5 dage..
Hver Candida-art udvikler visse egenskaber, der adskiller hinanden fra hinanden. Producenterne af mediet beskriver følgende egenskaber for hver art:
-Candida albicans-kompleks: udvikler sig på denne agar som glatte, runde, brune eller sorte kolonier med en let mycelial kant. Med undtagelse af at den mørke farve ikke diffunderer med mediet.
-Candida tropicalis: kolonierne er lyse, små, mørkebrune med et sort center og en let mycelial kant. Den mørke farve diffunderer mod midten, et kendetegn, der er typisk for denne art, efter at have været inkuberet i 72 timer..
-Candida krusei udvikler store, flade, ru udseende kolonier med en brun til sortlig kant.
-Candida parakrusei: mellemstore kolonier, for det meste ru, flade. Farven kan variere fra lys mørk rødbrun til lys rødbrun. Grænsen til kolonierne har omfattende, gulligt mycelium.
-Candida stellatoidea: Udvikler mellemstore, flade, mørkebrune, næsten sorte kolonier. Mycelieudvikling er meget knap.
En undersøgelse udført af Yücesoy og Marol i 2003 viste, at CHROMagar-medium har bedre følsomhed og specificitet til differentiering og identifikation af forskellige Candida-arter end BIGGY-agar..
Til sterilitetskontrol inkuberes ikke-inokulerede plader ved 25 ° C i mørke i 24 til 48 timer. Det forventes, at der ikke er nogen vækst af nogen art eller farveændring..
De ATCC-stammer, der anbefales til kvalitetskontrol af mediet, er:
Candida albicans-kompleks ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. I dem alle forventes vækst som beskrevet ovenfor..
Følgende stammer kan også bruges:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 og Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. I de to første forventes total hæmning, men i tilfælde af delvist voksende kolonier vil de være cremefarvede.
I tilfælde af S. aureus det forventes at være fuldstændig hæmmet, men hvis de vokser delvist, er deres kolonier hvide.
Nogle bakterier er i stand til at udvikle sig i dette medium og kan endda blive mørke i farven ved at simulere en Candida-koloni, men når man laver en udstrygning af kolonien og observerer den under et mikroskop, kasseres den let.
Tabel: Karakteristika for kolonier af nogle gær på BIGGY agar i henhold til arbejdet i Yücesoy M og Marol S.
Endnu ingen kommentarer