Malonat bouillonfundament, forberedelse og anvendelser

1705
Basil Manning

Det malonat bouillon Det er det flydende dyrkningsmedium, der anvendes til den diagnostiske test (malonat-test), der bruges til at differentiere nogle slægter af Enterobacteriaceae-familien. Det blev oprettet af Leifson i 1933 og senere modificeret af Ewing, der tilføjede en lille mængde dextrose og gærekstrakt til den originale formel..

Mediet er i øjeblikket sammensat af gærekstrakt, ammoniumsulfat, dikaliumphosphat, monokaliumphosphat, natriumchlorid, natriummalonat, dextrose og bromothymolblåt. Denne test er generelt inkluderet i det biokemiske identifikationsbatteri til Enterobacteriaceae, hvilket hjælper med at differentiere visse slægter og arter..

Grafisk gengivelse af den malonate test. A. Negativ test, B. (forsuring) Negativ test, C. (Medium alkalisering) Positiv test. Kilde: Color tubes publicdomainpictures.net

Malonattesten er hovedsageligt baseret på evnen hos nogle mikroorganismer til at bruge natriummalonat som deres eneste kulstofkilde og ammoniumsulfat som deres nitrogenkilde..

Malonat-testen er normalt positiv i nogle arter af slægterne Enterobacter, Klebsiella og Citrobacter. Mens de fleste arter af slægterne Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus og Providencia giver negativ reaktion.

Artikelindeks

  • 1 begrundelse
    • 1.1 Fortolkning
  • 2 Forberedelse
    • 2.1 Malonat bouillon
    • 2.2 Phenylalanin malonat bouillon
  • 3 Brug
    • 3.1 Fremgangsmåde
  • 4 Kvalitetskontrol
  • 5 Begrænsninger
  • 6 Referencer

Basis

Malonat-testen består i at vise de bakterier, der er i stand til at bruge natriummalonat som eneste kulstofkilde og ammoniumsulfat som en nitrogenkilde..

De fleste enterobakterier, der ikke bruger malonat, er i stand til at vokse i dette medium og tager dextrose og gærekstrakt som næringsstoffer..

I dette tilfælde vil ethvert forsøg på alkalisering ved anvendelse af peptoner modvirkes af produktionen af ​​syrer genereret ved fermentering af dextrose. Ligeledes fungerer dikalium og monokaliumphosphater som en buffer og opretholder pH på 6,7.

Derfor, når testen er negativ, forbliver bouillon den samme originale farve (grøn). I sjældne tilfælde kan mediet blive surt på grund af dextrose-gæring; uden brug af peptonerne og pH-indikatoren ville det dreje mediumets farve mod gul. For at dette kan ske, skal pH falde til 6.

Når denne test nu er positiv, siges det, at mikroorganismen anvendte henholdsvis malonat og ammoniumsulfat som kulstof- og nitrogenkilder uden at gøre brug af de andre komponenter..

I dette tilfælde bliver mediet alkalisk på grund af frigivelsen af ​​natrium og den deraf følgende dannelse af NaOH. I denne forstand vender pH-indikatoren (bromothymolblå) mediet farve fra grønt til blåt, når pH er lig med eller større end 7,6. Blå kan være lys eller intens (preussisk blå).

Endelig opretholder natriumchlorid mediumets osmolaritet, og vand er fortyndingsmidlet for alle komponenterne..

Fortolkning

Samme farve bouillon (grøn) - negativ test

Gul bouillon: negativ test

Lys eller dybblå bouillon: test positiv

Der er en variant kaldet phenylalanin malonat bouillon, også kaldet Shaw og Clarke's medium. I dette tilfælde kan to test analyseres, anvendelsen af ​​malonat som kulstofkilde og produktionen af ​​pyruvinsyre ud fra phenylalanin..

Forberedelse

Malonat bouillon

Antallet af gram, der er angivet af indsatsen fra det valgte kommercielle firma, vejes (det kan variere fra det ene til det andet). De vejede gram suspenderes i en liter destilleret vand. Varm lidt op, indtil den er helt opløst. Fordel 3 ml af mediet i 13/100 reagensglas med bomuldshætter..

Steriliseres i autoklave ved 121 ° C i 15 til 20 minutter.

Afkøles inden brug. Hvis de ikke skal bruges med det samme, skal de opbevares i køleskab indtil brug. Bring bouillon til stuetemperatur inden inokulering.

Mediets pH skal være 6,7 ± 0,2. Farven på det tilberedte medium er flaskegrøn.

Phenylalanin malonat bouillon

Afvej 11 g af det dehydratiserede medium og opløses i 1 liter destilleret vand. Resten af ​​præparatet er det samme som tidligere beskrevet.

Det kan også fremstilles ved at tilsætte 2 g / l phenylalanin til malonatvæskemediet, før det steriliseres..

Brug

Det bruges som en del af batteriet af biokemiske tests, der samles til identifikation af bakterier af Enterobacteriaceae-familien.

Hjælper med at skelne mellem:

-Slægten Klebsiella og Enterobacter (+) af slægten Escherichia og Serratia (-).

-Arten af Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salami og Salmonella enterica ssp diarizonae (+), af arten Salmonella enterica ssp enterica (-).

-Af slægten Klebsiella normalt (+) af slægten Actinobacillus (-).

-Det kan undertiden hjælpe med at differentiere slægter og arter af bakterier, der ikke tilhører Enterobacteriaceae-familien, såsom blandt ikke-gærende gramnegative stænger. Alcaligenes faecalis (+) og Acinetobacter sp (-).

Kilde: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.

Behandle

Under en lighter tages en del af en ren cologne ved hjælp af et korrekt steriliseret og afkølet platinahåndtag. Den udtagne prøve (let inokulum) opløses i malonatvæsken. Inkuber med låget løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

Malonat bouillon kan også inokuleres fra en 18-24 timers kultur i trypticase soja bouillon. I dette tilfælde tages 0,01 ml med en steril pipette, og malonat bouillon inokuleres. Inkuber med låget løst i aerobiose ved 35 ° C ± 0,2 i 24 til 48 timer.

I slutningen af ​​tiden fortolkes resultaterne. Ethvert spor af blå farve efter 48 timers inkubation skal betragtes som positivt. Testen skal ikke fortolkes som negativ, før den inkubationstid på 48 timer er udløbet..

I tilfælde af anvendelse af phenylalaninmalonatvæskevarianten fortolkes malonatet først, og derefter tilsættes 5 dråber 1 N HCI og 3-5 dråber 8% jernchlorid. En mørkegrøn farve fortolkes som en positiv test for phenylalanin. Hvis mediet tværtimod bliver lyseblåt, er testen negativ for phenylalanin..

QA

For at udføre sterilitetskontrol af mediet skal en eller to bouillon inkuberes ved 35 ° C ± 0,2 i 24 timers inkubation. Efter denne tid bør der ikke være uklarhed eller farveændring.

Kendte eller certificerede stammer kan bruges til kvalitetskontrol, såsom: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 og Escherichia coli ATCC 25922.

De forventede resultater er:

  • Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae Y Salmonella enterica ssp arizonae give positiv reaktion (halvblå farve).
  • For at Escherichia coli resultatet skal være negativt, dvs. det forventes, at der ikke sker nogen farveændring (grøn) eller at den bliver gul på grund af gæring af glukose.

Begrænsninger

Brug ikke bouillon, der viser uklarhed, udfældning, farveændring eller tegn på forringelse.

Referencer

  1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Mikrobiologisk isolering af Salmonella spp. og molekylære værktøjer til dets påvisning. Uninorte Health. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Tilgængelig på: scielo.org.co
  2. BBL. Malonate bouillon, Ewing modificeret. 2007. Fås på: bd.com
  3. Senna Laboratories. Malonato bouillon. Tilgængelig på: cientificasenna.com
  4. RenyLab. Malonato bouillon. 2013. Tilgængelig på: es.renylab.ind.br
  5. Mbiolog Diagnostics. Malonato bouillon. Tilgængelig på: mbiolog.com
  6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Mikrobiologisk diagnose. 5. udgave Redaktionel Panamericana S.A. Argentina.
  7. Conda Pronadisa Laboratories. Phenylalanin malonat bouillon. Tilgængelig på: condalab.com

Endnu ingen kommentarer