Grundlag, klargøring og anvendelse af majsmelagar

3677
Egbert Haynes
Grundlag, klargøring og anvendelse af majsmelagar

Det majsmelagar er et fast dyrkningsmedium med lav ernæringskraft, nyttigt til underdyrkning af visse svampe og til demonstration af chlamydosporer i stammer af komplekset Candida albicans. På engelsk er det kendt som Corn Meal Agar.

Det konventionelle majsmelmedium har en meget enkel sammensætning, det indeholder majsmel, agar-agar og vand. På grund af dets lave ernæringsniveau er den ideel til brug til vedligeholdelse af svampestammer i moderate perioder, især sorte svampe..

A. Grafisk gengivelse af Candida albicans-komplekset på majsmelagar. B. Chlamydosporer af Candida albicans-komplekset set under mikroskopet dannet på majsmelagar. Kilde: A. GrahamColm [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)♡/By: CDC / Dr. William Kaplan, høflighed: Public Health Image Library.

Sporulation af komplekset Candida albicans det foretrækkes i dette medium, hvis 1% af Tween 80 tilsættes under fremstillingen af ​​agaren. Dannelsen af ​​chlamydosporer er karakteristisk for denne art og praktisk talt den eneste, der påvirker mennesker..

Der er andre arter, der danner chlamydosporer, men det er usandsynligt, at de påvirker mennesker, såsom Candida australis, til stede i pingvinsskidt, eller C. clausenii, som er en sjældent fundet saprofyt. Ligeledes undtagelsesvis arten C. stellatoidea Y C. tropicalis kunne danne dem.

På den anden side favoriserer tilsætning af glukose til majsmelmediet dannelsen af ​​pigmenter i stammer af Trichophytom rubrum.

Det er vigtigt at bemærke, at der er svampe, der ikke danner hyfer eller pseudohyfer i majsmelagar, såsom Cryptococcus neoformans, adskiller sig fra andre genrer.

Cornmeal agar kan være hjemmelavet i laboratoriet eller kommercielle medier kan også bruges..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Kommerciel majsmelagar
    • 2.2 Majsagar med Tween 80
    • 2.3 Majsmelagar med glukose
  • 3 Brug
    • 3.1 Såning
    • 3.2 Demonstration af chlamydosporer
    • 3.3 Vedligeholdelse af svampestammer
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Majsmel er substratet, agar er størkningsmidlet, og vand er opløsningsmidlet..

Cornmeal agar kan suppleres med tween 80 (sorbitan monooleat eller polysorbat polyester 80). Denne forbindelse reducerer mediet overfladespænding på grund af dets emulgerende effekt.

Det skaber også et fjendtligt miljø, der hæmmer overdreven cellemultiplikation og stimulerer væksten af ​​hyfer, hvilket også favoriserer produktionen af ​​chlamydosporer; sidstnævnte betragtede modstandsstrukturer. Denne struktur hjælper med at identificere arten af Candida albicans.

For sin del øger glukose i dette medium pigmentdannende kapacitet hos nogle svampe..

Det skal bemærkes, at det mellemstore majsmel ikke tjener til at demonstrere klamydosporer i cCandida albicans-kompleks.

Forberedelse

Hjemmelavet tilberedning af majsmelagar

Afvej 47 g gult majsmel og opløses i 500 ml destilleret vand. Varm op til 60 ºC under omrøring af præparatet i en periode på ca. 1 time. Filtrer derefter gennem et stykke gasbind og bomuld, eventuelt kan det filtreres igen ved at føre præparatet gennem et Whatman nr. 2 filterpapir.

Fyld volumen op til 1000 ml med destilleret vand. Tilsæt 17 g agar-agar, opvarm indtil opløst. Autoklaveres i 15 minutter ved 121 ºC.

Serveres i sterile petriskåle. Opbevares i køleskab.

Farven på det tilberedte medium er hvidlig med et klumpet udseende.

Hvis du vil tilberede majsmel med glukose til det ovenfor beskrevne præparat, skal du tilføje 10 g glukose.

Kommerciel majsmelagar

Vej 17 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Blandingen kan opvarmes og rystes forsigtigt for at opløses fuldstændigt. Steriliser i en autoklave ved 121 ºC ved 15 lb i 15 minutter.

Hæld i sterile petriskåle. Lad størkne. Vend og opbevar i køleskab indtil brug. Temperer inden brug.

PH-værdien skal være 6,0 ± 0,2 ved 25 ºC.

Agar af majsmel med Tween 80

For at overholde ISO 18416 skal majsmelagar fremstilles som følger:

Vej 65 gram pr. Liter og tilsæt 10 ml Tween 80. Varm og kog i et par minutter, indtil det er opløst, og pas på ikke at overophedes for meget. Steriliser ved 121 ºC i 15 minutter.

Agarmel med majs med glukose

For at forbedre den kromogene styrke i kolonier fra Trichophyton rubrum og skelne dem fra T. mentagrophytes, 0,2% glukose kan tilsættes til den originale formel. Du behøver ikke have Tween 80, da glukose hæmmer dannelsen af ​​klamydosporer.

Brug

Hovedsageligt er brugen af ​​majsmelagar beregnet til undersøgelse af Candida-stammer, hvilket hjælper dem med at identificere dem gennem den karakteristiske observation af chlamydosporer i albicans-arterne. Det vil sige, brugen af ​​denne agar tjener som en hjælpemetode til identifikation af disse gær..

Både saprofytiske og patogene arter kan udvikle sig på denne agar, men hver danner karakteristiske myceliale strukturer. For eksempel producerer arter af slægten Torulopsis ikke mycelium og reproducerer kun ved blastoconidia..

Ligeledes producerer Trichosporon- og Geotrichum-arter arthroconidia på majsmelagar, og det er undertiden svært at skelne mellem den ene og den anden..

Arthroconidia af slægten Geotrichum producerer en forlængelse af hyferne, der ligner en hockeyspil..

Produktion af pigmenter under anvendelse af majsmelagar suppleret med glukose er også nyttig til identifikation af Trichophytom rubrum.

Sået

Mistænkelige Candida-kolonier opnået i det primære dyrkningsmedium - Sabouraud agar - fra kliniske prøver, blandt andet kosmetik, jord subkultiveres på majsmelagar. Mediet podes og inkuberes ved 22 ° C i 24 til 48 timer. Inkubationstiden kan om nødvendigt forlænges.

Chlamydospore demonstration

Til dette formål skal majsmelagar med Tween 80 podes ved hjælp af Dalmau-teknikken. Denne metode består i at tage en del af den mistænkte koloni med platinahåndtaget og foretage tre parallelle snit i midten og holde håndtaget ved 45 °. Udskæringerne skal være adskilt med en afstand på 1 cm fra hinanden.

Derefter placeres et tidligere flammet dækkeobjekt på de striber, der er sået, så halvdelen er dækket, og den anden afdækkes.

Inkuber de såsædede plader ved 30 ° C i 48-72 timer og undersøg derefter mikroskopisk gennem dækglas..

Vedligeholdelse af svampestammer

Til vedligeholdelse af stammer opbevares de podede og dyrkede plader i et køleskab (4 til 8 ºC). På denne måde kan de vare flere uger og bruges til undervisning eller forskning..

QA

Til sterilitetskontrol inkuberes en plade uden inokulering ved stuetemperatur, det forventes, at der ikke vil være nogen vækst eller farveændring.

Til kvalitetskontrol kendte stammer såsom: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

De forventede resultater er delvis hæmning for S. aureus Y E coli. Mens der forventes tilfredsstillende vækst i resten af ​​stammerne.

Aspergillus niger vokser med sorte og sporulerede kolonier i en omtrentlig periode på 5 dages inkubation.

Candida albicans gærkolonier med chlamydosporeproduktion.

Saccharomyces cerevisiae producere store gærceller.

Begrænsninger

Der dannes et gult bundfald i bunden af ​​pladen, der ikke skal forveksles med kolonier..

Referencer

  1. Neogen Laboratories. Agar til majs. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com.
  2. Culture Media Microkit. Agar til majs. Tilgængelig på: Medioscultivo.com.
  3. Linares M, Solís F. Gæridentifikationsvejledning. Tilgængelig på: http: //www.guia.revibero.
  4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Folkesundhed, 2002; 19 (4): 206-208. Tilgængelig på: Scielo.com
  5. Casas-Rincón G. Generel mykologi. 1994. 2. udgave Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
  6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  8. Castillo E. Sammenlignende undersøgelse af nogle makro- og mikroskopiske metoder til isolering og genkendelse af slægten Candida. Colombiansk Rev. af farmaceutiske kemiske videnskaber. 1970; 3 (1): 33-57. Tilgængelig på: Ciencias.unal.edu.co

Endnu ingen kommentarer