SIM medium fundament, forberedelse og anvendelser

3797
Abraham McLaughlin

Det halvt SIM-kort er en halvfast og differentieret agar, specielt designet til at identificere nogle bakterier, hovedsagelig af Enterobacteriaceae-familien. Den består af triptein, pepton, jernsulfat, ammoniumsulfat, natriumthiosulfat og agar..

Dette medium tillader udførelse af tre vigtige tests: produktionen af ​​hydrogensulfid (HtoS), indoldannelse og bevægelighed, derfor kommer akronymet SIM fra. På grund af dets store anvendelighed kan det ikke mangle i et bakteriologilaboratorium.

A. Kommercielt SIM-medium B. SIM H2S (-), indol (-) og motilitet (+) test og SIM H2S (+), indol (-), motilitet (+) test. Kilde: A. Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)]

I modsætning til andre medier skal det være halvfast for at nogle bakteriers bevægelseskapacitet skal kunne påvises. I denne forstand fungerer denne test meget godt for Enterobacteriaceae, men ikke i ikke-gærende gramnegative stænger, hvor det foretrækkes at bruge andre metoder, såsom hængende dråbe..

SIM-mediet gør det muligt at skelne mellem bestemte specifikke egenskaber, der karakteriserer nogle bakterier i forhold til andre. For eksempel Escherichia coli adskiller sig ved at være HtoS (-), Indol (+) og bevægelighed (+), mens Proteus mirabilis det er HtoS (+), indol (-), bevægelighed (+).

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Strømkilde
    • 1.2 Produktion af hydrogensulfid
    • 1.3 Dannelse af indol
    • 1.4 Motilitet
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Medium SIM
    • 2.2 Kovacs reagens
    • 2.3 Erlichs reagens
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Såning
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Det er et kulturmedium, der betragtes som differentieret, fordi dets anvendelse skelner mellem mikroorganismer, der er i stand til at producere hydrogensulfid, fra dem, der ikke gør det; Det fremhæver også dem, der danner indol fra tryptophan fra dem, der ikke danner det, og til sidst differentierer de bevægelige bakterier fra de immobile..

Strømkilde

Som ethvert kulturmedium har det elementer, der tilvejebringer de nødvendige næringsstoffer, så ikke-krævende mikroorganismer kan udvikle sig. Disse elementer er repræsenteret af peptoner og triptein.

Udviklingen af ​​mikroorganismen i mediet er afgørende for at kunne observere tilstedeværelsen eller fraværet af de egenskaber, som dette medium vurderer..

Produktion af hydrogensulfid

Bogstavet S i akronymet SIM henviser til produktionen af ​​hydrogensulfid (HtoS). Bakterier, der er i stand til at danne hydrogensulfid, optager svovlet fra natriumthiosulfat.

Når HtoS-farveløs gas- reagerer med det jernsalt, der er til stede i mediet, og danner jernholdigt sulfid, klart synligt (sort bundfald). Bakterier, der ikke danner HtoJa, lad midten af ​​den originale farve (beige).

Tilstedeværelsen af ​​det sorte bundfald kan hindre fortolkningen af ​​bevægelighed. Det er imidlertid kendt, at de fleste H-producerende EnterobacteriaceaetoS er positiv bevægelighed, såsom Salmonella, Proteus og Citrobacter. Derudover antyder det sorte bundfald, der dækker næsten hele mediet, positiv bevægelighed.

Indol dannelse

Det andet bogstav i akronymet SIM er "I", som repræsenterer dannelsen af ​​indol.

I denne forstand opfylder triptein ud over at være en kilde til næringsstof en anden grundlæggende funktion. Denne pepton er rig på en aminosyre kaldet tryptophan, derfor kan den vise de bakterier, der producerer tryptophanase.

Dette enzym er ansvarlig for spaltning af aminosyren tryptophan med den deraf følgende dannelse af indol (farveløst stof), pyruvinsyre og ammonium.

Derfor er det nødvendigt at tilføje et afslørende stof (Ehrlichs reagens eller Kovac's reagens) for at demonstrere denne reaktion. Enten reagerer med indol og danner et ringformet stof med rød-fuchsia på overfladen af ​​agaren. Hvis fuchsia-ringen vises, fortolkes indol-testen som positiv.

Bakterier, der ikke har dette enzym, danner ikke ringen, og det fortolkes som en negativ indoltest.

Det er vigtigt at bemærke, at indoltesten skal være den sidste, der skal fortolkes, da mediet, når reagenset er tilsat, bliver uklart, hvilket gør det vanskeligt at visualisere bevægelighed..

Motilitet

Endelig betyder bogstavet "M" i ordet SIM bevægelighed. For at være i stand til at evaluere bevægelighed er dette medium strategisk halvfast, da denne egenskab er afgørende for at kunne observere, om der er bakteriel bevægelse eller ej. Bakterier, der har flagella, er dem, der giver denne positive test.

En positiv test vil være tydelig, når uklarhed observeres, både i det oprindelige inokulum og omkring det. Mens ikke-bevægelige bakterier kun udvikler sig i vejen for det oprindelige inokulum.

Forberedelse

Medium SIM

Vej 30 g af det dehydratiserede medium og opløs det i en liter destilleret vand. Blandingen henstår i 5 minutter og opvarmes derefter til kogning under omrøring ofte indtil den er helt opløst..

Fordel blandingen i reagensglas med bomuldshætter og autoklave ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern rørstativet fra autoklaven, og lad det størkne i lodret position, så mediet er i form af en blok.

For at bevare det opbevares det i køleskabet, indtil det bruges. Det præparerede medium skal have en endelig pH på 7,3 ± 0,2.

På mediet, når mediet podes, skal det have stuetemperatur. Den midterste farve er beige.

Kovacs reagens

Mål 150 ml amyl eller isoamyl eller butylalkohol. (Brug en af ​​de tre nævnte).

10 g p-dimethylaminobenzaldehyd opløses. Tilsæt derefter langsomt 50 ml koncentreret saltsyre.

Det reagens, der er klar til brug, er farveløst eller lysegult. Det skal opbevares i en ravfarvet flaske og opbevares i køleskab. Brug det ikke, hvis det får en mørkebrun farve; det indikerer, at det er beskadiget. Dette reagens foretrækkes, når det kommer til Enterobacteriaceae.

Erlichs reagens

Der afvejes 2 g p-dimethylaminobenzaldehyd og opløses i 190 ml absolut ethylalkohol og blandes langsomt med 40 ml koncentreret saltsyre. Opbevar Kovac's reagens på samme måde. Ehrlichs reagens bruges mere til ikke-gærende og anaerobe bakterier.

Ansøgninger

SIM-medium bruges meget i bakteriologilaboratorier. Det har den fordel, at tre væsentlige egenskaber ved identifikationen af ​​Enterobacteriaceae kan observeres i det samme rør..

Sået

Den korrekte måde at så dette medium på er ved hjælp af nålen, hvormed en del af den rene koloni, der skal undersøges, tages og indsættes lodret i midten af ​​mediet. Der skal udføres et enkelt spring. Punktering bør ikke nå bunden af ​​røret, det rigtige er kun at dække to tredjedele af dybden.

Det anbefales ikke at gentage podestoffet, da dette kan føre til falske fortolkninger af positiv bevægelighed. Det podede medium inkuberes aerobt ved 37 ° C i 24 timer..

Efter tiden observeres det, om der var produktion af H eller ejtoS og bevægelighed læses. Endelig afsløres indolen, der tilsættes 3 til 4 dråber af Ehrlich eller Kovac's reagens, blandes forsigtigt og fortolkes.

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

QA

Som en sterilitetskontrol inkuberes et eller to rør uden podning i en ovn ved 37 ° C i 24 timer. Det forventes, at der efter dette tidspunkt ikke vil være nogen vækst eller farveændring.

Som kvalitetskontrol kan certificerede kendte stammer anvendes, såsom: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonnei ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

De forventede resultater er: Escherichia coli HtoS negativ, indol og positiv bevægelighed, Enterobacter aerogenes kun positiv bevægelighed, Salmonella typhimurium HtoS og positiv bevægelighed med negativ indol. Proteus vulgaris alle positive, mens Klebsiella pneumoniae Y Shigella sonnei alle negative.

Begrænsninger

-Nogle stammer af Morganella morganii, Blandt andre stammer kan de producere et brunligt pigment i dette medium på grund af produktionen af ​​melanin, dette bør ikke forveksles med bundfaldet af jernholdig sulfid. Hos uerfarne fagfolk kan denne situation generere falske positive i fortolkningen af ​​H-testen.toS.

-Strenge aerobe bakterier vokser kun på rørets overflade, hvilket gør det vanskeligt at fortolke bevægelighed.

Referencer

  1. BD Laboratories. BBL SIM Medium. 2008. Tilgængelig på: bd.com
  2. Neogen Laboratories. SIM Medium. Fås på: fødevaresikkerhed
  3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM Medium. 2009. Tilgængelig på: http://f-soria.es
  4. Brizuela-Lab laboratorium. Medium SIM. Tilgængelig på: .brizuela-lab.com
  5. Britannia Laboratories. Medium SIM. 2015.Tilgængelig på: studyres.es/doc
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer