Kartoffel dextrose agar basis, tilberedning og anvendelse

2247
Robert Johnston

Det kartoffel dextrose agar Det er et fast, ikke-selektivt næringsdyrkningsmedium. Bakterie- og svampearter kan vokse i det, men dets anvendelse er især indiceret til isolering af filamentøse svampe og gær. Det er også kendt som PDA-medium for det engelske udtryk Potato Dextrose Agar.

Det er især nyttigt til isolering af fytopatogene svampe, det vil sige dem, der påvirker planter. For at så prøverne fra inficerede grøntsager kan andre midler såsom Sabouraud agar eller malta-agar anvendes, men til rutinemæssig anvendelse foretrækkes kartoffel dextrose agar på grund af opnåelse af større sporulation..

Aspergillus niger og Sinemas på henholdsvis kartoffel dextrose agar. Kilde: Alextrevelian 006 på engelsk Wikipedia [Public domain] / Joselrojas [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)]

Det bruges også til optælling af svampekolonier i prøver af kosmetik, farmaceutiske produkter og nogle mejeriprodukter. Ligeledes er det velegnet til såning af prøver af hudafskrabninger på jagt efter dermatofytter, som vokser meget godt i dette medium og udvikler deres karakteristiske pigmenter..

Kartoffeldekstrosemedium er et meget simpelt og let medium at tilberede i laboratoriet. Indeholder, som navnet antyder, infusion af kartoffel, dextrose og agar-agar. Derudover kan hæmmende stoffer tilsættes for at forhindre bakterievækst og øge selektiviteten for svampearter..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 Forberedelse
    • 2.1-Hjemmelavet (ikke-kommerciel) tilberedning af kartoffel-dextrose-agar
    • 2.2-Kommerciel tilberedning af kartoffel dextrose agar
  • 3 anvendelser
    • 3.1 Fremgangsmåde til såning af planteprøver på kartoffel-dextrose-agar
    • 3.2 Fremgangsmåde til såning af hud-, hår- eller negleprøver på kartoffel-dextrose-agar
    • 3.3 Identifikationsprocedure
    • 3.4 Kolonitælling
    • 3.5 Vedligeholdelse af svampestammer
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Kartoffel dextrose agar er et dyrkningsmedium, der tilvejebringer de ernæringsmæssige elementer, der er nødvendige for udviklingen af ​​filamentøse svampe og gær..

Kombinationen af ​​infusion af kartoffel med glukose giver den perfekte energikilde til en tilfredsstillende vækst af svampe. Mens agar er den, der giver mediet konsistens.

Mediet i sig selv hæmmer ikke væksten af ​​bakterier, derfor er det et ikke-selektivt medium. For at gøre det selektivt har det brug for tilsætning af hæmmende stoffer som vinsyre eller antibiotika..

Forberedelse

-Hjemmelavet (ikke-kommerciel) tilberedning af kartoffel dextrose agar

Petriskål

Den fremstilles som følger:

For det første vaskes kartoflerne meget godt og fjerner den jord, de besidder. De skæres i tynde skiver med alt og skal. 200 g kartofler vejes og koges i en liter destilleret vand i en halv time.

Ved afslutningen af ​​tiden skal du filtrere eller filtrere al præparatet gennem en osteklud.

Den opnåede væske suppleres med destilleret vand op til en liter. Tilsæt 20 g agar-agar og 20 g dextrose til infusionen, bland godt og autoklaveres ved 121 ° C ved 15 punds tryk i 15 minutter..

Lad afkøle til 50 ° C og server i sterile petriskåle. De forberedte plader opbevares i køleskab..

Kiler

Kartoffel-dextrose-agarkiler kan også fremstilles..

I dette tilfælde placeres 12 til 15 ml af mediet inden rørene inden sterilisering i autoklaven, senere autoklaveres de, og når de forlades, ligger de på specielle understøtninger, indtil det størkner. Opbevares i køleskab.

Mediet forbliver ved en pH på 5,6 ± 0,2, men nogle laboratorier tilføjer 10% vinsyre for at sænke pH til 3,1 ± 0,1 for at hæmme bakterievækst..

I samme forstand foretrækker andre laboratorier at tilføje antibiotika for at gøre det selektivt til dyrkning af svampe og forhindre bakteriel udvikling..

-Kommerciel tilberedning af kartoffel dextrose agar

Vej 39 g af det kommercielt tilgængelige dehydratiserede medium op og opløses i en liter destilleret vand. Lad stå i 5 minutter.

Blandingen opvarmes under hyppig omrøring, indtil den er helt opløst. Derefter steriliseres den i en autoklave ved 121 ° C i 15 minutter..

Plader eller kiler kan fremstilles. Fortsæt som beskrevet ovenfor.

PH er 5,6 ± 0,2. Hvis pH-værdien på 3,1 ønskes, skal der tilsættes 14 ml steril 20% vinsyre før servering på pladerne..

Råmediet er beige og det tilberedte medium er lysegult med et let overskyet eller opaliserende udseende..

Ansøgninger

Fremgangsmåde til såning af planteprøver på kartoffeldextrose-agar

-Til plettede blade

Bladene skæres i stykker.

I et 50 cc glas med 50% alkohol placeres bladstykkerne (farvede og sunde stykker) for at desinficere overfladen i 20 til 30 sekunder. Smid alkoholen og tilsæt 20% natriumhypochlorit i 40 til 50 sekunder, hvis de er tynde blade, og øg tiden til 80 sekunder, hvis det er bark og træstammer.

Kassér natriumhypochlorit, og tag de desinficerede stykker med en steril pincet, og læg dem på overfladen af ​​mediet (maksimalt 10 stykker). Dato og inkuber ved 20-30 ° C.

-Til frugt og knolde

Hvis frugten er kødfuld, skal du åbne den frugt, der er ramt af svampen, og tage stykker med en steril skalpel, både fra de syge og sunde dele og placere dem på overfladen af ​​agaren..

Hvis frugten er citrus, såsom en citron eller en appelsin, skal den åbnes og dens frø sås.

Når overfladen af ​​frugten påvirkes, og sporer observeres, er det ideelle at bruge rivemetoden på pladen; Dette består i at røre sporerne med en steriliseret og afkølet "L" -formet spatel og derefter lave en zigzag, der sås 2-3 gange på agaren.

-Til korn

De desinficeres som beskrevet i bladene og placeres senere på agaren.

-Til grene og stilke

En skrabning af barken foretages, og senere stykker af den sunde og syge del tages og sås direkte på agaren.

De podede plader inkuberes aerobt ved 20-30 ° C i 72 timer.

Fremgangsmåde til såning af hud-, hår- eller negleprøver på kartoffel-dextrose-agar

Prøveudtagningen skal udføres ved hjælp af et nr. 11 skalpelblad, enten for at klippe berørt hår, hudvægte eller negle på jagt efter dermatofytter. Inden prøven tages, skal området desinficeres med 70% alkohol..

-Hudprøve

I skællende læsioner skal kanten af ​​læsionen skrabes, da svampen sandsynligvis findes der.

Ved ekssudative læsioner tages prøven med en tør eller våd vatpind. Så straks på kartoffel dextrose agar eller Sabouraud agar. Undgå transportmidler.

En anden prøvetagningsmetode er gennem Mariat og Adan Campos 'tæppefyrkantsteknik. I dette tilfælde gnides det berørte område 5 gange med et stykke steril uld til senere dyrkning..

Prøven kan placeres direkte i dyrkningsmediet.

-Hårprøve

Afhængig af patologien kan den berørte del afskæres eller rodfæstes. Placer prøven i dyrkningsmediet.

-Negleprøve

En bestemt del af det berørte negl kan skrabes eller skæres. Det afhænger af typen af ​​skade.

Skær prøven i 1 mm stykker inden såning for at øge sandsynligheden for svampens kontakt med dyrkningsmediet..

Identifikationsprocedure

Kolonierne opnået i pladen isoleres i rør indeholdende kartoffel-dextrose-agar for at udføre den makroskopiske undersøgelse af kolonierne (udseende, farve, konsistens, udviklingsgrad.

Den mikroskopiske undersøgelse (observation af strukturer og deres formationer) kan udføres ved mikrokulturer eller direkte observation under mikroskopet mellem lamina og lamella..

Kolonitælling

Dette medium kan også bruges til at bestemme den svampe- og gærbelastning, der findes i plante-, mad-, kosmetiske eller lægemiddelprøver. Til dette formål anvendes kartoffel dextrose-agar suppleret med antibiotika, såsom: (chloramphenicol, chlorotetracyclin eller begge dele).

Hæld 1 ml af prøven - fortrinsvis fortyndet - i en steril og tom petriskål, smelt derefter en prop kartoffeldextrose-agar og lad den afkøle til 45 ° C. Hæld på petriskålen og drej, indtil den er homogeniseret. Lad den stå, indtil den er solid.

Inkuber aerobt ved 20-25 ° C (forme) eller 30-32 ° C (gær) i 5 til 7 dage eller mere, afhængigt af hvilken type svamp, der søges, og typen af ​​prøve. To plader kan bruges til at inkubere i begge temperaturområder.

Optælling af svampekolonier i en fødevareprøve. Kartoffel dextrose agar suppleret med antibiotika. Kilde: Pxhere.com foto / 777267

Vedligeholdelse af svampestammer

Kartoffeldekstrosagar kan bruges til at opretholde levedygtige svampestammer i flere år.

For at gøre dette dyrkes svampen i kiler af kartoffel-dextrose-agar, og når svampen er vokset, er den dækket med mineralolie. Olien skal steriliseres i en autoklave i 45 minutter og have en viskositet på ca. 300 til 330 Saybolt. Olien skal være 1 til 2 cm over spidsen af ​​skråningen.

QA

Fra hver batch, der er fremstillet, skal der tages 1 eller 2 plader og inkuberes ved 25 ° C i 48 timer eller ved 20 ° C i 96 timer. En god sterilitetskontrol er en, hvor koloniudvikling ikke observeres..

Kendte eller certificerede kontrolstammer såsom:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Der forventes god vækst i alle tilfælde.

Referencer

  1. Britannia Laboratories. Glat agar kartoffel. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  2. Neogen Laboratories. Kartoffel Dextrose agar. Tilgængelig på: foodsafety.neogen.com
  3. Insumolab-laboratorium. Kartoffel dextrose agar. Fås på: insumolab.cl
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  5. Casas-Rincón G. Generel mykologi. 1994. 2. udgave Central University of Venezuela, Library Editions. Venezuela Caracas.
  6. Aceituno M. Evaluering af den mikrobiologiske kvalitet i øjenskygge, kompakt pulvertype fra et nationalt produktionslaboratorium, i henhold til referencemetoden Pharmacopea Usp 2005. Speciale for at kvalificere sig til titlen farmaceutisk kemiker. University of San Carlos i Guatemala.
  7. Cuétara M. Behandling af overfladeprøver. Ibero-American Journal of Mycology. 2007; pp. 1-12

Endnu ingen kommentarer