BHI agar fundament, forberedelse og anvendelser

1289
Sherman Hoover

Det BHI agar Brain Heart Infusion Agar er et solid nærende kulturmedium. På spansk henviser vi til det som hjerneinfusionsagar. Det er et ikke-selektivt dyrkningsmedium, hvilket betyder, at alle typer Gram-positive og Gram-negative bakterier kan udvikle sig, samt nogle gær- og filamentøse svampe..

Det består af en infusion af hjerne og hjerte fra oksekød, peptisk hydrolysat fra dyrevæv, pancreashydrolysat af kasein, natriumchlorid, glucose, dinatriumphosphat og agar..

BHI plader. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Det skal bemærkes, at BHI-agar er et af de hyppigst anvendte dyrkningsmedier i bakteriologilaboratorier. Kan bruges uden kosttilskud som primær kultur, subkultur af kolonier opnået på andre selektive medier eller til vedligeholdelse af stammer i laboratoriet.

På den anden side er det et ideelt medium, der skal bruges som en base til fremstilling af berigede medier, såsom blodagar og chokoladeagar. Begge er ideelle til at isolere krævende mikroorganismer fra et ernæringsmæssigt synspunkt. Det skal dog bemærkes, at da det indeholder glukose, er det ikke egnet til at observere hæmolysemønstre..

Ligeledes kan BHI-agar bruges til fremstilling af specielle medier til isolering af vanskeligt voksende patogene mikroorganismer i almindelige medier, herunder: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae og Histoplasma capsulatum.

Med det antibiotiske tilsætningsstof bliver BHI-agar et selektivt medium til isolering af svampe.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Kiler
    • 2.2 Plader
    • 2.3 Forberedelse af blodagar
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Brug uden kosttilskud
    • 3.2 Som basisagar til fremstilling af andre medier
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Det er et nærende kulturmedium til at isolere moderat krævende mikroorganismer, og dets berigelse kan øges med tilsætning af blod og andre ernæringstilskud..

Det er et ikke-selektivt dyrkningsmedium, derfor tillader det vækst af de fleste Gram-positive og Gram-negative bakterier samt nogle svampe. Det kan dog blive selektivt med tilsætningen af ​​antibiotika..

Mediet indeholder hjerne- og hjerteinfusion af oksekød, peptisk hydrolysat af animalsk væv og kaseinhydrolysat i bugspytkirtlen; alle disse forbindelser fungerer som kilder til vitaminer, aminosyrer, nitrogen og kulstof.

Glukose er et kulhydrat, der giver energi til mikroorganismer, når de har gæret det. I mellemtiden opretholder natriumchlorid og dinatriumphosphat osmotisk balance og giver en pH-værdi tæt på neutralitet. Endelig giver agar mediet en solid konsistens.

Forberedelse

Vej 52 gram af det dehydrerede medium og opløses i en liter destilleret vand. Bring blandingen til en varmekilde, indtil den koger, omrør ofte under opløsningsprocessen..

BHI agarplader eller kiler kan fremstilles uden tilsætningsstoffer.

Kiler

Til klargøring af kiler serveres præparatet, indtil halvdelen af ​​hvert rør er fyldt, dækkes og steriliseres i en autoklave ved 121 ° C i 15 minutter, når det forlades, lægger det på en base, indtil de størkner. Senere opbevares i køleskabet indtil brug.

BHI kiler til bakterioteca. Kilde: Foto taget af forfatteren MSc. Marielsa Gil.

Plader

Den opløste blanding autoklaveres ved 121 ° C i 15 minutter, når den efterlades, afkøles den til 50 ° C, og 20 ml af mediet serveres i sterile petriskåle. De får lov til at størkne, vendes omvendt og opbevares i køleskabet indtil brug. Lad pladerne komme til stuetemperatur inden såning.

Mediets pH skal forblive på 7,4 ± 0,2.

Uforberedt medium er beige i farven og tilberedt er lysegult.

Forberedelse af blodagar

Efter sterilisering af mediet, afkøles til en temperatur på ca. 45 til 50 ° C, derefter tilsættes blodet (50 ml), blandes forsigtigt til homogenisering og serveres aseptisk 20 ml i hver petriskål. Hvis der dannes bobler på pladen, skal den lettere flamme hurtigt føres over boblerne for at eliminere dem.

Ligeledes kan specielle medier fremstilles ved tilsætning af de tilsvarende tilsætningsstoffer, når blandingen når en temperatur på 45 til 50 ° C..

Den midterste er kirsebærrød.

Ansøgninger

Brug uden kosttilskud

BHI-agar uden tilsætningsstoffer er nyttig som en primær kultur og til såning af rene stammer af lavt eller mellemlang krævende mikroorganismer til deres efterfølgende identifikation..

Da det er et lysfarvet medium, er det ideelt til at observere pigmenter, og da det ikke indeholder interfererende stoffer, kan nogle biokemiske tests, såsom oxidase og katalase, udføres på det, eller andre biokemiske tests kan monteres fra kolonier fra denne agar.

Ligeledes anvendes BHI-agarkiler i vid udstrækning til vedligeholdelse af stammer i et bestemt tidsrum i laboratoriet (bacterioteca).

De overfladefrøede plader eller kiler med bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i 24 til 48 timer. Hvorimod i svampe vil temperaturen og inkubationstiden afhænge af den type svamp, der søges..

Som basisagar til fremstilling af andre medier

Med denne base kan du forberede berigede og selektive medier.

Beriget

Dens hovedfunktion er at tjene som basis i udarbejdelsen af ​​blodagar til rutinemæssig brug i mikrobiologilaboratorier. Især BHI-basen bidrager til isolering af stammer af Streptococcus sp. Imidlertid har den ulempen, at den ikke er egnet til observation af hæmolysemønstre, fordi den indeholder glukose..

Det bruges også til fremstilling af kanin eller hesteblodagar til isolering af Haemophilus sp. For bedre resultater kan et tilsætningstilskud (IsoVitaleX) tilføjes.

Hvis prøverne kommer fra luftvejene til agaren, kan bacitracin tilsættes for at hæmme den ledsagende flora og øge sandsynligheden for genopretning af stammerne af Haemophilus sp.

På den anden side kan blodagar (lam eller menneske) med cystintellurit fremstilles til isolering Corynebacterium diphtheriae. Ligeledes er det nyttigt at fremstille kaninblodagar med tilsætning af cystin og glucose til isolering af Francisella tularensis.

Blodagarpladerne sås ved udmattelse, og de inkuberes ved 35-37 ° C i 24-48 timer i mikroaerofilicitet (5-10% COto).

Selektiv

Dette medium med tilsætning af antibiotika kan erstatte Sabouraud-agar til isolering af svampe..

Kombinationen af ​​BHI-agar med chloramphenicol - gentamicin eller penicillin -, streptomycin og hesteblod er ideel til isolering af Histoplasma capsulatum.

Afhængigt af den mikroorganisme, der skal isoleres, anbefales inkubation ved 35-37 ° C eller ved stuetemperatur i aerobiose. Nogle gange er inkubation nødvendig i begge temperaturområder ved hjælp af 2 plader til dette..

Nogle svampe kan lide Trichophyton mentagrophytes skal inkuberes ved stuetemperatur i op til 7 dage.

QA

Fra hver batch fremstillet anbefales det at inkubere 1 plade eller kile ved 37 ° C i 24 timer og kontrollere, at der ikke er nogen vækst; især vigtigt ved tilberedning af blodagar, da det er et let forurenet medium.

På den anden side kan kvaliteten af ​​mediet evalueres ved at inokulere kendte eller certificerede standardstammer og observere deres udvikling..

I denne forstand at evaluere BHI-agar uden tilsætningsstoffer, stammer af Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 eller Candida albicans ATCC 10231. Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 24 til 48 timer. I alle tilfælde forventes tilfredsstillende vækst.

For at evaluere blodagarplader, stammer af  Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 eller Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533.

Bakteriestammer inkuberes ved 37 ° C i mikroaerofilitet i 24 timer, mens svampen inkuberes ved stuetemperatur i et fugtigt kammer i op til 7 dage. I alle tilfælde forventes tilfredsstillende vækst.

Referencer

  1. Britannia Laboratories. Hjernens hjerteinfusionsagar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com.
  2. BD Laboratories. Brain Heart Infusion (BHI) Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com.
  3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, S.A. Hjernens hjerteinfusionsagar. 2009.
  4. Neogen laboratorium. Hjernehjerteinfusionsagar. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  5. Gil M. Blood agar: foundation, anvendelser og præparat. 2018. Tilgængelig på: lifeder.com.
  6. Wikipedia-bidragydere. Hjerneinfusion. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 19. september 2018, 03:58 UTC. Tilgængelig på: wikipedia.org. Adgang til 2. marts 2019.
  7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer