Salmonella-Shigella agar begrundelse, forberedelse og anvendelser

2000
Egbert Haynes

Det Salmonella-Shigella agar også kendt som SS-agar, det er et moderat selektivt og differentieret medium, der er specielt designet til isolering af enteropatogene bakterier af Salmonella- og Shigella-slægten, både fra miljømæssige og kliniske prøver..

SS agar har en kompleks sammensætning; Den består af kødekstrakt, pepton, lactose, galdesalte, natriumcitrat, natriumthiosulfat, jerncitrat, agar, neutralrød, lysegrøn og destilleret vand. På grund af sin store selektivitet kan der sås prøver med rigelig blandet flora..

SS-agar med kolonier af Salmonella sp. Kilde: Manurx27 [CC BY-SA 4.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/4.0)], fra Wikimedia Commons

I mikrobiologilaboratorier anvendes Salmonella-Shigella-mediet i vid udstrækning til at undersøge tilstedeværelsen af ​​Salmonella og Shigella i afføringsprøver i diarré, spildevand, drikkevand og mad..

Undertiden er det nødvendigt at bruge præberigelsesbuljong (lactosebuljong) og berigelsesbuljong (selenit cystinbuljong) til at genvinde stammer af Salmonella.

Disse trin er nødvendige, når der er mistanke om eksistensen af ​​Salmonella i en meget lav mængde, eller når stammen kan blive misbrugt ved processer til industriel produktion, hovedsageligt forarbejdede fødevarer. Det tilrådes også at berige afføringsprøver fra patienter, der er blevet behandlet med antibiotika..

Derefter kan den berigede bouillon podes på Salmonella-Shigella-agar og andre lignende medier, såsom xylose-agar, lysin-deoxycholat (XLD) og enterisk Hektoen-agar (HE)..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Næringsstyrke
    • 1.2 Konsistens
    • 1.3 Selektiv
    • 1.4 Differentiale
  • 2 Forberedelse
  • 3 Brug
  • 4 Begrænsninger
  • 5 Kvalitetskontrol
  • 6 Referencer

Basis

Hver komponent i Salmonella-Shigella-kulturmediet har en specifik funktion, og blandingen som helhed giver den de egenskaber, der karakteriserer den..

Nærende kraft

Kødekstraktet og peptonen (fordøjet med kasein og animalsk væv) tilvejebringer de nødvendige næringsstoffer (nitrogen, kulstof og vitaminer) til udvikling af mikroorganismer, der er i stand til at tolerere resten af ​​komponenterne..

Konsistens

Agar-agar er ansvarlig for at tilvejebringe den faste konsistens til mediet.

Selektiv

Dette medium er meget selektivt, fordi det indeholder galdesalte, natriumcitrat og lysegrøn. Derfor hæmmer det væksten af ​​alle Gram-positive bakterier og de fleste Gram-negative baciller, herunder nogle coliforme stoffer..

Mens bakterier af slægten Salmonella og nogle stammer af Shigella understøtter disse forbindelser.

Salmonella-slægten er hovedsagelig meget resistent over for galdesalte, så meget at de er i stand til at leve i galdeblæren hos nogle bærerpatienter, der konstant kaster bakterierne i deres afføring..

Differentiale

Lactose er det fermenterbare kulhydrat, der hjælper med at differentiere lactosegærende stammer fra ikke-gærende. Denne egenskab fremgår af tilstedeværelsen af ​​pH-indikatoren, som i dette medium er phenolrød.

Lactosegærende stammer giver røde kolonier, mens ikke-gærende stammer er farveløse. Denne egenskab er vigtig, da Salmonella og Shigella ikke gærer lactose..

På den anden side indeholder dette medium natriumthiosulfat som en kilde til sulfid og jerncitrat som en kilde til jern. Begge forbindelser er i stand til at differentiere bakterier, der er i stand til at producere hydrogensulfid. Disse reagerer for at danne et synligt, uopløseligt sort jernsulfid bundfald..

Denne egenskab findes i nogle stammer af slægten Salmonella. Normalt er deres kolonier flade farveløse med en sort prik i midten af ​​den. Resten af ​​Salmonellas producerer ikke HtoS og udvikle sig som farveløse kolonier.

På den anden side er kolonier af slægten Shigella flade farveløse uden at blive mørke..

Forberedelse

Dette medium er meget simpelt at forberede.

Afvej 63 g af det dehydrerede kommercielle medium og opløses i en liter destilleret vand. Varm opløsningen og omrør. Blandingen kan koge i op til minutter.

Dette medium må ikke autoklaveres. Efter opløsning serveres den direkte på enkelt- eller dobbeltsterile plader..

Når de størkner, arrangeres de omvendt i plaketter og opbevares i køleskab (2-8 ° C) indtil brug..

Mediet efter tilberedning skal være ved pH 7,2 ± 0,2 og med en orange-rød farve..

Det er vigtigt at lade pladerne varme op, inden prøverne sås ud. Den originale prøve kan sås direkte, udlede materiale på en del af agaren og derefter stryge ved udmattelse derfra.

I tilfælde af brug af beriget bouillon skal du passere en del af selenitbuljongen og så med en drigalski-spatel..

Inkuber ved 37 ° C i 24 timer i aerobiose.

Det skal tages i betragtning, at antallet af gram, der skal vejes, og mediets endelige pH kan variere fra et kommercielt hus til et andet. Den midterste base bringer altid indikationerne til dens forberedelse.

Brug

Det bruges ofte i afføringskulturanalyse og i den mikrobiologiske undersøgelse af spildevand, drikkevand og fødevareprøver..

Ofte fremstilles dobbeltplader, på den ene side placeres Salmonella-Shigella-agar og på den anden XLD-agar.

Begrænsninger

-Nogle Shigella-stammer vokser ikke på dette medium. Derfor anbefales det ikke til primær isolering af denne slægt..

-Ikke alle gennemsigtige kolonier med et sort center er tegn på Salmonella; Biokemiske tests skal udføres for at foretage en korrekt identifikation, da kolonierne af nogle Proteus-stammer ikke skelnes fra Salmonella.

-Det dehydratiserede medium skal tages hånd om, når det udsættes for miljøet, da det er meget hygroskopisk. Derfor skal den opbevares i et tørt og godt lukket miljø. Åben i meget korte perioder.

-Over tid kan galdesaltene i mediet udfældes og danne et matlignende billede inde i agaren, men dette påvirker ikke resultaterne..

-Nogle Shigella-stammer kan langsomt fermentere lactose.

QA

For at bevise, at mediet fungerer korrekt, anbefales det at plante kendte eller certificerede kontrolstammer og observere, om væksten opfylder de forventede egenskaber..

Til dette kan du bruge stammer af E. coli, Enterobacter sp, Klebsiella pneumoniae, Shigella flexneri, Salmonella typhimurium eller Enterococcus faecalis.

De forventede resultater er:

Escherichia coli --lyserøde konvekse kolonier.

Enterobacter og Klebsiella- store kolonier og røde eller lyserøde slimhinder.

Shigella flexneri --klare eller farveløse flade kolonier.

Salmonella typhimurium - farveløse kolonier med sort center.

Enterococcus faecalis-- total hæmning.

Referencer

  1. Difco Francisco Soria Melguizo Laboratories. Salmonella-Shigella agar. 2009. Tilgængelig på: f-soria.es
  2. BD-laboratorium. BD Salmonella-Shigella Agar. 2013. Tilgængelig på: bd.com
  3. Britannia Laboratories. Salmonella-Shigella Agar. 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  4. Valtek diagnostik. Salmonella-Shigella Agar (SS Agar). Tilgængelig på: andinamedica.com
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Endnu ingen kommentarer