Det tryptisk soja bouillon Det er et flydende dyrkningsmedium, meget nærende og ikke-selektivt. På grund af sin store alsidighed er det et af de mest anvendte flydende kulturmedier i mikrobiologilaboratoriet..
Det er også kendt under navnet tryptisk sojabouillon eller kasein-soja-fordøjet bouillon, hvis forkortelse er TSB for dets akronym på engelsk. Tryptic am Bouillon eller CST for dets akronym på spansk. Dens anvendelser er meget varierede på grund af dets sammensætning. Den består af triptein, sojapepton, natriumchlorid, dikaliumphosphat og glukose.
Det er i stand til at reproducere klinisk vigtige patogene bakterier, herunder dem, der er ernæringsmæssigt krævende og anaerobe bakterier. Nogle opportunistiske og forurenende svampe kan også udvikle sig i dette miljø.
På grund af sin høje ernæringsmæssige styrke har den høj følsomhed til at detektere mikrobiel forurening, og derfor blev den valgt af USDA Animal and Plant Health Inspection Service til mikrobiologisk analyse af vacciner..
Ligeledes opfylder trypticasein sojabuljone kravene fra de forskellige farmakopéer (europæisk EP, japansk JP og nordamerikansk USP) til mikrobiologisk undersøgelse af produkter på industrielt niveau, såsom kosmetik og mad..
På den anden side er det værd at nævne, at på trods af dets store anvendelighed er dette medium relativt billigt, hvilket gør det overkommeligt for de fleste mikrobiologilaboratorier. Det er også meget let at forberede.
Artikelindeks
Triptein, pepton og glucose giver essentielle ernæringsmæssige egenskaber for at gøre det til et ideelt medium til hurtig mikrobiel vækst.
I ca. 6 til 8 timers inkubation kan vækst allerede ses i de fleste mikroorganismer. Der er dog langsomt voksende stammer, der kan tage dage at vokse..
Natriumchlorid og dikaliumphosphat fungerer som henholdsvis osmotisk balance og pH-regulator. Tilstedeværelsen af vækst fremgår af udseendet af uklarhed i mediet; hvis der ikke er nogen vækst, forbliver mediet gennemskinneligt.
På grund af sin lyse farve er det muligt at observere produktionen af pigmenter, som den der er vist på billedet placeret i begyndelsen af artiklen, hvilket svarer til det pigment, der produceres af Pseudomonas aeruginosa.
For at forberede trypticase-sojabuljon skal 30 g af det dehydrerede kommercielle medium vejes i digital skala. Derefter opløses det i en liter destilleret vand indeholdt i en kolbe.
Blandingen lades hvile i 5 minutter, og derefter føres den til en varmekilde for at hjælpe med at opløse mediet. Det skal omrøres ofte, mens det koger i 1 minut.
Når det er opløst, fordeles det i rør af passende størrelse efter behov. Rør med bomuldsstik eller med bakelithætter kan bruges. Derefter steriliseres rørene med mediet i autoklaven ved 121 ° C i 15 minutter..
Mediets pH skal forblive på 7,3 ± 0,2
Det skal bemærkes, at farven på det dehydrerede dyrkningsmedium er lysebeige og skal opbevares mellem 10 og 35 ° C på et tørt sted. Mens den tilberedte bouillon er lys ravfarvet og skal opbevares i køleskab (2 til 8 ° C).
Modificeret trypticasein-soja-bouillon kan fremstilles ved tilsætning af galdesalte og novobiocin for at gøre det selektivt til isolering af E coli. En anden mulighed til det samme formål er at fremstille trypticase sojabuljong suppleret med vancomycin, cefixim og tellurit (2,5 µg / ml)..
På den anden side kan mere glukose (0,25%) tilsættes til tryptisk sojabuljong, når målet er at stimulere dannelsen af biofilm..
Det er nærende nok til at tillade vækst af krævende eller krævende bakterier såsom Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp og Brucella sp, intet behov for at supplere med blod eller serum.
Ligeledes kan nogle svampe udvikle sig i denne bouillon, såsom Candida albicans-kompleks, Aspergillus sp og Histoplasma capsulatum.
Desuden er dette medium under anaerobe forhold ideelt til at inddrive bakterier, der hører til slægten Clostridium, såvel som ikke-sporulerede anaerobe bakterier af klinisk betydning..
Hvis der tilsættes 6,5% natriumchlorid, kan det bruges til vækst af Enterococcus og anden gruppe D Streptococcus..
På forskningsniveau har det været meget nyttigt i forskellige protokoller, især i studiet af biofilm eller biofilmdannende bakterier. Det bruges også til at forberede den 0,5% Mac Farland-bakteriesuspension, der er nødvendig for at udføre antibiogrammet ved Kirby og Bauer-metoden..
I dette tilfælde tages 3 til 5 kolonier med lignende udseende og emulgeres i 4-5 ml trypticaseinsoja-bouillon. Derefter inkuberes den i 2 til 6 timer ved 35-37 ° C og justeres derefter til den ønskede koncentration under anvendelse af sterilt saltvand. Trypticasein sojabuljong bør ikke bruges fra 18 til 24 timers inkubation.
Prøven kan podes direkte, eller rene kolonier taget fra selektive medier kan subkultureres. Inokulumet skal være lille for ikke at skyde mediet før inkubation.
Normalt inkuberes det ved 37 ° C i aerobiose i 24 timer, men disse betingelser kan variere afhængigt af den ønskede mikroorganisme. Det kan også inkuberes under anaerobe forhold ved 37 ° C i flere dage, hvis det er nødvendigt. For eksempel i krævende eller langsomt voksende mikroorganismer kan den inkuberes i op til 7 dage.
I den mikrobiologiske analyse af farmaceutiske stoffer - såsom vacciner - er protokollerne strengere. I disse tilfælde kasseres bouillon uden vækst først, når den når 14 dages kontinuerlig inkubation..
Fra hver forberedt batch skal 1 eller 2 ikke-inokulerede rør inkuberes for at demonstrere deres sterilitet. Skal forblive uændret.
Kendte stammer kan også plantes for at vurdere deres adfærd. Blandt de stammer, der kan bruges, er:
Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 eller 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 14028.
I alle tilfælde skal væksten være tilfredsstillende under forholdene med den passende atmosfære og temperatur for hver mikroorganisme..
-Fermenteringen af glukose får mediets pH til at falde på grund af produktionen af syrer. Dette kan være ugunstigt for overlevelse af nogle surhedsfølsomme mikroorganismer..
-Det anbefales ikke til vedligeholdelse af stammer, for ud over surhedsgrad udtømmer bakterier næringsstoffer efter et par dage med den deraf følgende akkumulering af giftige stoffer, der gør miljøet ufarligt.
-Du skal arbejde på at tage sig af alle sterilitetsprotokoller, da bouillon let er forurenet.
-Efter tilberedning af trypticasein-sojabouillon bør du ikke prøve at overføre bouillon til et andet sterilt rør, fordi denne type manøvre er meget sårbar over for forurening..
Endnu ingen kommentarer