Chokoladeagargrundlag, anvendelser og tilberedning

4478
Robert Johnston

Det chokoladeagar Det er et fast, beriget, ikke-selektivt og ikke-differentieret kulturmedium. Det bruges hovedsageligt til isolering af krævende mikroorganismer ud fra et ernæringsmæssigt synspunkt, selvom enhver type bakterier kan vokse i det..

Derfor øges dets anvendelighed især ved såning af prøver, der normalt er sterile, såsom CSF og ledvæske. Selvom det også er inkluderet i det valgte middel til såning af polymikrobielle prøver, men i disse tilfælde er det nødvendigt med tilsætning af antibiotika, der hæmmer den samtidig flora..

Chokoladeagar med bakterievækst

Dette medium har en karakteristisk brun farve, der minder meget om chokolade, deraf navnet. Præparatet svarer meget til blodagar, kun i dette tilfælde skal blodet opvarmes for at de røde blodlegemer kan nedbrydes..

Dens præparat, ligesom blodagar, er meget sart, da det let forurenes. Af denne grund foretrækker mange laboratorier at anskaffe dette medium, der allerede er udarbejdet af kommercielle virksomheder, der garanterer dets kvalitet..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 anvendelser
    • 2.1 Chokoladeagar tilberedt med Columbia-agar
    • 2.2 Chokoladeagar tilberedt med GC-basagar (til gonokokker)
    • 2.3 Chokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton-agar
    • 2.4 Chokoladeagar tilberedt med Thayer Martin-agar
  • 3 Forberedelse
    • 3.1 Beregninger
    • 3.2 Vej og opløs
    • 3.3 Steriliser
    • 3.4 Blodaggregation
    • 3.5 En anden måde at forberede chokoladeagar på uden brug af blod
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Dette medium består af en næringsrig agarbase og opvarmet blod. Hæmolysen af ​​røde blodlegemer tilvejebringer faktor X (hemin) og faktor V (NAD), der er nødvendig for væksten af ​​nogle mikroorganismer, såsom slægten Haemophilus. Det er også meget nyttigt til isolering Neisserias sp.

Ligesom blodagar kan forskellige medier bruges som basisagar afhængigt af behovet. Blandt de anvendte medier er hjerneinfusion og trypticase-sojagar, selvom den mest anbefalede er Columbia-agar, Müeller Hinton, GC-agar og Thayer Martin-agar..

Nogle varianter af chokoladeagar inkluderer et kommercielt tilgængeligt befæstet supplement kaldet Isovitalex eller Polivitex..

Disse kosttilskud indeholder vitamin B12, L-glutamin, adenin, guaninhydrochlorid, p-aminobenzoesyre, nicotinamidadenindinucleotid (NAD), thiaminpyrophosphat, jernnitrat, thiaminhydrochlorid, cysteinhydrochlorid, L-cystin og glucose.

Det er vigtigt at bemærke, at chokoladeagar er mere beriget end blodagar, men det tillader ikke observation af hæmolysemønstre..

Ansøgninger

Kilde: pixnio.com. Forfatter:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, ph.d., Audra Marsh, USCDCP

Chokoladeagar tilberedt med Columbia-agar

Dette medium indeholder bugspytkirtelfordøjelse af kasein og hjerte, peptisk fordøjelse af kød, natriumchlorid, agar, gærekstrakt og majsstivelse. Det er også rig på vitaminer, mineraler og essentielle aminosyrer.

Denne opvarmede blodbase er ideel til isolering af bakterier af slægten Neisseria. På den anden side, hvis der suppleres et supplement til Brucella til mediet, kan den førnævnte mikroorganisme isoleres. Resultaterne forbedres ved hjælp af hesteblod.

Chokoladeagar tilberedt med GC-basagar (til gonokokker)

Dette medium indeholder peptoner, majsstivelse, monobasiske og dibasiske buffere, natriumchlorid og agar..

De fleste kommercielt fremstillede chokoladeagarpræsentationer kommer med denne base og indeholder ikke opvarmet blod, men i stedet en syntetisk blanding af hemin og et kemisk supplement af vækstfaktorer, vitaminer, mineraler, aminosyrer, faktor V og glukose..

Chokoladeagar tilberedt med Müeller Hinton-agar

Det bruges til at udføre antimikrobiel følsomhedstestning af krævende mikroorganismer, såsom Streptococcus pneumoniae ved hjælp af 5% opvarmet ramblod.

Det bruges også til den primære isolering af Neisserias og Haemophilus, men i det særlige tilfælde af isolering af Haemophilus Brug af hesteblod foretrækkes, da det er en rig kilde til faktor X og V.

På den anden side, hvis prøven, der skal sås, kommer fra et ikke-sterilt område, anbefales tilsætning af antibiotika for at hæmme områdets normale flora..

Eksempel på åndedrætsprøver, hvor der er mistanke om tilstedeværelse af bakterier af slægten Haemophilus Bacitracin bruges til at hæmme væksten af Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus og saprofytiske Neisserias.

I tilfælde af genital chancre prøver, hvor det mistænkes for Haemophilus ducreyi, En chokoladeagar fremstillet som følger er med succes anvendt: Müeller-Hinton-agar med 5% chokoladebestemt hesteblod, 1% Isovitalex-berigelse og 3 µg / ml vancomycin.

Chokoladeagar tilberedt med Thayer Martin-agar

Dette medium er specielt til isolering af Neisseria gonorrhoeae. Det skal indeholde antibiotika for at hæmme den ledsagende flora. Lamblod bruges.

Forberedelse

Du bør se indikationerne til forberedelse af den basagar, der skal bruges. De findes på bagsiden af ​​beholderen til det dehydratiserede medium. De beskriver generelt, hvor meget du skal veje for at forberede en liter kulturmedium.

I laboratoriet kan den nøjagtige mængde tilberedes, den kan være mere eller mindre end en liter.

Beregninger

En regel på tre bruges til at beregne, hvor meget der skal vejes for at forberede det ønskede volumen. Eksempel:

Hvis det for 1 liter er nødvendigt at veje 40 g, og laboratoriet kræver 800 ml, siges det:

1000 ml -40 gr

800 ml - X

Formlen vil være som følger:

X = 32 gr (mængde, der skal vejes i 800 ml).

Vej og opløs

Den nødvendige mængde vejes og anbringes i en kolbe med vandet.

Varm over moderat varme og bland forsigtigt med roterende bevægelser, indtil det dehydratiserede medium er helt opløst, lad det koge i 1 minut..

Sterilisere

Kolben anbringes i autoklaven for at sterilisere mediet ved 121 ° C i 20 minutter..

Blodaggregat

Når du forlader autoklaven, skal du lade den hvile, indtil medietemperaturen er mellem 56 og 70 ° C for at placere blodet og blandes, indtil mediet bliver brunt..

Hvis du tilføjer kosttilskud, er det tid til at gøre det. Bland derefter og server 20 ml til hver steril petriskål.

Hele proceduren skal udføres i en laminær strømningshætte eller omkring Bunsen-brænderen..

Lad det stå fast, og opbevar det omvendt i køleskabet.

En anden måde at forberede chokoladeagar på uden brug af blod

Basemediet fremstilles som beskrevet ovenfor, det kommercielt opnåede dehydratiserede hæmoglobin opløses og steriliseres i autoklaven..

Begge opløsninger får lov til at afkøle til 50 ° C, forbindes, og tilsætningen tilsættes. Bland under aseptiske forhold og server derefter i sterile petriskåle..

QA

Det er vigtigt, at blodet anbringes ved den angivne temperatur, da det er den ideelle til at lysere de røde blodlegemer og samtidig opretholde faktor V, som er temperaturfølsom..

Ingen bobler skal forblive på overfladen af ​​agaren. Fra hver batch på 100 plader skal en eller to plader inkuberes i ovnen ved 37 ° C i 24 timer for at kontrollere deres sterilitet..

For de bedste resultater bør chokoladeagar bruges kort efter tilberedning..

Kontrolbakteriestammer skal opbevares i laboratoriet for at evaluere effektiviteten af ​​det friske medium til vækst af de vigtigste kedelige mikroorganismer af klinisk betydning..

Referencer

  1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Argentina. Redaktionel Panamericana S.A.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, redaktionelt Panamericana S.A.
  4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Mulighed for at anvende GC-Biocen Agar basedyrkningsmedium i Microbiology Laboratory. Rev Cubana Med Trop,  2004; 56 (3): 237-238. Fås på: scielo.sld.
  5. Wikipedia-bidragydere. Chokoladeagar. Wikipedia, The Free Encyclopedia. 17. december 2018, 19:54 UTC. Tilgængelig på: en.wikipedia.org.

Endnu ingen kommentarer