Blood agar foundation, anvendelser og præparat

2092
Egbert Haynes

Det blodagar det er et beriget, differentieret, men ikke-selektivt fast dyrkningsmedium. Det bruges til genopretning og vækst af en lang række mikroorganismer fra kliniske prøver eller til subkulturer..

Klassisk blodagar bør medtages til såning af de fleste kliniske prøver, der modtages i laboratoriet; undtagen afføringsprøver, hvor det ikke er nyttigt, medmindre det er forberedt med visse ændringer.

Blodagarplade

Dette dyrkningsmedium består grundlæggende af en beriget basagar og 5% blod. Agarbasen kan variere alt efter behovene, men den vil hovedsagelig bestå af blandt andet peptoner, aminosyrer, vitaminer, kødekstrakt, natriumchlorid, agar..

Med hensyn til blod er det normalt nødvendigt at have kontakt med et vivarium for at få blod fra dyr, såsom får, kanin eller hest. Dette er dog ikke altid muligt, og der anvendes nogle gange humant blod..

Blodagarmedium kan tilberedes i laboratoriet eller kan købes færdigt fra dedikerede virksomheder. Fremstillingen af ​​dette medium er en af ​​de mest sarte, enhver skødesløshed i dets forberedelse vil resultere i en forurenet batch.

Derfor skal der tages alle mulige forholdsregler, og i sidste ende skal der udføres en kvalitetskontrol, der inkuberer ved 37 ° C 1 plade for hver 100, der er klargjort.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
  • 2 anvendelser
    • 2.1 Valg af blodtype
    • 2.2 Valg af basagar-type
    • 2.3 Anvendelse af blodagar ifølge det basismedium, der anvendes til dets fremstilling
  • 3 Forberedelse
    • 3.1 Vej og opløs
    • 3.2 Steriliser
    • 3.3 Blodaggregation
    • 3.4 Hæld i petriskåle
  • 4 Referencer

Basis

Staphylococcus aureus dyrket på blodagar. Nathan Reading på Flickr Nathan R. på twitter [CC BY 2.0 (https://creativecommons.org/licenses/by/2.0)], via Wikimedia Commons
Det er allerede blevet nævnt, at blodagar har karakteristikken ved at være et beriget, differentieret og ikke-selektivt medium. Grundlaget for hver af disse egenskaber forklares nedenfor..

Blodagar er et beriget medium, fordi det indeholder 5-10% blod på en agarbase som dets vigtigste tilsætningsstof. Begge forbindelser indeholder mange næringsstoffer, og denne egenskab gør det muligt for de fleste dyrkbare bakterier at vokse i det..

Denne vækst sker uden begrænsning; af denne grund er det ikke-selektivt. Men hvis forbindelser tilsættes til dette medium, der forhindrer væksten af ​​nogle mikroorganismer og favoriserer andres, bliver det selektivt. Dette er tilfældet, hvis visse typer antibiotika eller svampedræbende stoffer tilsættes.

Ligeledes er blodagar et differentieret medium, da det giver os mulighed for at skelne mellem 3 typer bakterier: beta-hæmolytisk, alfa-hæmolytisk og gamma-hæmolytisk..

Beta-hæmolytika er dem, der har evnen til at lysere eller bryde røde blodlegemer fuldstændigt og danne en klar halo omkring kolonierne, derfor producerer de ß eller ß-hæmolyse, og mikroorganismerne kaldes ß-hæmolytika..

Eksempler på ß-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pyogenes Y Streptococcus agalactiae.

Alpha-hæmolytika er dem, der udfører delvis hæmolyse, hvor hæmoglobin oxideres til methemoglobin, hvilket skaber en grønlig farve omkring kolonierne. Dette fænomen er kendt som α-hæmolyse eller α-hæmolyse, og bakterier klassificeres som α-hæmolytiske..

Eksempler på α-hæmolytiske bakterier er Streptococcus pneumoniae Streptococcus af gruppen viridans.

Endelig er der de såkaldte gamma-hæmolytiske eller ikke-hæmolytiske bakterier. Disse vokser på agaren uden at skabe ændringer på den, en effekt kendt som γ-hæmolyse, og mikroorganismerne er γ-hæmolytiske.

Eksempel på γ-hæmolytiske bakterier: nogle stammer fra gruppe D Streptococcus (Streptococcus bovis og Enterococcus faecalis).

Ansøgninger

Blodagar-kulturmediet er et af de mest almindeligt anvendte i mikrobiologilaboratoriet..

Blandt de mikroorganismer, der er i stand til at vokse i blodagarmediet, er: strenge aerobe, fakultative, mikroaerofile, anaerobe, Gram-positive eller Gram-negative bakterier, hurtigt voksende eller langsomt voksende bakterier.

Nogle ernæringsmæssigt krævende eller krævende bakterier vokser også såvel som svampe og gær. Ligeledes er det nyttigt at udføre subkulturer eller genaktivere stammer, der er metabolisk meget svage..

Valget af blodtype og basagar vil dog variere afhængigt af den sandsynlige mikroorganisme, der mistænkes for at komme sig, og den anvendelse, der gives til pladen (kultur eller antibiogram)..

Valg af blodtype

Blod kan være lam, kanin, hest eller menneske.

Det mest anbefalede er lammeblod med nogle undtagelser. For eksempel at isolere Haemophilus-arter, hvor det anbefalede blod er hest eller kaninblod, da lamblod har enzymer, der hæmmer faktor V.

Den mindst anbefalede er menneskelig, men den er den mest anvendte, måske fordi den er nemmest at få. 

Blodet skal defibrineres, fås uden nogen form for tilsætningsstof og fra sunde dyr. Ved brug af humant blod skal der tages flere faktorer i betragtning:

Hvis blodet kommer fra personer, der har haft bakterielle infektioner, vil de have specifikke antistoffer. Under disse betingelser vil væksten af ​​nogle bakterier sandsynligvis blive hæmmet..

Hvis det fås fra blodbanken, indeholder det citrat, og visse bakterier vokser muligvis ikke i dets tilstedeværelse. På den anden side, hvis blodet kommer fra patienter, der tager antibiotika, kan væksten af ​​modtagelige bakterier hæmmes..

Og hvis blodet kommer fra en diabetesperson, forstyrrer overskydende glukose den korrekte udvikling af hæmolysemønstre.

Valg af basagar-type

Basagar anvendt til fremstilling af blodagar kan være meget bred. Blandt dem er: næringsagar, hjerneinfusionsagar, trypticase-sojagar, Müeller Hinton-agar, Thayer Martin-agar, Columbia-agar, Brucella-agar, Campylobacter-agar osv..

Anvendelse af blodagar ifølge det basismedium, der anvendes til dets fremstilling

Næringsagar

Denne base er den mindst anvendte, da den hovedsagelig vil dyrke ikke-krævende bakterier, såsom enteriske baciller., Pseudomonas sp, S. aureus, Bacillus sp, blandt andre. Det anbefales ikke at isolere Streptococcus.

Hjerneinfusionsagar (BHI)

Det er en af ​​de mest anvendte som en blodagarbase, fordi den har de nødvendige næringsstoffer til vækst af de fleste bakterier, herunder Streptococcus sp og andre krævende bakterier. Selvom det ikke er egnet til at observere hæmolysemønstre.

Lamblod bruges generelt med denne base.

Blodarvarianter kan også fremstilles, hvor andre forbindelser tilsættes for at isolere visse mikroorganismer. F.eks. Tjener hjerneinfusionsagar suppleret med kaninblod, cystin og glucose til at isolere Francisella tularensis.

Mens det med cystintellurit er nyttigt til isolering af Corynebacterium diphteriae. Humant eller lamblod kan anvendes.

Med den første beta-hæmolyse ses som en smal glorie, mens med den anden vil glansen være meget bredere.

Ligeledes bruges denne base sammen med bacitracin, majsstivelse, hesteblod og andre berigelsestilskud (IsoVitaleX) til isolering af slægten Haemophilus sp fra åndedrætsprøver.

Hvis kombinationen af ​​antibiotika chloramphenicol - gentamicin eller penicillin - streptomycin med hesteblod tilføjes, er den også ideel til isolering af krævende patogene svampe, selv med et højere udbytte end Sabouraud glucose agar. Det er især nyttigt at isolere Histoplasma capsulatum.

Trypticase soja agar

Denne base er den mest anbefalede til en bedre observation af hæmolysemønsteret og til udførelse af diagnostiske tests såsom optoquin taxa og bacitracin. Det er den klassiske blodagar, der bruges rutinemæssigt.

Med denne base kan du også forberede den specielle blodagar til Corynebacterium diphteriae, med cystintellurit Y lamblod.

Ligeledes er kombinationen af ​​denne agar med lammets blod plus kanamycin-vancomycin ideel til vækst af anaerober, især Bacteroides sp.

Müeller Hinton agar

Denne base suppleret med blod bruges til at udføre antibiogram af krævende mikroorganismer, såsom Streptococcus sp.

Det er også nyttigt til isolering af bakterier såsom Legionella pneumophila.

Thayer Martin Agar

Dette medium er ideelt som en base for blodagar, når der er mistanke om slægten Neisseria, især Neisseria meningitidis, som N. gonorrhoeae vokser ikke på blodagar.

Det bruges også til at udføre følsomhedstest til Neisseria meningitidis.

Columbia agar

Denne base er fremragende til såning af gastriske biopsiprøver til Helicobacter pylori.

Mediet fremstilles ved tilsætning af 7% lamblod defibrineret med antibiotika (vancomycin, trimethoprim, amphotericin B og cefsulodin) for at begrænse væksten af ​​andre typer bakterier, der kan være til stede..

Den samme base suppleret med humant eller lamblod, nalidixinsyre og colistin er nyttig at isolere Gardnerella vaginalis. Også ideel til vurdering af antimikrobiel følsomhed over for antibiotika af samme mikroorganisme.

Derudover bruges det til fremstilling af blodagar til dyrkning af anaerober, tilsætning af aminoglykosider og vancomycin..

Denne base giver dig mulighed for at observere hæmolysemønstrene korrekt.

Brucella agar

Dette medium, der anvendes som base for blodagar sammen med tilsætning af K-vitamin, er ideelt til dyrkning af anaerobe bakterier. I dette tilfælde anbefales brugen af ​​lammeblod..

Campylobacter agar

Campylobacter-agar suppleret med 5% fårblod og 5 antibiotika (cephalothin, amphotericin B, trimethoprim, polymyxin B og vancomycin) er det medium, der anvendes til at isolere Campylobacter jejuni i afføringsprøver.

Forberedelse

Hvert kommercielt hus bringer instruktionerne til at forberede en liter kulturmedium på bagsiden af ​​beholderen. De tilsvarende beregninger kan foretages for at forberede den ønskede mængde afhængigt af den valgte basagar.

Vej og opløs

Basagaren er dehydreret (pulver), derfor skal den opløses i destilleret vand justeret til pH 7,3.

Den af ​​den valgte basagar angivne mængde vejes og opløses i den tilsvarende mængde vand i en kolbe, opvarmes derefter over moderat varme og blandes med roterende bevægelser, indtil alt pulveret er opløst..

Sterilisere

Når det er opløst, steriliseres i en autoklave ved 121 ° C i 20 minutter.

Blodaggregat

Når man forlader autoklaven, får kolben lov til at afkøle, indtil temperaturen svinger mellem 40 og 50 ° C; Det er en temperatur, som den menneskelige hud understøtter, og på samme tid er agaren endnu ikke størknet.

For at gøre dette berøres kolben med hånden, og hvis varmen er tålelig, er det den ideelle temperatur at tilføje den tilsvarende mængde defibrineret blod (50 ml for hver liter agar). Bland forsigtigt for at homogenisere.

Passagen af ​​blodaggregation er afgørende, for hvis det gøres, når mediet er meget varmt, vil de røde blodlegemer nedbrydes, og mediet vil ikke tjene til at observere hæmolyse.

Hvis der tilsættes for koldt, dannes der klumper, og medieoverfladen er ikke glat for at give korrekt score..

Hæld i petriskåle

Serveres i sterile petriskåle umiddelbart efter homogenisering af blodet. Ca. 20 ml hældes i hver petriskål. Denne procedure udføres i en laminær strømningshætte eller i nærheden af ​​brænderen.

Når der serveres blodagar i petriskålene, skal der ikke være luftbobler på pladens overflade. Hvis dette sker, føres flammen til Bunsen-brænderen hurtigt over pladen for at fjerne dem..

Pladerne får størkne og opbevares i køleskab (2-8 ° C) inverteret indtil brug. Før du bruger blodagarpladerne, skal de hærdes (får lov til at nå stuetemperatur) for at kunne sås..

De forberedte plader varer ca. 1 uge.

Referencer

  1. Bayona M. Mikrobiologiske forhold til dyrkning af Helicobacter pylori. Præsten oberst Gastroenterol 2013; 28 (2): 94-99
  2. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Praktisk klinisk mikrobiologi. University of Cadiz, 2. udgave. UCA Publications Service.
  3. "Blodagar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. dec 2018, 14:55 UTC. 27. dec 2018, 01:49 da.wikipedia.org.
  4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Argentina. Redaktionel Panamericana S.A.
  5. CEDIVET Laboratory Veterinary Diagnostic Center. Guatemala. Tilgængelig på: trensa.com.
  6.  Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, redaktionelt Panamericana S.A.

Endnu ingen kommentarer