Det orcein er en naturlig lilla farve, ekstraheret fra forskellige lav, såsom: orchilla eller urchilla, lichen fruticoso, Rocella tinctoria Y Lecanora parella hovedsagelig. Det Rocella tinctoria Det findes på det afrikanske og amerikanske kontinent, skønt det kan erstattes af andre arter i Europa.
Denne plet er blevet brugt meget i cytogenetiske undersøgelser siden oldtiden. I denne forstand blev orceinpræparatet, der inkluderer eddikesyre, introduceret af LaCourt i 1941, hvorfor det oprindeligt blev kaldt LaCourt-teknikken..
På grund af sin enkelhed og lave omkostninger er det ligeledes blevet brugt til fremstilling af lakmus (farvestof ekstraheret fra lav) og i histologiske undersøgelser (farvning af celler og væv)..
Flere undersøgelser har brugt denne plet kombineret med andre kemikalier, såsom ammoniakpikrocarminat og eddikesyre, til at plette henholdsvis elastiske fibre og kromosomer. På nuværende tidspunkt anvendes orcein fortsat i de cytogenetiske undersøgelser af dyr og planter..
For nylig har Silva et al. 2017 brugte denne plet med succes til at observere de forskellige ændringer, der forekommer i de elastiske fibre i tommelfingerhuden hos chilenske ældre voksne. Denne undersøgelse afslørede, hvordan fibrene i tommelfingeren ændres med aldring.
I denne forstand blev de elastiske fibre observeret at have brun-sort farve hos individer ældre end 80 år; mens de i den yngste (fra 60 år) ses som en rødbrun farve. Cytoplasma og andre cellestrukturer bliver gulgrønne.
Dette gjorde det muligt at bekræfte tilstedeværelsen og tilstanden af de elastiske fibre med hensyn til deres disposition, mængde og integritet. På den anden side er det også blevet påpeget, at orcein er til stor hjælp til at identificere aneurismer og diagnosticere arteritis blandt andre tilstande.
Artikelindeks
Orcein er en del af oxazin-gruppen af farvestoffer, og farvningen er baseret på dets affinitet for DNA. Farvestoffet binder til den negative ladning af dette molekyle, repræsenteret af phosphatgruppen. Derfor farves kromosomerne lilla.
Imidlertid får resten af cellens strukturer en anden farve. Specifikt i tilfælde af elastiske fibre er de farvet rødbrune, cellekerner fra blå til mørk lilla, mens kollagen ikke pletter.
Af denne grund bruges orcein til at plette kromatin og differentiere køn hos nogle fluer. Ligeledes kan kerner og nogle leverindeslutninger produceret af hepatitis B-antigener farves..
Orcein-løsninger har specifikke funktioner til farvning. Orcein A har den funktion at blødgøre cellemembranerne, forårsage deres død og lamme processen med deres opdeling. I mellemtiden har orcein B ansvaret for at færdiggøre farvningen ved dens adhæsion til kromosomerne..
Til fremstilling af en 1% opløsning af aceto-orcein opløses 2 gram orcein i 45 ml iseddikesyre, fortrinsvis varmt, og 55 ml destilleret vand tilsættes ved stuetemperatur..
Derefter blandes det konstant for at homogenisere opløsningen, for senere at lade den hvile, indtil den afkøles. Endelig opbevares den ved 4 ºC i mørke flasker. Dette præparat blev brugt af Flores 2012 til at observere modningsfaser af ko-oocytter..
I dette tilfælde placeres f.eks. Aceto-orceinopløsningen på vævet, der tidligere er fikseret i eddikesyre-ethanol i 24 timer. Denne farvningsproces udføres i 30 minutter, og vævet misfarves derefter..
Ligeledes kan det bruges til identifikation af organeller i flercellede væv. I dette tilfælde farves en udstrygning af bugslimhinden med en dråbe af aceto-orceinopløsningen, dækglasset placeres på objektglasset, og straks kan cellens kerne med dens underkonstruktioner observeres.
Derudover kan orcein fremstilles med andre kemikalier, såsom mælkesyre og propionsyre. For at gøre dette opløses et gram orcein i en forblandet opløsning ved stuetemperatur på 23 ml mælkesyre og 23 ml propionsyre; fyldning af volumen med destilleret vand op til 100 ml.
Med denne lacto-propioniske orceinopløsning er det muligt at observere de forskellige faser af meiotisk opdeling af planteceller. I dette tilfælde placeres den forudfastsatte og hydrolyserede prøve i 15 minutter i den lacto-propioniske orceinopløsning, hvorefter vævet spredes på objektglas..
I Duques 2016-undersøgelse af polythenkromosomer brugte han et præparat på 2 gram orcein fortyndet i eddikesyre og 85% mælkesyre, fortyndet med en 65% eddikesyreopløsning. Endelig kiggede han på kromosomerne i spytkirtlerne i Drosophila melanogaster.
Det er vigtigt at bemærke, at den relevante orceinopløsning fremstilles afhængigt af prøven og hvad der skal evalueres. Således tilsættes fx 1 N saltsyre til orcein A-opløsningen for at observere delende celler..
Mens orcein B-opløsningen opløses i 45% eddikesyre. Denne teknik er en forkortet farvningsmetode og bruges generelt som et supplement til farvning af kromosomale strukturer..
Siden århundreder tidligere kan man i lande på det amerikanske kontinent som Argentina få lav som: Lecanora, Parmelia Y Umbilicaria, som er gode kilder til orcein. Også europæiske områder som De Kanariske Øer var på det tidspunkt store producenter af orkillaen.
Dette blev eksporteret til andre byer på det samme kontinent som Genova og lande som England, mens Holland monopoliserede fremstillingen af lakmus fra orkillaen. Så senere blev denne lav reduceret, indtil den var ved at blive uddød.
Dette førte til, at orkillaen blev erstattet af andre planter med farvestofegenskaber. Imidlertid bidrog fremkomsten af syntetiske farvestoffer til afslutningen af handelen med denne lavkilde af orcein..
Dette var muligt takket være Cocq, der i 1812 beskrev syntesen af orcein, idet han vidste, at den blev syntetiseret af en phenolforbindelse kaldet orcinol. På trods af dette er naturlig orcein i øjeblikket stadig den foretrukne.
Dette kan skyldes, at orcinol er en meget ildelugtende forbindelse, hvis langvarige eksponering kan medføre sundhedsrisici, såsom tab af evne til at opdage lugte. Disse skader på hypofysen kan gå fra midlertidig til permanent, jo større eksponering..
Endnu ingen kommentarer