Bismuth sulfit agar begrundelse, forberedelse og anvendelser

4491
Simon Doyle

Det bismuth sulfit agar er et fast, selektivt og differentieret dyrkningsmedium, specielt formuleret til isolering af Salmonella enterica undergruppe enterica serotype Typhi, blandt andre arter af Salmonella. Mediet er kendt som BSA-agar for dets akronym på engelsk Bismuth Sulfite Agar..

Den oprindelige formel for bismuthsulfitagar blev oprettet i 1927 af Wilson og Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); Dette indeholdt natriumsulfit, glucose, bismuth-opløsning, ammoniumcitrat, jernholdigt sulfat og agar-agar..

Vækst på 48 timers inkubation af Salmonella sp på bismuthsulfitagar. Kilde: Pixnio.com Forfatter: Dr. W. R. Erving, USCDCP

I dag er der en modifikation af det originale medium, der består af kødekstrakt, kød- og kaseinpeptoner, bismuthsulfitindikator, glukose, dinatriumphosphat, jernholdigt sulfat, lysegrøn og agar-agar..

Der er mange midler til isolering af Salmonella-arter, men når det kommer til udvinding af Typhi-serotypen, har bismuthsulfitagar en bemærkelsesværdig fordel i forhold til dem, da der i de fleste tilfælde opnås en meget lav eller ingen genopretning af denne mikroorganisme..

Det er dog nødvendigt at bruge mere end en type medium, når man prøver at isolere enteropatogener, fordi bismuthsulfitagar er mindre effektiv for andre Salmonella-arter og for Shigella-slægten, som er hæmmet eller udvikler sig meget dårligt. I denne agar.

Det skal bemærkes, at af alle Salmonella-arter er Typhi-serotypen en af ​​de vigtigste enteropatogener hos mennesker, dette er dets eneste reservoir. Denne serovar forårsager tyfusfeber, gastroenteritis, bakteriæmi og septikæmi..

Af denne grund er det relevant at medtage denne agar, når man analyserer vand, afføring eller fødevareprøver, hvor der er mistanke om dets tilstedeværelse..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
  • 4 Karakteristika for kolonierne på bismuthsulfitagar
  • 5 Begrænsning
  • 6 Kvalitetskontrol
  • 7 Referencer

Basis

Som de fleste kulturmedier indeholder Bismuth Sulfite Agar næringsstoffer til at fremme bakterievækst, såsom peptoner og kødekstrakt. Ligeledes fungerer glukose som en kilde til energi og kulstof..

Imidlertid vil ikke alle bakterier vokse på dette medium, da Bismuth Sulfite Agar er et selektivt medium. Den indeholder forbindelser, der hæmmer væksten af ​​Gram-positive mikroorganismer og visse Gram-negative bakterier. Disse forbindelser er: indikatoren bismuth sulfit og lysegrøn.

Dinatriumphosphat opretholder på sin side mediumets osmolaritet og pH.

Derudover er bismuthsulfitagar et differentieret medium takket være tilstedeværelsen af ​​ferrosulfat, som viser dannelsen af ​​HtoS. HtoS dannet af bakterier reagerer med jernholdigt sulfat og danner et klart synligt uopløseligt sort bundfald.

Endelig giver agar-agar mediet en solid konsistens..

Forberedelse

Vej 52,3 g af det dehydratiserede medium op og opløses i en liter vand. Opvarm blandingen til kog i 1 minut under hyppig omrøring, indtil den er helt opløst. Overophed ikke for meget. Dette medium autoklaveres ikke, da ekstrem varme skader kulturmediet..

Lad afkøle til 45 ° C og rystes inden servering i sterile petriskåle. Det anbefales at fremstille plader med god tykkelse. Til dette skal 25 ml hældes i hver plade. Lad størkne. Da det er et medium, der ikke er steriliseret, er det normalt, at dets umiddelbare anvendelse foreslås.

En undersøgelse foretaget af D'aoust i 1977 viste imidlertid, at der er en bedre genopretning af Salmonella typhimurium Y Salmonella enteritidis som Bismuth Sulfite Agar middelalderen, påvirkes ikke ydeevnen for serovarer Typhi Y Paratyphi B.

D'aoust anbefaler at bruge pladerne på dag 4 i køling, selvom han advarer om, at i middelalderen falder selektiviteten og udvikler lettere stammer af Proteus vulgaris.

Af denne grund foretrækkes det for stærkt forurenede prøver, såsom afføring, at bruge det frisklavede medium. Brug ellers på dag 4 af tilberedningen. Andre forfattere anbefaler at bruge pladerne dagen efter tilberedningen, opbevaret i køleskab..

Køleplader skal hærdes inden brug. Mediets pH skal være 7,5 ± 0,2. Farven på det rå medium er beige og det tilberedte medium er grøngrå, opaliserende.

Ansøgninger

Blandt de prøver, der kan plantes i dette medium, er prøver af afføring, drikkevand eller spildevand og mad..

For at forbedre isolaterne anbefales det at udføre en præberigelsesbehandling med lactosebouillon og efter berigelse med tetrathionat-bouillon eller cystinselenit-bouillon inden såning på bismuthsulfitagar..

Pladerne inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer i aerobiose.

Karakteristika for kolonierne på bismuthsulfitagar

Kolonierne i Salmonella Typhi de ses normalt på denne agar inden for 24 timer med et sort center og omgivet af en lysegrøn glorie. Mens de på 48 timer bliver helt sorte på grund af dannelsen af ​​hydrogensulfid.

Salmonella Paratyphi A det præsenterer kolonier med variable egenskaber. Efter 18 timers inkubation kan der observeres sorte, grønne eller gennemsigtige kolonier med slimform. Mens de på 48 timer er helt sorte og nogle gange med en udtalt metallisk glans..

S. Paratyphi A har tendens til at sorte miljøet omkring kolonien.

Salmonella sp viser sorte eller grøngrå kolonier, med eller uden metallisk glans, og kan muligvis sorte det omgivende miljø.

Coliforme stammer er generelt fuldstændigt hæmmede, men hvis de vokser, udvikler de sig som uigennemsigtige grønne eller brune kolonier uden metallisk glans. Pletter ikke mediet omkring kolonien.

Begrænsning

-Meget svage podestoffer kan forårsage kolonier af Salmonella Typhi lysegrøn i farve, går ubemærket hen, og kulturen rapporteres som negativ.

- Bismuth Sulfite Agar kan hæmme inddrivelsen af ​​nogle Salmonella arter såsom S. sendai, S. berta, S. gallinarum, S. abortus-equi.

-Dette medium hæmmer de fleste arter af slægten Shigella.

- S. Typhi og S. arizonae kan give meget lignende kolonier.

-Koliformer, der producerer HtoS som Proteus og Citrobacter producerer kolonier svarende til Salmonella, derfor er det nødvendigt at udføre biokemiske identifikationstest.

-God stribning skal udføres for at opnå isolerede kolonier; det er den eneste måde at observere de typiske egenskaber ved kolonier af slægten Salmonella på.

QA

Til sterilitetskontrol inkuberes en uinokuleret plade ved 37 ° C, det forventes, at der ikke er nogen vækst eller farveændring..

Til kvalitetskontrol kendte stammer såsom:

Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Det forventes, at Escherichia coli Y Shigella flexneri hæmmes delvist ved at udvikle henholdsvis grønbrune og brune kolonier. Mens begge salmonellas skal have en fremragende udvikling med sorte kolonier med en metallisk glans, og endelig Enterococcus faecalis skal være fuldstændig hæmmet.

Referencer

  1. Wilson, W. og E. M. McV. Blair. Anvendelse af et glidebismuthsulfitjernmedium til isolering af B. typhosus og B. proteusThe Journal of Hygiene, 1927; 26(4), 374-391. Hentet fra .jstor.org
  2. D'aoust JY. Virkning af opbevaringsbetingelser for udførelsen af ​​bismuthsulfitagar. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122-124. Fås på: ncbi.nlm.nih.gov
  3. IVD laboratorier. Bismuth-sulfitagar ifølge WILSON-BLAIR. 2009.Tilgængelig på: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
  4. Himedia Laboratories. Bismuth Sulphite Agar. 2017. Tilgængelig på: himedialabs.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  6.  Morales R, de la Cruz D, Leyva G og Ybarra M. Bakteriologisk kvalitet af rå gedemælk produceret i Miravalles, Puebla. Rev Mex af Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54

Endnu ingen kommentarer