Det xanthoprotein reaktion er en kemisk procedure, der anvendes til at bestemme tilstedeværelsen eller fraværet af aromatiske aminosyrer, såsom tyrosin og tryptophan, som kan være i fri form eller udgør opløselige proteiner, peptider eller polypeptider.
Det er også blevet brugt til at detektere giftige stoffer i blodet, der indeholder en benzengruppe i deres struktur. Denne test er også kendt som xanthoprotein Becher-reaktionen..
Xanthoprotein-reaktionen bruger koncentreret salpetersyre, varme og en neutraliserende alkali. Hvis opløsningen bliver fra gul til orange, når reaktionen neutraliseres, betragtes testen som positiv. Den observerede farvning skyldes dannelsen af nitrogenforbindelser afledt af nitrifikationen af benzengrupper.
Hvis mængden af totalt protein skal kvantificeres, er det nødvendigt at bruge andre proteinbestemmelsesmetoder, såsom Biuret..
Xanthoprotein-reaktionen anvendes hovedsageligt, når stoffer, hvis kemiske sammensætning ikke er kendt, analyseres. Denne reaktion er normalt en del af et sæt tests, der hjælper med at bestemme den kemiske sammensætning af et bestemt stof eller ekstrakt. Derfor bruges den i vid udstrækning af forskere.
På den anden side anvendes Becher xanthoprotein-reaktionen til at detektere phenol- og indolstoffer i blodet, hvilket gør det muligt at forudsige udseendet af nefropati, inden andre senere parametre øges..
Artikelindeks
Reaktionen detekterer grundlæggende tilstedeværelsen af benzengruppen, både i aminosyrer såvel som i proteiner og peptider. Salpetersyre virker på benzenringen af aminosyrer, der besidder den, og danner phenoliske nitroforbindelser.
Reaktionen skal udføres varme, generelt dannes der et bundfald, der skyder mediet og gør det mælkeagtigt. Bundfaldet kan være hvidt eller gult. Endelig kræver det et alkaliseringstrin, der fremhæver farven. Til dette anvendes en base såsom 40% natriumhydroxid eller ammoniak..
Reaktionen fortolkes som positiv, hvis der observeres en stærk gul farve under opvarmningsprocessen eller mørk orange, når reaktionen alkaliserer. De aminosyrer, den opdager, er hovedsageligt tyrosin og tryptophan.
I tilfælde af phenylalanin, selvom det er en aromatisk aminosyre, er benzenkernen i denne aminosyre vanskeligt at blive nitreret i en simpel reaktion, derfor udsender den enten en negativ eller svag positiv reaktion.
Generelt kan xanthoprotein-testen suppleres med Hopkins-Cole-testen, som bruges til specifikt at identificere tryptophan. Hvis xanthoprotein-testen er positiv, og Hopkins-Cole-testen er negativ, er tilstedeværelsen af tryptophan i denne opløsning udelukket, hvilket primært peger på tilstedeværelsen af tyrosin. Ligeledes kan det også suppleres med Millon-reaktionen til detektion af tyrosin blandt andet..
Denne reaktion kan også anvendes på prøver af blod, plasma eller desalbumineret serum til diagnosticering af uræmi eller nyresvigt. I dette tilfælde er det, der søges, påvisning af giftige stoffer (phenol og indol), der er produceret ved tarmfornærring..
Disse stoffer har benzengruppen og giver derfor en positiv xanthoproteinreaktion, selvom det reagerende stof hverken er en aminosyre eller et protein..
Anbring 1 ml af prøven i et rent, tørt reagensglas.
-Tilsæt 0,5 ml koncentreret salpetersyre.
-Inkuber blandingen i et vandbad ved 70 ° C i 2 minutter. Forbered vandbadet tidligere ved den nævnte temperatur.
-Når røret fjernes fra vandbadet, er det muligt at observere, at opløsningen er blevet mælkeagtig og har fået en vis gul-hvid farve..
-Opløsningen afkøles ved at droppe koldt vand i bunden af røret..
-Præparatet gøres alkalisk ved langsomt at tilsætte (dråbe for dråbe) en 40% natriumhydroxidopløsning, indtil der er en farveændring.
-Hvis testen er positiv, dannes en mørkeorange ring ved væskens grænseflade..
-Hvis reaktionen er negativ, vil der ikke være nogen farvedannelse.
-Uddel 5 cc 20% trichloreddikesyre på 5 cc venøst blod, plasma eller serum, hvor sidstnævnte er den mest angivne. Bland godt og filtrer.
-Der tages 2 ml af filtratet og blandes med 0,5 ml salpetersyre. Derefter opvarmes det til kogning, for dette placeres røret direkte over den lysere flamme i 30 sekunder. Den afkøles med vand, og 1,5 natriumchlorid 33% tilsættes..
Det fortolkes som følger:
-Negativt resultat: gullig farve.
-Positivt resultat (+) citrongul.
-(++) gylden gul.
-(+++) mørkegul til brun
Det kan også fortolkes ved hjælp af en referent Autenrieth kolorimetrisk skala, der består af forskellige koncentrationer af kaliumdichromat. Dette fremstilles i 10 i 10 fortyndinger fra en 0,03874% stamopløsning. Hvert rør repræsenterer en procentdel.
Der er to skalaer for fortolkning kaldet gammel og moderne. De normale værdier er:
Gammelt bord: mellem 75 og 85%
Moderne bord: mellem 15 og 25%
Hvis reagensglasets farve er midt i to standardrør, foretages der et gennemsnit mellem de to målinger.
Kaliumdichromatstandardopløsningen fremstilles som følger: 7,9 ml 10 N kaliumdichromat måles og fyldes op til 100 ml i en målekolbe. For fortyndinger følges som vist i den kolorimetriske tabel Autenrieth..
Anvendelsen af xanthoprotein-reaktionen er en del af et sæt biokemiske tests, der hjælper med at kende den kemiske sammensætning af et ukendt stof. Denne test bidrager til den kemiske analyse påvisning af proteiner, der indeholder benzengrupper i deres struktur..
Denne reaktion er meget brugt af forskere i forskellige undersøgelser af stoffer af interesse..
I denne forstand brugte Vásquez-Jorge og samarbejdspartnere denne og andre reaktioner til at undersøge proteinindholdet i væsker ekstraheret fra mangroveøstersen. (Crassostrea rhizophorae).
Ligeledes anvendte Rojas et al. (2009) en række tests, herunder xanthoprotein-reaktionen, til at analysere glycomacropeptider i ricotta-valleudfældninger..
På den anden side blev Becher xanthoprotein-reaktionen modificeret af Volhard til at blive brugt til andre formål. I dette tilfælde til påvisning af phenol- og indolstoffer, der kan stige meget tidligere (uger eller måneder), før niveauet af urinstof og restkvælstof i blodet stiger..
Disse giftige affald dannes af tarmens forrådnelse af mad.
Disse stoffer akkumuleres i blodet, når de ikke elimineres korrekt, og derfor kan en positiv xanthoprotein-test forudsige den tidlige begyndelse af korrekt nyresvigt eller en tilstand af uræmi..
Afhængigt af farveintensiteten kan du bestemme, hvor avanceret den er. I dette tilfælde er testen kvantitativ.
Hos raske mennesker giver denne test en let gul farve svarende til de normale niveauer af tryptophan og tyrosin, der kan være i blodet.
Mens xanthoprotein-reaktionen hos nyrepatienter er stærkt positiv på grund af tilstedeværelsen af følgende stoffer: phenol, indol, paracresol, aromatiske oxy-syrer, blandt andre.
Denne test skal udføres af uddannede fagfolk. Alle biosikkerhedsbestemmelser skal overvejes, da de anvendte reagenser er ætsende syrer og baser..
Hvis et par dråber salpetersyre ved et uheld falder på huden eller neglene, bliver de gule, da begge strukturer indeholder proteiner. Derudover forårsager det alvorlige forbrændinger på huden og slimhinderne.
Hvis der opstår hudkontakt, skal protokollen følges at vaske området straks med sæbe og vand i ca. 20 minutter..
Hvis det sprøjter ind i øjnene, skal det vaskes med rigeligt med frisk vand og forsøge at holde øjnene åbne..
Endnu ingen kommentarer