TSI agar fundament, forberedelse og anvendelser

2556
Egbert Haynes

Det TSI agar o Triple Sugar Iron Agar er et fast dyrkningsmedium, der fungerer som en biokemisk test, der styrer den første identifikation af gramnegative baciller. Den er baseret på at vise gæringen af ​​det tilstedeværende sukker og produktionen af ​​hydrogensulfid og gas.

Dens sammensætning og basis svarer meget til Kligler-jerntesten med den forskel, at sidstnævnte kun indeholder glucose og lactose. På den anden side indeholder - som navnet antyder - tredobbelt sukkerjernagar tre fermenterbare kulhydrater: glucose, lactose og saccharose..

Billeder af TSI-testen med forskellige mikroorganismer A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Kilde: Witmadrid [Public domain], fra Wikimedia Commons

Derudover har TSI-mediet fire proteinderivater, der gør det til en meget nærende agar: gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton. Indeholder også jernholdigt ammoniumsulfat, natriumthiosulfat, natriumchlorid, phenolrødt og agar.

En mikroorganismes manglende evne til at fermentere den glukose, der er til stede i mediet, udelukker straks den fra at tilhøre Enterobacteriaceae-familien. Derfor er denne test afgørende for at afgøre, hvilken identifikationsrute der skal tages for at bestemme slægten og arten..

Hvert laboratorium beslutter, om de skal arbejde med TSI-agar eller med Kligler-jernagar..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Natriumchlorid og agar
    • 1,2 pH-indikator (phenolrød)
    • 1.3 Proteinderivater (gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton)
    • 1.4 Fermentering af kulhydrater (glucose, lactose og saccharose)
    • 1.5 Gasproduktion
    • 1.6 Natriumthiosulfat og jernholdigt ammoniumsulfat (hydrogensulfidproduktion)
  • 2 Forberedelse
  • 3 anvendelser
  • 4 Sået
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Hver af forbindelserne opfylder en funktion inden i mediet.

Natriumchlorid og agar

Natriumchlorid er nødvendigt for at opretholde mediumets osmotiske balance. Mens agaren giver den en solid konsistens.

PH-indikator (phenolrød)

PH i det fremstillede medium er afbalanceret ved 7,3, og pH-indikatoren (phenolrød) bliver gul under 6,8. Dette betyder, at små mængder syrer, der produceres ved gæring af sukker, vil omdanne mediet fra rød-orange til gul..

Hvis der ikke sker fermentering, vil der være alkalisering af mediet ved hjælp af peptoner, der bliver fra rød-orange til stærk rød.

Proteinderivater (gærekstrakt, kødekstrakt, pepton og proteosepepton)

Når bakterier metaboliserer de proteiner, der er til stede i TSI-agar, produceres der aminer, der alkaliserer mediet (hovedsageligt på skrå niveau), fordi reaktionen kræver ilt. Aminer gør rammen lyserød.

Men dette vil afhænge af bakteriens evne til at fermentere kulhydrater eller ej..

Fermentering af kulhydrater (glucose, lactose og saccharose)

Undersøgelsen af ​​gæring af sukker kan give flere billeder, og hver enkelt fortolkes forskelligt. Testfortolkningen opdeler mikroorganismer i 3 kategorier: glukose-ikke-fermentorer, lactose-ikke-fermenteringsmidler og lactose / saccharose-fermenteringsmidler..

Det skal bemærkes, at mængden af ​​glucose i mediet er begrænset, mens koncentrationen af ​​lactose og saccharose er 10 gange højere..

Bakterier af Enterobacteriaceae-familien og andre glukosefermenterende mikroorganismer begynder at fermentere dette sukker, da det er det enkleste kulhydrat til energi..

På den anden side er lactose og saccharose komplekse kulhydrater, der skal nedbrydes og omdannes til glucose for at de kan komme ind i Embden-Meyerhof-cyklusen..

-Ikke-glukosefermenterende mikroorganismer

Når den inokulerede mikroorganisme ikke er i stand til at fermentere glukose, er det meget mindre i stand til at fermentere andre kulhydrater. Derfor dannes der ingen syrer her, men der er dannelse af aminer i skråningen på grund af brugen af ​​peptoner.

I dette tilfælde bliver rammen til en stærkere rød, og bunden af ​​røret kan forblive uændret, eller det kan også være alkaliseret, så hele røret bliver rødt..

Fortolkning: K / K betyder alkalisk skrå / alkalisk eller neutral bund

På billedet i begyndelsen af ​​artiklen se billedet af rør D.

Dette resultat indikerer, at mikroorganismen ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien..

-Ikke-fermenterende mikroorganismer i lactose / saccharose

Hvis bakterierne er i stand til at fermentere glucose, men ikke lactose eller saccharose, vil følgende ske:

Bakterierne vil forbruge al den tilstedeværende glukose efter ca. 6 til 8 timer og være i stand til at forsure både skråningen og blokken; agaren bliver helt gul. Men når glukosen er udtømt og manglende evne til at bruge lactose og saccharose, vil bakterierne begynde metabolismen af ​​proteiner.

Denne reaktion har brug for ilt, derfor forekommer nedbrydningen af ​​peptoner på overfladen (skrå). De producerede aminer alkaliserer rammen, der bliver gul til rød. Denne reaktion fremgår efter 18 til 24 timers inkubation..

Fortolkning: K / A betyder alkalisk affasning og syrevad.

På billedet i begyndelsen af ​​artiklen se billedet af rør B.

-Lactose / saccharose-fermenterende mikroorganismer

Mikroorganismer, der er i stand til at fermentere lactose og saccharose, kan åbenbart fermentere glucose. Efter at den mindste mængde glucose, der er til stede i mediet, er opbrugt, begynder det dannede pyruvat at metabolisere til dannelse af syrer gennem den aerobe Krebs-cyklus, og i perioden fra 8 til 12 timer vil alt mediet være gult.

Hvis bakterierne er i stand til at nedbryde lactose eller saccharose, vil der fortsat blive produceret syrer, og efter 18 til 24 timer vil hele røret - skrå og prop - fortsætte med at gulne.

Det skal bemærkes, at brugen af ​​glukose udføres på to måder: den ene aerobt ved skråningen af ​​røret og den anden anaerobisk i bunden af ​​røret..

Fortolkning: A / A betyder syre skrå / syre bund. Kan eller måske ikke præsentere gas.

På billedet i begyndelsen af ​​artiklen se billedet af rør A.

Gasproduktion

Nogle mikroorganismer er i stand til at producere gas under gæring af sukker. Gassen fremgår af røret ved det tryk, den udøver inden i agaren. Trykket forårsager dannelse af bobler eller forskydning af agaren. Undertiden kan gasdannelsen sprænge mediet.

Det er vigtigt, at punkteringen foretages rent gennem midten af ​​agaren, når den sås ud af TSI-mediet, indtil den når bunden. Hvis punkteringen omdirigeres mod rørets vægge, kan det forårsage falske positive effekter i produktionen af ​​gassen, da den vil flygte gennem den forkert dannede kanal.

Gasproduktionen såvel som reaktionerne, der forekommer i agar-skråningen, har brug for ilt, derfor anbefales det, at røret dækkes med en bomuldspropp, og hvis der anvendes en bakelithætte, skal den ikke være helt tæt..

Gasproduktion rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).

Gasdannelsesmønstre. Kilde: Ordning lavet af MSc. Marielsa Gil. Billedkilde: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe [CC BY-SA 3.0 (https://creativecommons.org/licenses/by-sa/3.0)], via Wikimedia Commons

Natriumthiosulfat og jernholdigt ammoniumsulfat (produktion af hydrogensulfid)

Bakterier, der er i stand til at producere hydrogensulfid (farveløs gas) optager svovlet fra natriumthiosulfat til stede i mediet. Når HtoS reagerer med jernholdigt ammoniumsulfat og producerer jernsulfid (klart synligt sort bundfald).

Produktionen af ​​HtoS rapporteres som positiv (+) eller negativ (-).

På billedet i begyndelsen af ​​artiklen se billedet af rør C.

Forberedelse

Vej 62,5 g af dehydreret tredobbelt sukkerjernagar (TSI) medium og opløses i en liter destilleret vand..

Varm op, indtil agaren er helt opløst. Kog i et minut, omrør ofte. Fordel 4 ml af mediet i 13/100 reagensglas med bomuldshætter.

Steriliseres i en autoklav ved 121 ° C i 15 minutter. Fjern fra autoklaven, og lad den hvile i en vinkel. Man skal være opmærksom på, at både bunden og rammen har samme afstand.

Opbevares i køleskab 2-8 ° C. Lad det varme op, før bakteriestammen sås.

Farven på det dehydratiserede medium er lysebeige, og det tilberedte medium er rød-orange.

Den endelige pH i det fremstillede medium er 7,3 ± 0,2.

Ansøgninger

TSI-testen bruges i vid udstrækning på mikrobiologisk laboratorium. Denne test er vigtig for at styre den type test, der skal anvendes for at nå identifikationen af ​​slægten og arten. Dens gode udførelse og fortolkning kan spare materiale og arbejde.

Hvis resultatet er en TSI K / K, og cytochromoxidasetesten er positiv, er det kendt, at tests skal anvendes til identifikation af ikke-fermenterende gramnegative stænger, såsom Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, blandt andre slægter. Hvis det er oxidase-negativt, er det orienteret mod slægterne Acinetobacter, Stenotrophomonas osv..

På den anden side, hvis der opnås en TSI A / A eller K / A, og cytochromoxidasetesten er negativ, jo flere nitrater reduceres til nitrit, vil vi være sikre på, at det er en mikroorganisme, der hører til Enterobacteriaceae-familien. I dette tilfælde vil identifikationsvejen fokusere på specifikke tests for denne gruppe af bakterier..

På den anden side, hvis der opnås et K / A- eller A / A-billede, og cytochromoxidasetesten er positiv, vil de supplerende tests, der skal samles, være rettet mod identifikation af gærende stammer, der ikke hører til Enterobacteriaceae-familien, såsom som: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio og Pasteurella.

En TSI med hydrogensulfid, oxidase-negativ, vil lede identifikationen af ​​følgende slægter af Enterobacteriaceae-familien: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella eller Salmonella.

En TSI med lidt eller moderat hydrogensulfid i den alkaliske skråning med en alkalisk baggrund og en positiv oxidase vil lede brugen af ​​test til identifikation af ikke-gærende Gram-negative baciller, der producerer HtoJa, ligesom Shewanella putrefaciens.

Endelig kan TSI'en bruges til undersøgelse af hydrogensulfidproduktion i grampositive baciller, især når det mistænkes for Erysipelothrix rhusiopathiae.

Sået

TSI-mediet skal podes med rene kolonier, isoleret i primære eller selektive kulturer. Hvis kolonien tages fra selektive medier, der blev podet med prøver med blandet flora, skal man være opmærksom på kun at tage fra overfladen, da levedygtige stammer, der er inhiberet i dette medium, kan eksistere i den nedre del af kolonien..

Derfor bør sløjfen aldrig afkøles på et selektivt medium for senere at tage kolonien og pode et TSI-medium..

Såningen udføres med en lige løkke eller nål. Der foretages en punktering, idet man sørger for, at den er gennem midten af ​​midten, indtil den når bunden, og så er såningen færdig ved at inokulere overfladen i en zigzagform. Foretag ikke to punkteringer.

Inkuber ved 37 ° C i aerobiose i 18-24 timer. Fortolk i denne tid hverken før eller efter.

Begrænsninger

TSI-testen skal læses inden for 18 til 24 timer efter inkubation. En læsning før dette tidspunkt kan give en falsk positiv for A / A-gæring. Mens en aflæsning efter dette tidspunkt kan give anledning til et falskt negativt billede af en ikke-fermenter på grund af forbruget af peptoner, der alkaliserer mediet..

Referencer

  1. Mac Faddin J. (2003). Biokemiske tests til identifikation af bakterier af klinisk betydning. 3. udgave Redaktionel Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
  2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  4. "TSI-agar." Wikipedia, The Free Encyclopedia. 10. juli 2018, 08:09 UTC. 10. februar 2019, 03:33 Tilgængelig på: es.wikipedia.org
  5. Britannia Laboratories. TSI-agar (tredobbelt sukkerjernagar). 2015.Tilgængelig på: britanialab.com
  6. BD Laboratories. Triple sukkerjernagar (TSI-agar). 2003. Tilgængelig på: bd.com

Endnu ingen kommentarer