Bengal rose Det er en laboratorietest baseret på en antigen-antistof-reaktion til diagnose af brucellose. Teknikken muliggør påvisning af specifikke antistoffer mod bakterierne Brucella abortus i humane serumprøver. Resultatet kan rapporteres kvalitativt eller halvkvantitativt.
Den kvalitative form udtrykker, om patienten er positiv eller negativ til testen, dvs. om der er antistoffer eller ej. I mellemtiden rapporteres den semikvantitative rapport i IE / ml og angiver den omtrentlige mængde antistoffer, der er til stede. Det skal bemærkes, at antistoffer kun vil blive produceret, hvis patienten har været i kontakt med mikroorganismen.
På grund af sin store enkelhed, høje følsomhed og specificitet er det en af de seroagglutinationsteknikker, der mest bruges i medicin som en indledende test til diagnose af denne sygdom..
Nogle forskere har sammenlignet effekten af Rose Bengal-testen med andre teknikker, såsom seroagglutination (febrile antigener) og har observeret, at selvom der er god sammenhæng, så de isolerede tilfælde, hvor feberantigen-testen var negativ, og Rose de Positive flare.
Den opnåede forskel skyldtes det faktum, at disse patienter havde en underklasse af IgG-antistoffer mod Brucella abortus med bedre bindingskapacitet ved sur pH, derfor kunne de reagere med Rose Bengal reagens, men ikke med feber antigener.
I denne forstand har de foreslået, at reagenserne i den feberantigenteknik modificeres til en sur pH, så de kan detektere denne type tilfælde..
Artikelindeks
Rose Bengal Reagent består af en antigen suspension. Den består af S99-stammen af Brucella abortus, fortyndet i en sur lactatbuffer (pH 3,6) plus phenol og Rose Bengal-farvestoffet.
Derfor er der i prøven anti-Brucella-antistoffer, hvis disse er til stede, vil de reagere med reagensantigenet og en makroskopisk synlig agglutinationsreaktion vil blive observeret. Testen detekterer enten IgM-antistoffer eller IgG-antistoffer.
Dette betyder, at det kan detektere sygdommen både i dets akutte stadium, hvor IgM-antistoffer hersker, eller i dets kroniske stadium, hvor IgG-antistoffer dominerer..
Dette repræsenterer en fordel, da det øger testens følsomhed, men det er samtidig en ulempe, da det ikke skelner mellem et trin og et andet, fordi reaktionen med IgM og IgG-antistoffer er identisk.
Testen skal altid udføres sammen med en negativ kontrol og en positiv kontrol. Den negative kontrol indeholder animalsk serum uden antistoffer, og den positive kontrol indeholder serum af animalsk oprindelse med 50 IE / ml anti-Brucella-antistoffer..
Brucellose er en alvorlig sygdom, der har tendens til at være kronisk og farlig, så det er meget vigtigt, at den diagnosticeres tidligt. Det er en zoonose, og mennesker kan inficeres ved direkte kontakt med forurenet materiale, hvor de mest sårbare mennesker er dyrlæger og dyreholdere.
Infektion kan også forekomme ved at indtage inficeret rå kød, blandt andre former for smitte.
Denne sygdom angriber lokalt eller systemisk. Den systemiske form er den mest alvorlige, da forskellige organer kan påvirkes, herunder endikelsystemet i retikulum (lever, milt, knoglemarv), hud (cellulitis og lymfadenopati), åndedrætsorganer (lungebetændelse), muskuloskeletale system (arthritis, sacroiliitis og spondylitis ), blandt andre.
Rose Bengal-testen er en meget nyttig teknik til at udføre en indledende screening, fordi den er meget billig, nem at bruge og med stor specificitet og følsomhed..
Tilfælde af falske negativer og falske positive er meget sjældne og kan forekomme hos mennesker med meget lave antistoftitre (< 25 UI/ml) o extremadamente altos (>1000 IE / ml).
-Rose Bengal Kit
-Agglutination plade hvid baggrund
-50 µl pipette
-Rotator (valgfri)
-Vortex
Kommercielle Rose Bengal Kits leveres med klar-til-brug reagenser.
-Temperere reagenser inden arbejdet påbegyndes.
-Agglutinationspladerne har cirkler tegnet, hver til en anden prøve. Brug 3 cirkler, den første til den negative kontrol, den anden til prøven og den tredje til den positive kontrol.
-Anbring en dråbe eller 50 µl af kontrollerne og prøven i deres tilsvarende cirkel.
-Bland Rose Bengal Reagent ved hjælp af en vortex. Placer en dråbe ved siden af de tidligere placerede.
-Bland med tandstikkere af træ (brug et til hver prøve eller kontrol). Foretag cirkulære bevægelser og spred på en sådan måde, at den dækker hele cirklen.
-Placer pladen på en automatisk rotator ved 80 til 100 omdr./min., Eller drej den manuelt i 4 minutter. Læs beviset i slutningen af denne tid.
-Kontroller, at kontrollerne gav som forventet. Sammenlign reaktionen fra testprøven med kontrollerne. Rapporter som positiv, hvis der observeres agglutination, og som negativ, hvis der ikke er agglutination.
En positiv test indikerer, at patienten har en mængde, der er lig med eller større end 25 IE / ml anti-Brucella-antistoffer.
Hvis prøven i den kvalitative reaktion er stærkt positiv, kan den semi-kvantificeres. Til dette foretages serielle dobbeltfortyndinger af prøven med fysiologisk saltopløsning. Fremgangsmåden beskrevet ovenfor udføres med hver fortynding..
Det fortolkes også ved at observere agglutinationen makroskopisk. Resultatet vil være titeren på den højeste fortynding, hvor et positivt resultat blev observeret.
For at beregne den omtrentlige værdi af anti-Brucella-antistoffer anvendes følgende formel:
25 IE / ml x reaktionstiter = IU / ml
Eksempel, hvis en patient i den semikvantitative test tester positivt ved fortyndingen ½, ¼ og 1/8 og begynder at være negativ fra 1/16 fortyndingen og fremefter, betyder det, at patienten har en titer på 8.
Anvendelse af formlen:
25 IE / ml x 8 = 200 IE / ml
-Sættene har en udløbsdato, og den skal respekteres. Bør ikke bruges, hvis reagenset er udløbet.
-Sørg for, at reagenset ikke indeholder faste partikler under brug, da dette er et tegn på forringelse..
-Opbevares mellem 2 og 8 ° C.
-Frys ikke, denne handling beskadiger reagenset uopretteligt.
-Kør altid testen sammen med de negative og positive kontroller.
-Teknikken tåler serumprøver med en vis grad af lipæmi og hæmolyse, men det tilrådes ikke at bruge overdrevet lipæmisk og hæmolyseret sera, begge betingelser ændrer testens resultater..
-Varm altid reagenserne op til stuetemperatur inden analysen påbegyndes..
-Fortol ikke reaktioner, der tager mere end den anbefalede tid, da dette genererer rapporten om falske positive, da reagenset efter en vis tid udfældes, simulerer en positiv reaktion.
-Teknikken er 100% følsom og har en specificitet på 98%.
-Efter en semi-kvantificering på 1000 IE / ml er der mulighed for at observere en prozoneffekt (falsk negativ på grund af overskydende antistof sammenlignet med mængden af antigener).
Endnu ingen kommentarer