Czapek agar fundament, forberedelse, anvendelser og begrænsninger

1621
Sherman Hoover

Det Czapek agar (CZA) er et selektivt fast kulturmedium specielt designet til dyrkning af saprofytiske bakterier og svampe. Det blev skabt af botanikeren Friedrich Johann Franz Czapek, af polsk oprindelse, og den amerikanske kemiker Arthur Wayland Dox; Af denne grund er denne agar også kendt som Czapek-Dox-medium..

Det originale medium var flydende, men agar blev senere tilsat for at gøre det til et fast medium. Czapek-medium består af natriumnitrat, bifaliumphosphat, magnesiumsulfat, kaliumchlorid, jernholdigt sulfat, saccharose, agar og destilleret vand..

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Kilde: A. Medmyco [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0))/ B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

Czapek-agars pH er 7,3, men der er en variant, hvortil der tilsættes 10% mælkesyre, hvis pH forbliver på 3,5. Dette syremedium bruges til dyrkning af acidofile mikroorganismer.

På den anden side modificerede nogle kommercielle huse sammensætningen af ​​Czapek-agar ved at ændre magnesiumsulfat og bipaliumphosphat med glycerophosphat; denne modifikation forhindrer dannelsen af ​​magnesiumphosphatpræcipitatet observeret med den konventionelle formel. Ligeledes er der en anden variant, hvortil gærekstrakt tilsættes.

Endelig anbefales Czapek agar af American Public Health Association APHA til undersøgelse af Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp Y Penicillium sp. Disse arter er karakteriseret ved at være miljømæssige mikroorganismer og opportunistiske patogener..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Medium Czapek-Dox
    • 2.2 Czapek-medium ved sur pH
    • 2.3 Modificeret Czapek Medium
    • 2.4 Czapek-gærmedium
  • 3 Brug
    • 3.1 Såning
    • 3.2 Temperatur og inkubationstid
    • 3.3 Karakteristika for nogle kolonier på dette medium
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Dette medium indeholder saccharose; Dette kulhydrat fungerer som en kilde til kulstof, mens natriumnitrat er kvælstofkilden, men i modsætning til andre medier er det tilførte kvælstof uorganisk..

Af denne grund betragtes Czapek-mediet som selektivt, fordi kun mikroorganismer, der er i stand til at bruge uorganiske forbindelser som den eneste nitrogenkilde, kan vokse..

Som en regulator af mediumets osmolaritet er bipaliumphosphat. For deres del tilvejebringer magnesiumsulfat, kaliumchlorid og jernholdigt sulfat essentielle mineraler til vækst af saprofytiske (fritlevende) mikroorganismer. Med denne formel dannes et bundfald af magnesiumphosphat.

Endelig er agar-agar den forbindelse, der tilvejebringer den faste konsistens til mediet, og vand er opløsningsmidlet til alle komponenterne..

Med den modificerede Czapek-agarformel er der ingen dannelse af bundfald, og det forbedrer vækstpræstationen for nogle svampe.

Den ekstreme surhed af syre Czapek Agar gør det til et mere selektivt medium, der kun tillader vækst af acidofile mikroorganismer, der er i stand til at anvende uorganisk nitrogen. Mens Czapek-gæragar forbedrer ydeevnen for visse svampe.

Forberedelse

Medium Czapek-Dox

Vej 49 g af det dehydrerede dyrkningsmedium op og opløses i destilleret vand. Påfør varme indtil kogning. Ryst blandingen ofte, indtil den er helt opløst..

-Czapek Agar kiler

Fordel den opløste blanding i rør og autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter. Når du fjerner den fra autoklaven, homogeniseres inden du lægger rørene, og lad den størkne.

-Czapek agarplader

Autoklaver den opløste blanding ved 121 ° C i 15 minutter og lad den afkøle til 50 ° C, homogeniseres og hældes 20 ml i sterile petriskåle. Lad størkne, vende om og opbevare i køleskab indtil brug.

PH skal være 7,3 ± 0,2. Farven på det dehydratiserede medium er hvid, og det fremstillede medium er lysegult, let overskyet på grund af tilstedeværelsen af ​​et flokkulerende bundfald..

Czapek-medium ved sur pH

Forbered som allerede beskrevet, men tilsæt 10 ml steril 10% mælkesyre for hver liter fremstillet medium. Det modificerede Czapek-medium skal forblive ved pH 3,5 ± 0,2.

Modificeret Czapek Medium

Vej 45,4 g af det dehydratiserede medium op og opløses i 1 liter vand. Resten af ​​præparatet er det samme som beskrevet ovenfor. Farven på det dehydratiserede medium er hvid, og det fremstillede medium er hvidligt. Mediets endelige pH er 6,8 ± 0,2.

Czapek-gærmedium

Også kaldet Czapek gærekstraktagar (CYA). Indeholder elementerne i klassisk Czapek agar plus gærekstrakt.

Brug

Czapek-mediet bruges til at søge efter saprofytiske mikroorganismer i prøver af blandt andet jord, grøntsager, korn, luft, insekter..

Czapek-agar ved sur pH anvendes til vækst af acidofile mikroorganismer, medens modificeret Czapek-agar er særlig nyttig til dannelse af chlamydosporer i arter af komplekset. Candida albicans.

Endelig er Czapek-gæragar meget nyttig til isolering af Aspergillus og Penicillium..

Sået

-Czapek agar

For at søge efter Actinomycetes i jorden skal du gøre som følger: prøven behandles med phenoliseret vand i 30 minutter, og derefter sås 1 ml af suspensionen på Czapek agar. Inkuber ved 28 ° C i 5 til 7 dage.

Til grøntsags-, korn- og insektprøver placeres de direkte på agaren. Du kan også lave fortyndinger og så 0,1 ml på agarens overflade..

-Modificeret Czapek agar

Til såning anvendes en lige sløjfe eller nål, den imprægneres med vatpinden, og agaren inokuleres ved at lave en punktering, indtil den berører bunden af ​​pladen. Inkuber i 24 timer ved 28 ° C og undersøge under et mikroskop over og under pladen for at se, om der er dannet klamydosporer..

Inkubationstemperatur og -tid

Inkubationstemperaturen og tiden varierer afhængigt af typen af ​​mikroorganisme, der skal isoleres. Plader inkuberes generelt i en til to uger i et temperaturinterval på 20 til 25 ° C..

Der er dog specifikke betingelser for nogle stammer. For eksempel har de fleste arter af slægten Aspergillus optimal vækst ved 30 ° C; Imidlertid A. fumigatus vokser ved 50 ° C.

Med hensyn til inkubationstiden er en eller to uger dog normal Candida albicans kan udvikle sig i 24 til 48 timer ved 25 ° C.

Karakteristika for nogle kolonier på dette medium

-Penicillium atrovenetum

Det udvikler sig i 12 dages inkubation ved 27 ° C. Deres kolonier er små (25 mm).

Kolonierne har et fløjlsagtigt udseende med en defineret hvid kant og i midten har den en blågrøn nuance, der bliver grå, når den bliver ældre. Bagsiden af ​​kolonien er orange og placerer midten af ​​den samme farve på grund af produktionen af ​​pigment.

-Aspergillus niger

Udvikler med hvide til gule mycelium og sorte sporer.

-Candida albicans

Cremede lette beige kolonier udvikler sig. I modificeret Czapek danner agar chlamydosporer.

-Aspergillus parasiticus

Et mørkegrønt mycelium udvikler sig på 7 dage ved 25 ° C.

QA

For at evaluere dyrkningsmediets kvalitet kan der sås certificerede kontrolstammer, såsom: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger udvikler hvide til gule mycelium og sorte sporer på cirka 5 dage, mens Candida albicans den vil have en tilfredsstillende vækst i 24 timers inkubation ved 25 ° C; kolonierne er cremefarvet.

Begrænsninger

Nogle undersøgelser har afsløret, at for genopretning af Actinomycetes er agar med det bedste udbytte kartoffel-dextrose-agar, med Czapek-agar som nummer to, men til genopretning af Aspergillus og Penicillium er Czapek-agar den, der giver den højeste restitutionsrate..

Referencer

  1. Dávila M, et al. Actinomycetes antagonistisk mod fytopatogene svampe af landbrugsbetydning. Præsten Mex. videnskab. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Tilgængelig på: scielo.org.
  2. Luna M, Lozada Y, Trigos Á. Isolering af stammer af Aspergillus niger, producenter af ochratoxin A i opbevaret grøn kaffe (Coffea arabica). Præsten Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Tilgængelig på.scielo.org.
  3. Wikipedia-bidragydere. Czapek medium. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 13. januar 2019, 20:30 UTC. Tilgængelig på: en.wikipedia.org
  4. Conda Pronadisa Laboratories. Modificeret Czapek-Dox Agar. Tilgængelig på: condalab.com
  5. Culture Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible i: Medioscultivo.com

Endnu ingen kommentarer