Det Trypticasein sojagar eller Trypticase Soy Agar er et fast, ikke-selektivt og nærende dyrkningsmedium. Det er betegnet med bogstaverne TSA for dets akronym på engelsk Trypticase Soy Agar. Den består af triptein, sojapepton, natriumchlorid og agar-agar.
På grund af sin høje ernæringskraft er den ideel til dyrkning af moderat krævende og ikke-krævende mikroorganismer. Mediet uden yderligere kosttilskud anbefales ikke til primære kulturer, men det er meget nyttigt til subdyrkning af rene stammer og holdbarhed blandt andre anvendelser..
Denne agar tjener også som en base til fremstilling af berigede medier, såsom blodagar, især når det er nødvendigt at observere hæmolysemønstrene og montere optoquin- og bacitracin-taxa, der kræves ved diagnosen Streptococcus pneumoniae Y Streptococcus pyogenes henholdsvis.
På den anden side, når det kombineres med antibiotika, er det nyttigt at isolere fakultative og strenge anaerobe mikroorganismer af klinisk betydning fra prøver med blandet flora..
Endelig opfylder sammensætningen af trypticasein-sojagar og dens ydeevne de krav, der er fastlagt af de forskellige farmakopéer (europæiske, japanske og nordamerikanske)..
Artikelindeks
For at udvikle bakterier korrekt er tilstedeværelsen af energiforsyning nødvendig, såsom aminosyrer, vitaminer, puriske og pyrimidiske baser..
I denne forstand giver triptein og sojapepton disse næringsstoffer til mikroorganismer, hvilket muliggør deres fulde udvikling. For krævende bakterier er det imidlertid nødvendigt at supplere denne agar med defibrineret blod eller opvarmet blod for at øge dets berigelse..
På den anden side, hvis antibiotika sættes til mediet, bliver det et selektivt medium. Du kan også tilføje 0,6% af gærekstrakt for at favorisere isoleringen af slægten Listeria, mens tilsætningen af cystintellurit Y lammets blod er ideelt til Corynebacterium diphteriae.
Endelig tilvejebringer natriumchloridet den osmotiske balance til mediet, og agaren tilvejebringer den faste konsistens..
For at fremstille trypticasein-soja-agar skal 40 g af det dehydrerede kommercielle medium afvejes i digital skala. Det opløses i en liter destilleret vand indeholdt i en kolbe.
Blandingen lades hvile i 5 minutter, og derefter føres den til en varmekilde for at hjælpe med at opløse mediet. Det skal omrøres ofte og koges i 1 eller 2 minutter. Derefter steriliseres mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter.
Lad afkøle til 50 ° C og fordel det i sterile petriskåle. Lad størkne, vende om, placere i bund og opbevare i køleskab.
Mediets endelige pH skal være 7,3 ± 0,2.
Det skal bemærkes, at farven på det dehydratiserede dyrkningsmedium er lysebeige og skal opbevares mellem 10 og 35 ° C på et tørt sted..
Den tilberedte agar er på sin side lysegul i farven. Forberedte plader skal opbevares i køleskab (2 til 8 ° C) indtil brug..
Pladerne skal nå stuetemperatur inden brug.
Blodagar fremstilles ved tilsætning af 5% defibrineret blod, når den tryptiske sojagar afkøles til 50 ° C. Blandingen homogeniseres ved at rotere med blide bevægelser.
Serveres i sterile petriskåle. Den midterste farve skal være kirsebærrød.
For at forberede den TSA-baserede blodagar skal du følge det samme som de procedurer, der allerede er beskrevet, men når du forlader autoklaven, skal du lade den hvile, indtil temperaturen på mediet er ca. 56 til 70 ° C. På det tidspunkt placeres blodet og blandes, indtil mediet bliver brunt..
Serveres i sterile petriskåle. Mediumets farve er chokoladebrun.
Agarpræparationsproceduren er den samme som beskrevet for plader, med den forskel, at det i stedet for at servere mediet på petriskåle fordeles mellem 10 og 12 ml i rør med bakelitlåg før sterilisering..
Derefter autoklaveres rørene ved 121 ° C i 15 minutter. Når de forlader, læner de sig ved hjælp af en støtte og lader dem størkne.
De forberedte kiler sås efter overfladeareal og tjener til at holde visse ikke-krævende mikroorganismer levedygtige i et bestemt tidsrum..
Trypticasein sojagar anvendes i følgende tilfælde:
-Som base til forberedelse af den klassiske blodagar, der rutinemæssigt bruges i de fleste laboratorier.
-Isolering af krævende bakterier.
-Overholdelse af hæmolysemønsteret.
-Kører diagnostiske tests.
-Som grundlag for udarbejdelse af særlig blodagar til Corynebacterium diphteriae, med cystintellurit Y lamblod.
-Som base til fremstilling af lamblodagar plus kanamycin-vancomycin til vækst af anaerober, især Bacteroides sp.
-Til vedligeholdelse af ikke-krævende stammer (Bacterioteca).
-Aerobt mikrobielt antal i den mikrobielle grænseundersøgelse af vand-, miljø-, mad- og kosmetiske prøver.
Prøver kan sås direkte på overfladen af Trypticasein Soy Agar suppleret med blod eller andre tilsætningsstoffer. Det sås ved udmattelse.
Mens trypticasein-soja-agarplader uden tilsætningsstoffer generelt anvendes til subkultur af mikrobielle stammer (bakterier eller gær)..
For at kontrollere steriliteten af de forskellige medier, der er fremstillet med trypticasein-sojabasagar, anbefales det at gøre følgende: Fra hver forberedt batch skal 1 eller 2 uinokulerede plader eller rør inkuberes ved 37 ° C i 24 timer for at demonstrere deres sterilitet. I alle tilfælde skal den forblive uden vækst.
Hvis der findes forurening, skal hele batchen kasseres..
Følgende bakteriestammer kan bruges til at undersøge, hvordan trypticasein-sojagar fungerer korrekt: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 og Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Stammer udsås og inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timer.
I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende.
Svampe som f.eks.Kompleks kan også bruges Candida albicans ATCC 10231 og Aspergillus niger ATCC 16404. Der forventes god vækst for begge stammer.
Følgende stammer kan bruges til at verificere den korrekte funktion af blodagar fremstillet med denne base: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 og Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.
De podes og inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilitet i 24 timer..
I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende under hensyntagen til, at i S. pyogenes beta-hæmolyse (klar halo omkring kolonien) skal observeres og i begge stammer af S. pneumoniae alfa-hæmolyse (grønlig halo omkring kolonier) skal overholdes.
Endnu ingen kommentarer