Strålende grøn agarfundament, forberedelse og anvendelser

2526
Anthony Golden

Det lysegrøn agar Det er et fast dyrkningsmedium med en høj grad af selektivitet. Det bruges udelukkende til isolering af stammer af slægten Salmonella, men der er nogle undtagelser, såsom typhi og paratyphi arter, der ikke vokser i dette medium..

Søgningen efter slægten Salmonella er hyppig i afføring, vand eller madprøver. I denne forstand kan dette medium være meget nyttigt. Denne agar blev oprettet i 1925 af Kristensen, Lester og Jurgens, senere blev den modificeret af Kauffmann.

Lysegrøn agar. Fermenterende og ikke-fermenterende kolonier. Kilde: M J Richardson / Invisible Worlds udstilling - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Creative Commons License.

Det består af pluripeptoner fra peptisk fordøjelse af animalsk væv og pancreasfordøjelse af kasein, det indeholder også gærekstrakt, natriumchlorid, lactose, saccharose, phenolrød, lysegrøn og agar-agar..

Det er kendetegnet ved at være et temmelig ugæstfrit miljø for de fleste bakterier, hvilket favoriserer væksten af ​​Salmonella, men nogle coliformer er i stand til at leve i den og udvikle sig svagt.

Det er vigtigt at bemærke, at slægten Shigella ikke vokser i dette miljø, og det gør det heller ikke Salmonella typhimurium, ingen af ​​dem Salmonella paratyphi. Derfor, hvis du vil isolere disse mikroorganismer, skal du bruge andre medier, såsom XLD agar, blandt andre..

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Lysegrøn agar
    • 1.2 Varianter af lysegrøn agar (BGA)
  • 2 Forberedelse
  • 3 Anvendelser / applikationer
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Referencer

Basis

Lysegrøn agar

Hver af de komponenter, der udgør mediet, opfylder en bestemt funktion, der bestemmer agarens egenskaber og egenskaber..

Pluripeptoner og gærekstrakt er kilden til næringsstoffer, hvorfra mikroorganismer tager kvælstof og mineraler, der er nødvendige for deres udvikling. Lactose og saccharose er energikilder til mikroorganismer, der er i stand til at fermentere dem..

Lysegrøn er det hæmmende stof, der forhindrer væksten af ​​Gram-positive bakterier og et stort antal gramnegative mikroorganismer..

Natriumchlorid giver mediet osmotisk stabilitet. Mens phenolrødt er pH-indikatoren, skifter den farve, når den detekterer produktionen af ​​syrer fra gæringen af ​​kulhydrater..

De ikke-fermenterende kolonier af lactose og saccharose vokser på dette medium i en lyserød eller gennemsigtig hvid farve på en rød baggrund. For eksempel bakterier af slægten Salmonella.

Mens laktose- eller saccharose-fermenterende bakterier, der er i stand til at vokse på dette medium, udvikler grøn-gule eller gul-grønne kolonier på en grøn-gul baggrund. For eksempel, Escherichia coli og Klebsiella pneumoniae.

Lysegrøn agar (BGA) varianter

Der er andre varianter af lysegrøn agar; Novobiocin Brilliant Green Glucose (NBG) Agar og Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose (NBGL) Agar.

Novobiocin Bright Green Glucose Agar (NBG)

Indeholder trypticase sojagar, jern-ammoniumcitrat, natriumthiosulfat-pentahydrat, fenolrød, glukose, lysegrøn, novobiocin og destilleret vand.

Det bruges til isolering af Salmonella-kolonier fra afføringsprøver.

I dette tilfælde er lysegrøn og novobiocin de hæmmende stoffer, der forhindrer væksten af ​​Gram-positive bakterier og nogle Gram-negative mikroorganismer..

Natriumthiosulfat er kilden til sulfid, og jerncitrat er kilden til jern, begge nødvendige for at afsløre produktionen af ​​hydrogensulfid gennem dannelsen af ​​et sort ferrisulfid bundfald..

Glukose er det fermenterbare kulhydrat, og phenolrødt er pH-indikatoren..

I dette medium udvikler Salmonella-kolonier sig store med et sort center omgivet af en rødlig glorie og efterfulgt af et klart synligt område. Nogle stammer af Citrobacter freundii producere kolonier identiske med Salmonella.

Novobiocin Brilliant Green Glycerol Lactose Agar (NBGL)

Dette medium indeholder trypticase-sojagar, jern-ammoniumcitrat, natriumthiosulfat, lactose, glycerol, lysegrøn, novobiocin og destilleret vand..

Forskellen mellem dette medium og det foregående er, at glucose erstattes af lactose og glycerol, og der anvendes ikke phenolrødt..

Mediet bruges også til at isolere Salmonella arter, kolonierne udvikler sort på grund af produktionen af ​​hydrogensulfid.

Kun kolonier, der ikke producerer syre fra glycerol eller lactose, opnår H-produktiontoDet er tilstrækkeligt, fordi den lave pH interfererer med dannelsen af ​​H.toS. Dette resulterer i farveløse kolonier for de fleste Proteus- og Citrobacter-arter..

Forberedelse

-Vej 58 gram af det kommercielt opnåede dehydratiserede medium. Føj det til en liter omdestilleret vand. Bland, lad det stå et par minutter og læg præparatet under en varmekilde, indtil det opløses helt..

-Autoklav ved 121 ° C i 15 minutter, overskrid ikke steriliseringstiden.

-Lad stå og server, mens det er varmt i sterile petriskåle. Den endelige pH skal være 6,9 ​​± 0,2.

-Lad det størkne og opbevares i køleskabet indtil brug. Før såning skal pladerne tage stuetemperatur.

-Det pulveriserede medium er grønt i farve og tilberedt har en orange-brun eller rødgrøn farve afhængigt af pH og det kommercielle selskab. En meget brun farve er tegn på, at agaren var overophedet..

-Når agaren er størknet, anbefales det ikke at omstøbes, da mediet forringes..

Anvendelser / applikationer

Dette medium bruges til at søge efter stammer af slægten Salmonella blandt afføringsprøver og mejeriprodukter..

Da det er et temmelig ugæstfrit miljø, tilrådes det at så en rigelig inokulum, hvis den direkte prøve anvendes. Ellers skal der foretages en forberigelse og berigelse af prøverne inden såning i dette medium..

Da nogle salmonellastammer hæmmes eller vokser med vanskeligheder, anbefales det at ledsage dette medium med anden selektiv agar til Salmonella.

Enhver koloni med en typisk Salmonella-egenskab skal underkastes biokemiske tests for at få den endelige identifikation..

QA

For at teste den gode præstation af det lysegrønne agarmedium kan ATCC-stammer bruges til at observere deres udvikling på det..

De hyppigste stammer, der anvendes til kvalitetskontrol, er: Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922,  Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

De første 3 skal give lyserøde eller gennemsigtige hvide kolonier på en rød baggrund. Salmonella med god udvikling og Proteus med dårlig eller regelmæssig vækst.

For Klebsiella og Escherichia forventes grønlige gule kolonier med en gul baggrund, og i tilfælde af Shigella og Staphylococcus bør de hæmmes.

Det dehydratiserede medium skal opbevares ved stuetemperatur på et tørt sted, fordi mediet er meget hygroskopisk.

Referencer

  1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo S.A. Strålende grøn agar. 2009
  2. Britannia Laboratory. Bright Green Agar. 2015..
  3. BD-laboratorium. BD Brilliant Green Agar. 2013.
  4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. (5. udgave). Argentina, redaktionelt Panamericana S.A.
  5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Bailey & Scott mikrobiologisk diagnose. 12. udgave Argentina. Redaktionel Panamericana S.A

Endnu ingen kommentarer