Cetrimid agar begrundelse, forberedelse, anvendelser

757
Sherman Hoover

Det cetrimid agar o cetrimid er et selektivt fast kulturmedium designet til isolering af Pseudomonas aeruginosa. Det er baseret på at fremhæve produktionen af ​​karakteristiske pigmenter af denne art og blev lavet af modifikationen af ​​Tech agar, skabt af King, Ward og Raney..

Den originale formel indeholdt salte af magnesiumchlorid, kaliumsulfat, fordøjelse af gelatine i bugspytkirtlen og agar-agar. Modifikationen af ​​formlen bestod af tilsætningen af ​​cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) og glycerol.

Cetrimid-agar podet med Pseudomonas aeruginosa Kilde: BiotechMichael [Public domain], fra Wikimedia Commons

Cetrimid agar er nyttig til mikrobiologisk undersøgelse af prøver, hvor tilstedeværelsen af Pseudomonas aeruginosa. Det skal bemærkes, at denne bakterie er af største betydning, for selvom den er en del af den normale miljømikrobiota, opfører den sig ofte som et opportunistisk patogen.

Derfor er et af de mest almindelige problemer forårsaget af denne kim nosokomiale infektioner, det vil sige dem, der forekommer inden for hospitalets miljø, og angriber patienter, der har et deprimeret immunsystem.

På den anden side, på grund af affiniteten, som denne mikroorganisme har med fugtighed, er de mest sårbare forureningsmål: assisteret åndedrætsudstyr, medicin, forstøver, vandkilder, klimaanlæg, desinfektionsmidler, sæbevæsker, injicerbare opløsninger, åbne sår, katetre, urinrør, blandt andre.

I denne forstand er cetrimidagar nyttig til at udføre mikrobiologiske kontroller og kulturer til de tidligere nævnte elementer..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Fortolkning
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
  • 4 Sået
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Kvalitetskontrol
  • 7 Referencer

Basis

Cetrimid-agar er baseret på mediets evne til at fremme væksten af P. aeruginosa, stimulere produktionen af ​​dets pigmenter og igen hæmme væksten af ​​andre mikroorganismer.

Disse egenskaber skyldes funktionen af ​​hver af dens komponenter. Den nuværende gelatinepepton tjener som en kilde til nitrogen, vitaminer og mineraler. Glycerol eller glycerin fungerer som en kulstofkilde.

For sin del er cetrimid (cetyltrimethylammoniumbromid) det stof, der hæmmer væksten af ​​andre bakterier end P. aeruginosa, herunder andre arter, der tilhører den samme slægt.

Hæmningen opstår, fordi cetramid fungerer som et kationisk vaskemiddel, der formår at destabilisere plasmamembranen hos de fleste bakterier, bortset fra P. aeruginosa og nogle andre, der formår at overleve.

På den anden side indeholder den magnesiumchlorid og kaliumsulfat. Disse forbindelser stimulerer fænotypisk ekspression relateret til evnen til at Pseudomonas aeruginosa til fremstilling af forskellige pigmenter, herunder: pyocyanin, pyoverdin, pyorrubin, pyomelanin og fluorescein. Endelig indeholder den agar-agar, hvilket giver den en solid konsistens.

Fortolkning

Fortolkningen af ​​væksten opnået i denne agar udføres som følger:

Observation af runde, glatte kolonier med regelmæssige kanter med produktion af blågrønne, grønne, brune eller rødlige pigmenter plus emission af frugtagtig lugt (aminoacetophenon) er et formodent resultat af tilstedeværelsen af ​​denne bakterie i prøven..

Desuden er det vejledende for P. aeruginosa iagttagelsen af ​​et lyst grøngult pigment på kolonierne, når pladen udsættes for ultraviolet lys.

Fluorescens af P. aeruginosa-kolonier på cetrimidagar under ultraviolet lys.

Det skal bemærkes, at hver observeret farve skyldes produktionen af ​​et specifikt pigment. Det blågrønne pigment svarer til produktionen af ​​pyocyanin, det grønne til pyoverdin, det rødlige til pyorrubin, det brune til pyomelanin og den lysegultgrønne fluorescens under UV-lys til fluorescein..

Forberedelse

Vej 43 g af det dehydratiserede medium op og opløses i destilleret vand. Tilsæt 10 ml glycerol. Bring blandingen til en varmekilde. Kog i et par minutter indtil fuldstændig opløsning.

Autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter. Lad stå og server i sterile petriskåle, når temperaturen er omkring 50 ° C.

Lad størkne, vende om, bestille i plaqueros og opbevares i køleskab indtil brug. For at frø cetrimid-agarpladerne skal de fjernes fra køleskabet på forhånd og få lov til at varme op til stuetemperatur..

Mediets endelige pH skal være 7,2 ± 0,2.

Farven på det dehydratiserede medium er beige, og præparatet er uigennemsigtigt hvidt.

Ansøgninger

På cetrimidagar kan alle typer prøver plantes, hvor tilstedeværelsen af Pseudomonas aeruginosa. Derfor er det nyttigt inden for alle områder af mikrobiologi (miljømæssigt, industrielt, klinisk, vand og mad)..

Det er meget vigtigt at analysere hospitalsmiljøer og således kunne anvende korrigerende foranstaltninger, da denne mikroorganisme når patienter gennem kontamineret udstyr, medicin, løsninger og forsyninger, der bruges af patienten.

På denne måde kan mikroorganismen inficere de nedre luftveje, urinveje og sår hos immunsupprimerede patienter..

Koloni tæller af P. aeruginosa i mikrobielle grænsetest.

Sået

Cetrimid-agar kan anvendes som en primær kultur. Pladen podes på en af ​​dens kanter, og derfra fordeles den ved udmattelse til resten af ​​pladen. Flydende prøver kan overfladefrøes med en drigalski-spatel.

Pladerne inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timers inkubation.

Begrænsninger

-En lille procentdel af stammer af  Pseudomonas aeruginosas producerer ikke pyocyanin, så en falsk negativ kan fortolkes.

-Nogle klinisk vigtige Pseudomonas-arter hæmmes i dette miljø.

-På trods af at de egenskaber, der er beskrevet for Pseudomonas aeruginosa, de skal bekræftes med yderligere bevis for identifikation. En test, der ikke bør gå glip af, er oxidasetesten, den skal give positiv.

-Nogle Enterobacteriaceae kan vokse på dette medium og udvikle et gult pigment, men det adskiller sig fra Pseudomonas aeruginosa i at når pladen udsættes for ultraviolet lys, er der ingen fluorescens.

-Serratia marcescens formår at udvikle og producerer et lyserødt pigment.

-Hvis pladerne, der er podet med cetrimidagar, udsættes for stuetemperatur i et stykke tid, stammer stammen af P. aeruginosa de kan miste fluorescensen observeret under UV-lys, men ejendommen genvindes, hvis den geninkuberes ved 37 ° C.

QA

For at analysere den gode ydeevne af cetrimidagar kan der anvendes kontrolstammer, såsom: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 og Staphylococcus aureus ATCC 25923.

De forventede resultater er:

  • For at P. aeruginosa god vækst med blågrønt pigment og positivt fluorescein.
  • S. maltophilia Y S. aureus vil blive delvist til fuldstændigt hæmmet.
  • Det forventes, at Escherichia coli være fuldstændig hæmmet.

Referencer

  1. Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Fænotypisk og serologisk karakterisering af kliniske isolater af Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
  2. Conda Pronadisa Laboratories. Cetrimid agarbase. 2014. Tilgængelig på: condalab.com
  3. Britannia Laboratories. Cetrimid agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  4. BD Laboratories. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Tilgængelig på: bd.com
  5. Laboratorio Francisco Soria Melguizo, C.A. Cetrimid agar. 2009. Tilgængelig på: http://f-soria.es

Endnu ingen kommentarer