Det hæmatoxylin-eosin plet er en farvningsteknik, der bruger kombinationen af hæmatoxylin- og eosinfarvestoffer. Dette par farvestoffer er en perfekt duo, da hæmatoxylin fungerer som et grundlæggende farvestof, og eosin er et surt farvestof..
Betegnelsen af basiske eller sure farvestoffer henviser ikke til den pH, de opnår i opløsning, men snarere om den fremherskende andel med hensyn til de anioniske eller kationiske ladninger, de besidder, eller ved placeringen af kromoforgruppen..
I denne forstand betragtes hæmatoxylin som et basisk (kationisk) farvestof og har derfor en affinitet for syrestrukturer, såsom cellernes kerne. Mens eosin, som er et surt (anionisk) farvestof, har en affinitet for alkaliske eller basiske strukturer, såsom cellecytoplasma.
Af denne grund anvendes denne kombination af farvestoffer i vid udstrækning til vævsfarvning, da det gør det muligt at skelne mellem kerner og cytoplasmer. Kerner pletter mørkeblå eller lilla og lyserød cytoplasma.
Hæmatoxylin-eosin-farvning er en af de mest anvendte farvningsteknikker inden for histologi og cytologi på grund af dens nemme håndtering og lave omkostninger. Det bruges til visualisering af celler, tykke nervefibre og tilstedeværelsen af visse mikroorganismer i vævene, såsom: parasitter, svampe og bakterier, blandt andre.
Artikelindeks
Hematoxylin er et neutralt farvestof. Imidlertid er den komponent, der giver farven (kromofor), placeret i det kationiske eller basiske centrum af molekylet. Derfor er dets affinitet for sure strukturer. Dens kemiske formel er C16H14ELLER6 og dets videnskabelige navn 7,11b-dihydroindeno [2,1-c] chromen-3, 4,6a, 9,10 (6H) -pentol.
Det pletter hovedsageligt cellernes kerner, da de er meget rige på nukleinsyrer. Det kan også plette cytoplasmiske indeslutninger af viral oprindelse.
For at hæmatoxylin skal plette, skal det være i en oxideret tilstand og bundet til et metal. Sidstnævnte tjener til at fiksere til vævet, dvs. det vil fungere som en mordant.
Når hæmatoxylin oxideres kaldes det hæmatin. Oxidation opnås ved eksponering for ilt (ældning) af reagenset eller af stoffer, der hjælper dets oxidation (kemisk oxidation).
Eosin er et farvestof, der pletter rødt eller lyserødt. Det er uopløseligt i vand, selvom der er en vandopløselig version. Generelt fremstilles eosin ved opløsning i alkohol (95 ° ethanol).
Det pletter cytoplasmer, muskelfibre, cytoplasmatiske organeller og kollagen, men pletter ikke cellekerner. Dette skyldes, at det er negativt ladet, derfor har det en affinitet for positivt ladede strukturer..
Der er to typer eosin "Y" og "B". Eosin "Y" er kendt som gul eosin. Dens videnskabelige navn er tetrabromo ores uorescein, og dets kemiske formel er CtyveH8Br4ELLER5.
På den anden side omtales eosin "B" undertiden som blålig erythrosin B. Dens videnskabelige navn er dibromodinitro ores uorescein, og formlen er CtyveH8BrtoNtoELLER9. Begge er meget ens, og forskellen mellem at bruge den ene eller den anden er ikke rigtig mærkbar. Imidlertid er den mest populære eosin "Y".
Eosin har den egenskab at skelne mellem en levende celle og en død celle, da den kun er i stand til at krydse membranen for at plette dens cytoplasma, når cellerne er døde, hvilket efterlader cellens cytoplasma farveløs, hvis den forbliver i live.
Med hæmatoxylin-eosin kan tykke nervefibre farves og identificeres. Det er dog ikke nyttigt til farvning af de tynde nervefibre, da der kræves en sølvfarvning for at visualisere sidstnævnte..
I farvningen af det liderlige hudlag er farvestoffet eosin, da cellerne på dette niveau ikke har en kerne.
I det granulære lag af huden pletter hematoxylin stærkt keratohyalinkornene inde i granulacellerne. Tværtimod er hudens spinøse lag svagt farvet med hæmatoxylin, mens basal- eller kimlaget er plettet nok.
Eosin pletter cytoplasmaet i alle celler, og intensiteten af farven kan variere fra et lag til et andet..
Gómez et al., I 2005 demonstrerede, at hæmatoxylin-eosin-farvning var mere effektiv til at identificere tilfælde af amoebiasis på grund af Entamoeba histolytica Y Entamoeba dispar end den nye visualiseringsmetode (saltvand og lugol) hos patienter med akut diarrésygdom.
Det har også vist sig at være meget følsomt for at detektere erythrophagocytosis (amøber, der har opslugt erythrocytter).
Walwyn et al., I 2004 foreslog brugen af histologiske pletter til at detektere infektionsfremkaldende mikroorganismer.
Ved hjælp af hæmatoxylin-eosin-farvning var de i stand til at visualisere infektioner forårsaget af Clostridium, Actinomyces, spirillae eller Candida. De formåede også at observere tilstedeværelsen af parasitten Sarcoptes escabiei i hudafsnit og virale indeslutninger af cytomegalovirus og herpes i sektioner af forskellige væv.
Histologisk sektionsfarvning gennemgår en række trin. Den første ting er at få det histologiske afsnit. Dette skal vokses for senere at opnå snitene (ultrafine) med en mikrotom. Teknikken består af følgende trin:
1-Eliminering af overskydende paraffin: til dette kan du bruge xylol eller Heme-D, nedsænk i 3-5 minutter.
2-rehydrering af prøven: Dette opnås ved at nedsænke prøven i forskellige koncentrationer af alkoholer (ethanol) i faldende rækkefølge (100 °, 90 °, 70 °). I alle tilfælde i 7 minutter.
3-Eliminering af overskydende alkohol: for at gøre dette nedsænkes det i vand i 7 minutter.
4-farvning med hæmatoxylin: prøven nedsænkes i 6-10 minutter i en bakke indeholdende hæmatoxylin. Eksponeringstiden afhænger af størrelsen og tykkelsen af prøven..
5-eliminering af overskydende hæmatoxylin: Det vaskes med vand i 5 minutter, og derefter udføres en hurtig passage (10-20 sekunder) gennem sur alkohol. Senere vaskes det med vand igen i 5 minutter. Derefter nedsænkes den i ethanol ved 96 ° i 1 minut.
6-farvning med eosin: til dette nedsænkes prøven i 5 minutter i eosinbakken.
7-dehydrering af prøven: for dette føres alkoholbakkerne (ethanol) igen, men denne gang i stigende rækkefølge. (70 °, 90 °, 100 °). (I henholdsvis 5 sekunder, 5 sekunder, 1 minut).
8-Afklaring af prøven: til dette udsættes det for xylol i 5-10 minutter og tørres for at forsegle permanent med Canada balsam eller andet lignende materiale.
Et udstrygning laves med patientens afføring på et dias og fikseres med 80% alkohol i 5 minutter. Pladen nedsænkes i hæmatoxylin i 5 minutter og vaskes straks med vand..
Derefter nedsænkes den hurtigt i sur alkohol og derefter i ammoniakvand. Det vaskes med vand. Den er farvet i 5 minutter i eosin. Prøven dehydratiseres som forklaret i den kendte teknik, og til sidst skylles den med xylen.
I en liter destilleret vand opløses 50 gram kalium eller ammoniumaluminiumsulfat. Når det er helt opløst, tilsættes 1 gram krystalliseret hæmatoxylin. Efter fuldstændig opløsning tilsættes 1 g citronsyre sammen med 50 g chlorhydrat og 0,2 g natriumiodat..
Blandingen koges i 5 minutter, lodes derefter afkøle og filtreres for at fjerne eventuelle faste partikler, der er tilbage. Det således fremstillede reagens kan anvendes med det samme.
Det kan fremstilles med en alkoholisk base eller med en vandbase.
I 100 ml ethanol ved 95 ° opløses 0,5 gram eosin "Y". Tilsæt derefter et par dråber iseddike.
I 1250 ml destilleret vand opløses 25 gram vandopløselig eosin "Y". Tilsæt derefter et par dråber iseddike.
Mål 0,5 ml koncentreret saltsyre og fyld op til 100 ml med absolut alkohol.
Mål 0,5 ml koncentreret ammoniak og fyld op til 100 ml med destilleret vand.
Endnu ingen kommentarer